抗禽流感病毒H5亚型血凝素特异性单克隆抗体的研制   总被引：18，自引：0，他引：18  

邵红霞  秦爱建  钱琨  刘岳龙  金文杰 《中国动物检疫》2002,19(8):21-23

以禽流感H5亚型病毒免疫Ballb/c小鼠，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，用血凝抑制试验检测细胞培养上清，结果获得3株阳性细胞株，分别命名为4B6、4A3、3H1。经2次亚克隆后，100％杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感病毒H5亚型抗体的能力。实验证明，所有这3株单克隆抗体仅与试验的H5病毒株反应，而不能与禽流感H9亚型病毒、鸡新城疫病毒、鹅新城疫病毒和鹅腺病毒等反应。间接免疫荧光试验检测结果表明这3株单克隆细胞的培养上清均能与感染H5亚型病毒的成纤维细胞呈现亮绿色荧光。  相似文献   

致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌的分离与16SrDNA的鉴定     

钱琨  张永志  金文杰  邵红霞  秦爱建 《中国家禽》2011,33(14)

从鹅卵黄性腹膜炎临床病例中采集样品,分离病原进行一系列生化鉴定,共分离得到7株致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌,编号为E0238、E0239、E0240、E0453、E0454、E0241、E0245。O血清型鉴定分属于O2、O21、O37、O1、O24、O24、O148。利用16SrDNA扩增试剂盒对随机选取的3株细菌进行PCR扩增,并将PCR产物序列与GenBank中的E.coli16SrDNA进行序列比对,结果显示分离细菌与大肠杆菌的同源性达99%以上。  相似文献   

J亚群禽白血病病毒囊膜蛋白胞浆区酪氨酸基序及其变体的表达     

范中雷  田晓彦  邵红霞  秦爱建  金文杰  钱琨  叶建强 《中国家禽》2014,36(20)

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白Env被认为与其致病致瘤密切相关,然其分子基础尚不清楚.在Env胞浆区发现免疫及肿瘤疾病发生相关的酪氨酸基序(YxxM、ITIM、类ITAM)基础上,研究对GenBank中不同ALV-J毒株Env进行了统计分析.结果发现,34.7％ ALV-J毒株Env仅存在ITIM,63.9％ALV-J毒株Env同时具有ITIM以及YxxM,1.4％ ALV-J毒株Env具有YxxM以及类ITAM.同时,还构建了JS-NT以及4817毒株Env相应酪氨酸变体表达质粒,并在DF1细胞中获得了良好的表达.这些发现及构建的表达质粒,为进一步研究ALV-J Env在ALV-J致病致瘤中的作用及其分子机理奠定了基础.  相似文献   

鸡高迁移率族蛋白B1真核表达载体的构建及鉴定     

高爱俊  钱琨  朱明月  张娜  邵红霞  金文杰  秦爱建 《中国家禽》2014,(2)

为构建鸡高迁移率族蛋白B1(Chicken high mobility group B1 protein,chHMGB1)真核表达载体,并在真核细胞中进行暂态表达和鉴定。研究酶切回收含有鸡高迁移率族蛋白全长基因的PGEM-chHMGB1质粒,将chHMGB1全长与pcDNA3.1(+)载体连接构建pcDNA-chHMGB1全长重组表达质粒。将其质粒采用脂质体转染293T细胞,进行暂态表达,利用Western blotting和间接免疫荧光法对表达的蛋白进行鉴定。结果显示,pcDNA-chHMGB1重组表达质粒克隆片段大小正确,瞬时转染293T细胞,Western blotting在细胞浆和培养上清中同时检测到相对分子量约为30 ku的目的条带;利用chHMGB1特异性抗体进行IFA试验可以检测到目的蛋白的表达。本研究成功构建了鸡高迁移率族蛋白B1的真核表达载体pcDNA-chHMGB1,并且在真核细胞中得以有效表达,从而为进一步研究chHMGB1蛋白的生物学功能提供生物材料。  相似文献   

SPF鸡新城疫非特异性HI抗体的血涂片鉴别研究     

张泉  邵红霞  翟国勤  王珍  陈兵  薛整风 《中国家禽》2008,30(24)

试验以某SPF鸡场的30份HI抗体效价疑似阳性血清为研究对象,建立了快速准确的血涂片鉴别诊断法。以间接免疫荧光法进行验证,结果提示血涂片法与间接免疫荧光法的结果完全一致,证明了血涂片法可以用于新城疫非特异性HI抗体的鉴别诊断,具有简单、方便的优点。  相似文献   

