洛阳地区鸡肉中单增李斯特菌毒力基因的分布研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

贾艳艳  何雷  郁川  李静  程相朝  张春杰  李银聚 《河南农业科学》2015,(1):135-138

为分析鸡肉中单增李斯特菌毒力基因的分布特征,从洛阳地区市售鸡肉中分离18株单增李斯特菌,血清凝集试验确定其血清型,然后采用PCR方法对inl A、inl B、virR、dlt A、dlt B、dlt C、dlt D及mpr F等8个毒力基因进行检测。结果显示,18株分离株血清型均为1/2型,且有9株具有全部毒力基因,其中inl B、dlt A、dlt B基因全部呈阳性,inl A、virR、dlt C、dlt D、mpr F存在缺失现象,其检测率分别为88.9%(16/18)、94.4%(17/18)、83.3%(15/18)、88.9%(16/18)、83.3%(15/18)。毒力基因缺失与血清型相关性分析结果显示,不同血清型缺失基因呈多样性。表明这8个毒力基因在市售鸡肉的单增李斯特菌中普遍分布。  相似文献   

表达NDV HN和IBDV VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌的构建及其生物学特性分析     

贾艳艳  刘莎莎  丁轲  何雷  余祖华  李静  郁川  廖成水  程相朝  李银聚  殷月兰  张春杰 《中国预防兽医学报》2019,(6):567-572

为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌,并分析其生物学特性。本研究扩增了NDVHN和IBDVVP2主要抗原基因片段,通过重叠延伸PCR扩增获得HN-VP2融合基因,构建重组质粒pYA-HN-VP2,将该重组质粒电转化至减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd中,获得表达HN-VP2融合蛋白的减毒重组菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd(pYA-HN-VP2),并分析其生化特性、遗传稳定性和毒力等生物学特性。Westernblot结果显示,重组减毒沙门菌可分泌表达HN-VP2融合蛋白,大小为84ku,且该融合蛋白分别能与相应特异性阳性血清发生反应;生物学特性结果显示,重组菌株失去了利用麦芽糖、山梨醇及乳糖等碳源的能力,其生长速度显著慢于野生菌株SL1344;毒力较野生菌株至少下降5个对数单位,且能够稳定遗传重组质粒pYA-HN-VP2。本研究为鸡新城疫-传染性法氏囊病-沙门菌病的三联口服疫苗研制奠定重要基础。  相似文献   

鸡源DJ-1蛋白的原核表达及多抗血清的制备     

范忠军  郁川  孙薇薇  杭柏林  钱锟  秦爱建 《中国家禽》2012,34(11):32-35

为了进一步研究DJ-1蛋白在J亚群禽白血病病毒感染中的生物学作用,本研究从DF-1细胞的cDNA中扩增DJ-1基因编码区,并克隆入pET-32a载体进行原核表达。结果表明:表达的重组蛋白以可溶性形式存在,最佳表达条件为IPTG终浓度为0.4mmol/L,37℃诱导3h;ELISA和Western结果证明融合蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的多抗血清具有良好的特异性和反应性。本试验中鸡源DJ-1蛋白及小鼠多抗血清的获得,为后期DJ-1蛋白功能性研究提供了实验材料。  相似文献   

鼠伤寒沙门菌SL1344株cAMP受体蛋白基因缺失株的构建及其生物学特性     

廖成水  程相朝  赵战勤  张春杰  李银聚  吴庭才  郁川  王晓利  胡阿勇 《中国兽医学报》2011,31(12)

通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,构建鼠伤寒沙门菌SL1344株的crp基因缺失疫苗候选菌株,并对其生物学特性进行初步研究。首先构建含缺失321bp crp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp,然后利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选SL1344的Δcrp缺失株,用PCR鉴定结果表明该缺失株构建成功。生物学特性研究发现,缺失株ΔcrpSL1344保留了亲本菌株SL1344的血清型1,4,5,12：i：1,2,且能够稳定遗传缺失321bp的crp基因;但是,与亲本株SL1344相比,其生化特性发生明显改变,生长速度明显减慢。缺失株ΔcrpSL1344口服感染1日龄雏鸡的LD50为7.40×109 CFU,毒力较亲本株SL1344降低32 456倍。以上研究结果表明,SL1344株crp基因缺失株构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,为进一步将其开发为鼠伤寒沙门菌弱毒疫苗候选菌株奠定基础。  相似文献   

gga-miRNA-155对MDCC-MSB1细胞增殖的影响     

余祖华  丁轲  郁川 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2019,47(2):1-6

【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga-miRNA-155,并将其克隆入pMD-18T载体,构建克隆载体pMD-18T-pre-gga-miRNA-155。用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA真核表达载体和pMD-18T-pre-gga-miRNA-155,将pre-gga-miRNA-155酶切回收片段与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA的酶切回收片段进行连接,构建重组真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,对其进行PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定。将重组载体转染到MDCC-MSB1细胞中,应用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)检测gga-mi-RNA-155的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】PCR扩增获得了长度约154bp的鸡pre-gga-mi-RNA-155基因。成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,瞬时转染MD-CC-MSB1细胞后gga-miRNA-155表达水平显著增加,且MDCC-MSB1细胞的体外增殖能力增强。【结论】成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体,其可在MDCC-MSB1细胞中过表达gga-miRNA-155,且可促进MDCC-MSB1细胞的体外增殖。  相似文献   

细胞自噬与胞内病原体感染相互作用的研究进展     

李静  李小康  何雷  贾艳艳  余祖华  郁川  陈松彪  颜云飞  张春杰  程相朝  李银聚  吴庭才 《中国畜牧兽医》2014,41(9):265-268

作为先天性免疫的一部分,自噬在胞内病原体感染过程中发挥着“双刃剑”的作用,一方面自噬可抑制、消灭胞内感染病原体,保护机体免受病原体的侵害;另一方面一些胞内病原体可抑制、阻断自噬的发生或成熟,甚至利用自噬逃避机体的免疫机制,利于其在体内的存活、增殖。作者从细胞自噬与胞内病原体之间的相互关系着手,对自噬在胞内病原体感染过程中所发挥的作用进行综述。  相似文献   

猪霍乱沙门氏菌C78-1株Δcrp缺失株的构建及其生物学特性初步研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

郁川  程相朝  赵战勤  张春杰  李银聚  吴庭才 《畜牧兽医学报》2010,41(5)

通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌C78-1基因组为模板进行PCR,扩增出crp基因上下游片段(1 048和1 743 bp),并分别将其克隆入自杀性质粒pRE112上,构建含缺失320 bpcrp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp。运用重组自杀性质粒介导的等位交换技术,两步法筛选C78-1的Δcrp缺失株。进一步的生物学特性研究表明,缺失株的血清型与亲本菌株C78-1一致,且能够稳定遗传缺失的crp基因,但其生化特性和生长速度与C78-1相比发生明显改变,小鼠致死性试验结果表明其毒力较C78-1降低约750倍。以上结果均证实,作者成功构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株的crp基因缺失突变株,缺失株遗传稳定,毒力显著降低,为进一步开发猪霍乱沙门氏菌的弱毒疫苗菌株奠定了基础。  相似文献