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禽源性大肠杆菌HPI irp2基因序列的扩增及比较 总被引：5，自引：1，他引：4
从养殖场发病家禽中分离到多株禽源性大肠杆菌（Escherichia coli）,用其中YZG040515、NTLFC040402、CHZ031016菌株提取细菌高致病性染色体DNA,根据耶尔森菌高致病性毒力岛（HPI）irp2基因设计引物,用PCR扩增出278 bp基因片段。将PCR产物克隆到pGEM-T-easy中,经EcoR I酶切鉴定为阳性者进行序列测定。结果表明：该基因片段与GeneBank中公布的耶尔森菌HPI irp2基因的同源性高达98％以上。证明禽源性大肠杆菌中具有耶尔森菌毒力岛HPI基因序列,结合临床发病情况和流行病学,提示该毒力岛与日趋严重的家禽大肠杆菌病可能有一定的相关性。 相似文献
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为研究马立克氏病毒(MDV)编码的vlL8与病毒毒力的相关性,本研究用等剂量的3个不同毒力的MDV毒株(CVI988/Rispens株、GA株和RBIB株)对1日龄SPF雏鸡进行接种,接种后第4 d、7 d和10 d分别采集雏鸡的脾脏组织,提取总RNA.以鸡β-actin作为内参基因,用半定量RT-PCR法测定MDV vIL8和MDV gB 基因在接种后不同时间的表达情况,进而分析vIL8的表达量与病毒毒力的关系.结果显示:不同病毒株感染后检测的不同时间均有vIL8和gB的表达,vIL8的相对表达量大于0.25,gB大于0.17;vIL8表达量与病毒毒力呈正相关,毒力越强,vlL8表达量越高,这种现象在病毒接种后的4 d和10 d较为明显;在各个不同时期,vIL8的mRNA表达量均要比gB表达量高.结果表明,vIL8与MDV毒力有一定相关性,参与MDV-1的致病过程. 相似文献
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J亚群禽白血病病毒(ALV-J)ELISA检测方法的建立 总被引：2，自引：0，他引：2
利用抗J亚群禽白血病病毒（ALV—J）囊膜蛋白特异性单克隆抗体JE9，建立了检测ALV—J env抗原抗体免疫复合物的ELISA方法。应用该方法检测SPF鸡血清、鸡抗禽流感H9亚型阳性血清、鸡沙门氏菌阳性血清、鸡腺病毒阳性血清、鸡新城疫阳性血清．结果均为阴性，无交叉反应；抗ALV—J阳性血清与ALV—J特异性单克隆抗体JE9能相互阻断；ALV—J阳性血清经酸处理后，ELISA检测的D490差值明显下降。对部分攻毒鸡血清样本及田间ALV—J阳性血清样本进行电镜观察，可见ALV—J样病毒粒子及ALV—J样免疫复合物。经与间接免疫荧光（IFA）检测ALV—J env抗体结果比较表明，建立的ELISA方法与IFA方法两者具有较好的群体符合率，群体符合率为8／9。这些结果表明，本研究建立的ELISA方法在ALV—J的诊断中具有很好的应用前景。 相似文献
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抗禽流感病毒H5和H9亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制及应用 总被引：23，自引：0，他引：23
以禽流感题H5和H9亚型病毒分别免疫Balh／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0的骨髓瘤细胞融合，用血凝抑制试验(HI）检测细胞培养上清，结果获得了6株特异性单克隆抗体，其中抗禽流感题亚型病毒血凝素特异性单克隆抗体细胞株3株，分别命名为4B6、4A3、3H1；抗H9亚型病毒血凝素单克隆抗体细胞株3株，命名为6E6、6B6和5B4。这些单克隆抗体小鼠腹水HI效价为2^13-15，细胞培养上清抗体HI效价为2^7-8。研究结果表明，所有这些单克隆抗体仅与试验的相应题或ID亚型病毒株发生特异性反应，而不能与鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒、鹅腺病毒和鸡产蛋下降综禽征病毒(EDS76)等反应。实验室检测结果证明，应用这些单克隆抗体能在24h内迅速检测出相应的禽流感病毒。所有这些单克隆抗体将在禽流感的预警预报工作中发挥重要作用。 相似文献
