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小反刍兽疫N蛋白单克隆抗体的制备及竞争ELISA方法的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种危害严重的急性接触性传染病。为了检测血清中存在的抗PPRV的抗体,本研究利用纯化后的真核表达的PPRVN蛋白重组蛋白(rBacmid-PPRN)作为免疫原免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),并使用原核表达的PPRVN蛋白重组蛋白(rpET-PPRN)作为间接ELISA检测抗原,共筛选得到8株抗PPRVN蛋白的单克隆抗体(mAb)。其中1D5单抗腹水效价达1∶106,分泌单抗亚类为IgG2b。以1D5作为竞争抗体、纯化后的rpET-PPRN蛋白作为包被抗原,建立了检测小反刍兽疫血清抗体的单抗竞争性ELISA(c-ELISA)方法。所建立的c-ELISA方法能够特异性的区分牛瘟阳性血清和小反刍兽疫阳性血清,并具有较高的灵敏度和特异性。应用建立c-ELISA检测方法检测共129份山羊(Capra hircus)血清样品,与标准c-ELISA试剂盒的符合率为96.9%。本研究成功地建立了可特异性检测动物血清中抗PPRV抗体的竞争性ELISA方法,对小反刍兽疫的诊断、疫苗免疫水平的监控及控制其流行具有重要意义。 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是有包膜的RNA病毒。PPRSV的病毒粒子有6种包膜蛋白,主要是GP5蛋白和M蛋白,以及少量的GP2、GP3、GP4和E蛋白。GP5是重要的包膜蛋白,它与其它包膜蛋白一起参与PPRSV的形成与感染。在本试验中,为确定单独的GP5包膜蛋白在病毒侵入细胞过程中的作用,对GP5类病毒粒子的构型和感染力进行了研究。把表达GP5的质粒与带有小鼠白血病病毒(MulV)的逆转录病毒载体(pHIT60,编码MuLVGag-Pol基因;pHIT111,编码带有β-半乳糖苷酶报告基因的MuLV基因组)共转染293T细胞,使用超速离心法、蛋白质印迹及感染试验对培养基进行分析,观察到GP5包膜蛋白整合到MulV逆转录病毒载体上形成小鼠白血病的类病毒,这种类病毒能感染PAM和Mack-145细胞,并与野生型PRRSV有同样的寄主范围。该类病毒对PAM细胞的感染力可被PRSV或GP5蛋白特异性多克隆抗体有效中和。这些结果显示,GP5蛋白可能通过与寄主细胞受体相互作用,在病毒侵入细胞过程中起重要作用。GP5类病毒用于鉴别与GP5蛋白结合的细胞受体十分有用。 相似文献
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鉴于人H5N1亚型流感可能大规模流行及目前H5N1亚型流感病毒对抗病毒药物具有抵抗性,现急需一种新的有效的治疗方法。先前的研究结果显示,免疫单一的单克隆抗体可以防止H5N1亚型流感的感染,但其不能有效中和大范围的不同的H5N1亚型流感病毒毒株,也不能有效中和潜在的逃逸突变体。 相似文献
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对2株名为“PPRV-Sungri/96”和“PPRV-AR/87”的印度源小反刍兽疫疫苗毒的病毒特性及抗原特性进行了研究,包括病毒所引起的细胞病变类型、一步生长曲线、用18组单克隆抗体检测病毒抗原的抗原反应及针对H蛋白的单克隆抗体中和病毒的能力。令人惊讶的是,结果显示PPRV-AR/87株在Vero细胞中生长更快,并引起类型完全不同的细胞病变。PPRV-AR/87株的复制周期相对较短,只有21 h,没有明显的增殖隐晦期。然而PPRV-Sungri/96株的复制周期为74 h,细胞增殖隐晦期十分明显。在与18组单克隆抗体的间接ELISA反应中,2种病毒都显示出了很好的抗原相关性（r=0.823）,说明两者抗原相关性很近。与PPRV-Sungri/96株相比,PPRV-AR/87株与抗H蛋白的单克隆抗体4B11的中和反应很弱,且在夹心ELISA反应中与抗N蛋白的单克隆抗体的反应能力更弱。以上结果表明这2种疫苗毒可以通过细胞病变的类型及与单克隆抗体4B11的中和程度而加以区别。 相似文献
