免疫磁珠技术分离猪胸膜肺炎放线杆菌   总被引：1，自引：0，他引：1  

张蓉蓉  梁望旺  方兵兵  邵华斌  徐涤平  何启盖 《畜牧兽医学报》2008,39(3):343-348

利用表达并纯化的胸膜肺炎放线杆菌保守外膜蛋白作为抗原,免疫家兔制备抗血清,并利用纯化后的IgG包被免疫微球,确定了包被磁珠所需的IgG浓度及包被时间,建立了利用免疫磁珠技术检测胸膜肺炎放线杆菌的操作流程。该方法能检测本室保存的胸膜肺炎放线杆菌的14个标准血清型,敏感性高于直接涂布平皿法,用此方法分离送检的20个疑似菌株,分离出10个菌株,与apxⅣ-PCR检测结果相比,符合率为100％。该方法也能从人工感染猪的肺和扁桃体回收到病原。用建立的免疫磁珠技术检测了从河南、湖南和湖北等地送检的病料,成功分离了5株可疑胸膜肺炎放线杆菌,经apxⅣ-PCR鉴定为胸膜肺炎放线杆菌。上述结果表明,建立的免疫磁珠技术可用于胸膜肺炎放线杆菌的分离。  相似文献   

湖北省部分地区鸭致病性大肠杆菌的分离与血清型鉴定   总被引：4，自引：0，他引：4  

罗玲  艾地云  杨峻  邵华斌  王红琳  温国元  罗青平  张蓉蓉 《中国家禽》2009,31(8)

鸭大肠杆菌病是一种急性败血性传染病,因而又名鸭大肠杆菌败血病[1].该病在临床剖检上主要表现为纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎.各种年龄的鸭均可感染,雏鸭最易感,2～6周龄多发,发病率和死亡率较高,在商品肉鸭中死亡率可高达50%左右,而且常常与鸭传染性浆膜炎混合感染,成年鸭和种鸭主要表现为零星死亡.随着养鸭业的日益发展和集约化程度的提高,鸭大肠杆菌病的发生日趋严重,给养鸭业造成了严重的经济损失[2].为弄清湖北省鸭场大肠杆菌病的流行情况及其致病性菌株的优势血清型、致病力等特点,我们对湖北省部分地区鸭场的大肠杆菌进行了分离与鉴定,并对分离株进行血清型鉴定和动物致病力试验,以便筛选出致病性大肠杆菌的优势血清型,从而为今后进一步制备灭活疫苗预防本地的大肠杆菌病提供科学依据.  相似文献   

弯曲杆菌多重PCR检测方法的建立     

张腾飞;詹丽超;罗玲;罗青平;艾地云;张蓉蓉;邵华斌 《湖北畜牧兽医》2013,(9):8-10

根据弯曲杆菌属细菌细胞致死性膨胀毒素cdtABC操纵子核酸序列,针对cdtA、cdtB、cdtC设计并合成了3对特异性引物,用于建立空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌和弯曲杆菌属细菌的多重PCR检测方法。试验证明,建立的多重PCR检测方法能鉴定弯曲杆菌属细菌,并区分出空肠弯曲杆菌和结肠弯曲杆菌。该方法具有较好的特异性与敏感性,适合在实验室对弯曲杆菌进行检测与鉴定。  相似文献   

禽腺病毒4型荧光定量PCR检测方法的建立与初步评估     

王国康  卢琴  贾妙妙  李丽  冯贺龙  邵华斌  罗青平  曾驰  温国元 《中国兽医杂志》2022,(2):22-26

为了对禽腺病毒4型(FAdV-4)引发的鸡心包积水-肝炎综合征的病原学监测和疫情诊断提供技术支撑，本研究经对部分发表在NCBI的禽腺病毒4型序列进行比对，在其六邻体基因上找到一段相对保守序列，并设计出PCR引物和TaqMan探针。以FAdV-4 HB1510株作为标准品，通过反应条件优化，建立了FAdV-4荧光定量PCR检测方法，并对其敏感性、特异性和重复性进行了分析。结果显示，该方法的灵敏度为10 EID₅₀/mL,为常规PCR方法的10倍；组内和组间重复性良好；与鸡减蛋综合征病毒、大肠杆菌等禽类病原的核酸无交叉反应。通过对65份临床样品进行检测，FAdV-4荧光定量PCR和常规PCR的检测符合率为90.7%。因此，FAdV-4荧光定量PCR的快速、敏感、特异等优点使其在禽腺病毒4型的早期检测及预防、控制等方面有较好的应用前景。  相似文献   

新城疫病毒Mukteswar株反向遗传平台的建立     

魏家阳  李丽  王国康  徐英英  曾哲  罗青平  邵华斌  温国元  商雨  潘兹书 《动物医学进展》2023,(2):30-35

为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统，根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物，扩增获得基因组片段，通过Overlap PCR和In-Fusion无缝克隆的技术，将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中，获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC-Mukteswar。将其和3个辅助质粒(pVAX-NP、pVAX-P和pcDNA-L)共转染至预先感染了痘病毒vTF7-3的BHK-21细胞，成功拯救出重组病毒rMukteswar。对rMukteswar的生长曲线、最小致死剂量的平均致死时间(MDT)等生物学特性进行测定，结果显示rMukteswar具有和野生株相似的增殖特性和毒力。成功建立了新城疫疫苗株Mukteswar的反向遗传操作系统，为研发高效率表达外源病原体蛋白的新城疫载体疫苗奠定了基础。  相似文献