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应用RT-PCR方法从鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)JS株中扩增出VP2基因,并克隆入T-easy载体。序列测定分析结果表明IBDVJS株的VP2基因与国际标准强毒株的核苷酸序列同源性达98%,氨基酸序列同源性达99%以上。随后将VP2基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1/zeo( ),构建成功真核表达质粒pcD-VP2,pcD-VP2体外转染COS-1细胞,能在COS-1细胞中表达。利用pcD-VP2质粒进行动物实验,结果表明雏鸡免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,pcD-VP2的真核表达质粒二次免疫诱导鸡产生对IBDV强毒攻击的保护率为67%,这一结果提示VP2基因具有重要开发应用价值。 相似文献
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马立克氏病病毒类白细胞介素8(vIL-8)的生物趋化作用 总被引：1，自引：0，他引：1
利用杆状病毒表达系统,将病毒源性趋化因子病毒类白细胞介素8(vIL-8)基因克隆入转移载体pFastBacI,然后转化到DH10Bac感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组,通过重组子转染Sf9细胞得到含vIL-8的重组病毒rBacvIL-8。间接免疫荧光试验和雏鸡T、B淋巴细胞生物趋化分析结果表明,vIL-8在昆虫细胞中得到了表达,重组vIL-8在一定浓度范围内,可使鸡T、B细胞发生趋化作用,最高趋化指数分别为3.31±0.50和4.02±0.48,且是典型剂量依赖的钟形趋化性反应曲线;进一步分析发现vIL-8对B细胞趋化活性较对T细胞强?P<0.05),提示vIL-8对靶细胞的趋化性与病毒感染过程相关,在早期溶B细胞感染中有重要作用。 相似文献
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旨在制备鸡细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的特异性单克隆抗体,为家禽免疫检查点和疫苗研发提供有益制剂。利用杆状病毒表达系统体外表达鸡的CTLA-4蛋白,以其为免疫原免疫8周龄Balb/c小鼠,经B淋巴细胞融合技术制备、筛选出针对鸡CTLA-4蛋白的单克隆抗体。通过间接免疫荧光、蛋白免疫印迹、流式细胞术等方法分析抗CTLA-4单克隆抗体的生物学特性。结果显示：构建了在Sf9昆虫细胞中表达CTLA-4蛋白的重组杆状病毒,成功筛选出3株能稳定分泌抗鸡CTLA-4蛋白的单克隆抗体,分别命名为：mAb-CTLA4-3D7、mAb-CTLA4-5A4、mAb-CTLA4-6A12。亚类鉴定表明,mAb-CTLA4-3D7为IgG2a, Lambda链;mAb-CTLA4-5A4为IgG3,Kappa链;mAb-CTLA4-6A12为IgG2a, Kappa链。3株单克隆抗体均能与转染真核表达质粒pCAGGS-CTLA-4-Flag的DF-1细胞和感染重组杆状病毒rBac-CTLA-4的Sf9昆虫细胞反应。单克隆抗体mAb-CTLA4-3D7与鸡的PBMC有较好的结合活性,且能与CD3<... 相似文献
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鹧鸪鸡伤寒沙门氏菌感染的诊断与防治 总被引：1，自引：0，他引：1
某鹧鸪养殖场饲养10 000只鹧鸪,240日龄发病,临床症状表现为病鹧鸪采食量突然下降,精神不振、羽毛蓬松杂乱、粪便呈稀白色,病程持续近一个月,死亡鹧鸪约200只.共送检30只,剖检病理变化主要为肝肿大、质地极脆易破裂,其中60%肝呈土黄色,20%血液稀薄,80%盲肠内有硬泥块样物质,20%眼周皮下水肿,30%肾肿大、有出血,30%泄殖腔有白色粪便.根据病史调查、症状观察、病理剖检、细菌分离以及染色镜检、生化试验、血清型鉴定一系列试验,诊断为由鸡伤寒沙门氏菌感染所引起的细菌性疾病.同时根据药敏试验结果对发病群进行治疗,使病情得到迅速控制,为该病的防治积累了一定的经验. 相似文献