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有证据表明,TCR系统的多样性能促进CD8＋T细胞群对突变的病毒肽链的识别,因此能防止病毒逃逸免疫,起到保护机体的作用。然而,TCR系统多样性对CD8＋T细胞识别同源肽-MHC class I复合物（pMHC）功能的影响尚不清楚。在这篇文章中,作者比较了3种A型流感病毒的表位特异性CD8＋T细胞上的TCRβ链系统在C57BL/6（B6）小鼠中的作用,这3种TCRβ链系统分别是DbNP366-374、DbPA224-233和DbPB1-F262,DbPB1-F262是最近被研究出来的来源于流感病毒聚合酶B亚基（62～72个残基）＋1阅读框的表位。与不同的pMHCs抗原性相关,与显著残基的位置无关,DbPA224-233和DbPB1-F262的特异性系统有类似差异,然而DbNP366-374群的差异却很小。更为重要的是,对3种表位特异性反应的反应量级、细胞毒素、TCR亲和力和细胞因子产物的平行分析表明,增加T细胞系统的多样性对反应并没有明显功能性的影响。因此,虽然不同的TCR系统对于识别突变表位具有重要作用,但是它在识别同源pMHC中的影响相当小。 相似文献
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经鉴定,Apx毒素是猪胸膜肺炎的病原体—胸膜肺炎放线杆菌的重要毒力因子。在一些胸膜肺炎放线杆菌血清型中,Apx毒素是由apxⅢB和apxⅢD编码后经细胞膜分泌的。为了构建1株抗胸膜肺炎放线杆菌的活疫苗株,笔者将胸膜肺炎放线杆菌血清2型菌株-1536的apxⅢB和apxⅢD基因进行灭活,从而构建DeltaapxⅢB/DapxⅢD突变株(1536DeltaBDeltaD)。用活的1536DeltaBDeltaD胸膜肺炎放线杆菌对猪进行免疫后,能保护猪免于同源的野生型胸膜肺炎放线杆菌1536的攻击。因此,被损坏的Apx毒素分泌物可使胸膜肺炎放线杆菌的毒力减弱,并可作为开发胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗的有效策略。 相似文献
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文章重点阐述了越西杂交水稻生产现状及2014年中籼早熟水稻品种试验和分析。试验结果表明：9个杂交水稻中籼早熟品种,于2014年3月30日播种,9月13~19日成熟,生育期为168~174天,平均量产591.78kg/667m2,比对照增产的有7个品种,其中最高产量672kg,比对照增产27.5%;减产的有1个品种,其中最低产量488kg,减7.4%,各品种均能在海拔1650m的山区正常生长发育,2015年有两个品种通过四川省审定。 相似文献
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背景:SNPs的分型步骤包括指数扩增、等位基因辨别反应及产物检测。通常来说,等位基因辨别是在扩增之后进行。四引物PCR可以在扩增的同时进行等位基因的辨别,因此可以避免额外的基因分型反应。然而,迄今为止,电泳是唯一用于检测四引物PCR产物的方法。作者建立了一种不需要仪器在几分钟内就可以进行可视化检测四引物PCR产物的方法,该方法运被用于CYP2C19*2(c.681G>A)及CYP2D6*4(g.3465G>A)的基因分型。材料及方法:设计一对外引物扩增包括SNPs的片段。生物素化的内引物有3个错配的碱基以及一个缺失的碱基对,其与外引物一起指导双向扩增产生等位基因特异性的片段。扩增得到的产物主要同有poly(dA)尾的探针杂交并与DNA生物传感器结合,然后浸于适当的缓冲液中。当缓冲液沿着生物传感器移行的时候,杂交子在测试区被抗生素蛋白链菌素捕获,并且与oligo(dT)功能化的纳米金粒子相互作用导致红色线的出现。另外一条红色线在对照区出现用于指示传感器的本身作用。结果:基因分型结果表明,55份样品为CYP2C19*2,49份样品为CYP2D6*4。使用测序和电泳的方法对该方法的准确性进行证实。结论:该方法的独特... 相似文献