苹果全基因组多聚半乳糖醛酸酶基因家族的鉴定及进化分析     

陈鸿飞  邵红霞  樊胜  马娟娟  张东  韩明玉 《园艺学报》2016,43(10):1863-1869

从苹果全基因组中鉴定出85个多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因,通过聚类分析将其分成了7个组(Group A~Group G),其分子量在176~1 125 aa之间,等电点在4.68~9.58之间。鉴定出来的Md PG基因除在14号染色体没有分布外,其余都有分布。系统分析了Md PG蛋白的保守基序和Md PG基因结构,发现苹果PG蛋白除包含有广泛存在于各种PG蛋白的4个保守基序以外,还含有其他相对特异的保守基序,Md PG75具有最多的外显子数,达到18个。对85个苹果PG蛋白之间的功能联系网络进行了系统研究,分析预测了相关基因的功能和多个基因间功能的联系,并作了初步验证。  相似文献   

鸡传染性贫血病毒VP2蛋白单克隆抗体的研制及其识别抗原表位的鉴定     

汪铭锐  吴俊花  王飞  邵红霞  钱琨  叶建强  秦爱建 《畜牧兽医学报》2022,53(2):597-606

拟制备针对鸡传染性贫血病毒(CIAV) VP2蛋白的单克隆抗体(mAb),为CIAV的诊断和病毒生物学特性研究提供有用制剂.以PCR技术扩增CIAV VP2基因并克隆到原核表达载体pET-32a中,经IPTG诱导表达.以原核表达的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术研制并筛选分泌抗CIAV VP2蛋白mAb的阳...  相似文献   

血凝素蛋白145位潜在糖基化位点对H9N2禽流感病毒生物学特性的影响     

王娅娟  王飞  吴锦森  万志敏  邵红霞  钱琨  叶建强  秦爱建 《中国动物传染病学报》2023,(5):1-6

从某肉鸡场分离的A/Chicken/Jiangxi/106/2012(H9N2)(JX106)毒株,其HA蛋白在145位氨基酸由S突变为N,使得在该处增加了一个潜在的糖基化位点NGT。本研究以JX106为研究对象,通过反向遗传操作获得重组病毒rgJX106-HA145N和rgJX106-HA145S。利用不同方法探究了HA蛋白145位糖基化位点对病毒的毒力、复制、受体亲和力和致病性等方面的影响。研究发现,rg JX106-HA145N和rg JX106-HA145S在A549细胞上的复制、对鸡胚的感染力无明显差异,而HA蛋白145位无糖基化位点的rg JX106-HA145S与α2,6-唾液酸受体的亲和力更强,在小鼠肺脏中复制更快、致病力更强且能产生更高的交叉HI效价,这一结果提示流感病毒血凝素的糖基化对病毒诱导的体液免疫具有重要影响。  相似文献   

禽白血病抗原快速检测试纸条的研制及初步应用     

梁有志  尹丽萍  杭柏林  钱琨  金文杰  邵红霞  秦爱建 《中国家禽》2012,34(14):15-19

禽白血病给养鸡业带来极大损失,目前检测该病病原的方法主要有ELISA、PCR及RT-PCR、原位杂交(ISH)、间接免疫荧光(IFA)等。本研究应用2株抗禽白血病病毒(ALV)p27蛋白特异性单克隆抗体5D3和4F12研制了ALV快速检测试纸条。结果证明该试纸条具有良好的特异性,与H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、马立克氏病病毒、小鹅瘟病毒、鸡贫血病病毒没有交叉反应;采用p27表达蛋白检测试纸条灵敏性,检测下限达到70ng/mL;应用该试纸条检测71份临床样品,与商业ELISA试剂盒检测结果比较,二者符合率达到93%。该试纸条的研制,为基层快速检测ALV提供了条件。  相似文献   

鸡β2-微球蛋白的基因克隆与原核表达     

徐文财  刘秋  李旦  胡序明  吴庚华  钱琨  邵红霞  金文杰  秦爱建 《中国兽医寄生虫病》2014,(1):63-68

本研究通过RT-PCR从正常鸡外周血淋巴细胞总RNA中扩增chβ2m 基因全长片段，然后将其克隆至原核表达载体pET-32a（＋），转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG对其进行诱导表达，利用HiTrap亲和柱对表达产物进行纯化。结果显示，采用RT-PCR扩增出chβ2m基因全长约360 bp，编码120个氨基酸，与基因库公布的相一致，同源性为100%；经0.8 mM IPTG诱导表达后，SDS-PAGE分析发现chβ2m融合蛋白主要以可溶性形式存在于细菌裂解上清；利用His标签纯化该蛋白， SDS-PAGE分析仅见约34 kDa大小的chβ2m融合蛋白条带；Western-blot分析表明，纯化后的chβ2m融合蛋白与特异单克隆抗体反应呈现特异性的条带。以上结果证实，本研究成功表达并获得了纯化的可溶性chβ2m融合蛋白，为进一步对chβ2m结构及其功能研究奠定基础。  相似文献