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【目的】研制高效的猪基因工程干扰素制剂用于猪病毒性和肿瘤性疾病的防治。【方法】采用重叠延伸PCR（splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR）技术将PoIFN-α、PoIFN-β和PoIFN-γ成熟肽基因进行连接,形成3种融合基因PoIFN-α/β、PoIFN-α/γ和PoIFN-β/γ,并构建到原核表达载体pET30a进行融合表达,用细胞病变抑制试验和淋巴细胞转化试验测定融合蛋白rPoIFN-α/β、rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ的生物学活性,同时与非融合干扰素rPoIFN-α、rPoIFN-β和rPoIFN-γ进行比较分析。【结果】成功构建了3种融合基因,并在大肠杆菌中实现表达,经纯化、复性得到3种具有生物学活性的融合蛋白rPoIFN-α/β、rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ。细胞病变抑制试验结果表明,无论是在Marc-145还是在PK-15细胞上,3种融合蛋白均具有较强的抗病毒活性,其抗PRRSV或VSV活性明显高于非融合的rPoIFN-α、rPoIFN-β和rPoIFN-γ,体现出一定的叠加效应;MTT法检测淋巴细胞转化试验结果显示,rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ能有效刺激淋巴细胞转化,具有良好的免疫学活性;而rPoIFN-α/β效果不明显。说明Ⅰ型与Ⅱ型PoIFN之间能协同调节免疫,而Ⅰ型的不同亚型之间无明显协同作用。【结论】3种融合干扰素具有较强的抗病毒活性,可以用于猪病毒性和肿瘤性疾病的防治,其中rPoIFN-α/γ和rPoIFN-β/γ还具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂。 相似文献
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为了建立一种快速鉴别检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株的病原学方法和掌握洛阳市PEDV变异毒株的流行规律,试验根据GenBank中PEDV变异毒株的特异性序列设计引物,通过优化退火温度、模板添加量、引物添加量建立PEDV变异毒株一步法RT-PCR鉴别检测方法,并分析了该方法的特异性、敏感性和重复性;同时应用该方法检测采集自洛阳市的251份临床样品,并对不同地区、不同年份、不同养殖模式的检测结果进行比较分析。结果表明：优化后的退火温度为51℃,模板添加量为5μL,引物添加量为0.5μL;该方法对PEDV变异毒株能够扩增出550 bp特异性条带,而检测的PEDV经典毒株、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)均为阴性;对PEDV变异毒株RNA的最低检测限达到0.74 ng,对3份PEDV变异毒株阳性病料和3份PEDV变异毒株阴性病料重复检测3次的结果完全一致;检测采集于洛阳市251份临床样品的平均阳性率为29.48%,其中不同地区阳性率... 相似文献
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胶体金免疫层析法在猪瘟强、弱毒抗体检测上的应用 总被引：5，自引：0，他引：5
猪瘟兔化弱毒株（HCLV）E2基因插入到原核表达质粒pET30a（＋）中,以BL21（DE3）为表达宿主,表达蛋白纯化后用作弱毒抗原;将猪瘟病毒（HCV）强毒株用PK15细胞培养48 h,破碎后进行蔗糖密度梯度离心,吸取30%～35%梯度之间的条带,纯化后用作强毒抗原,然后用胶体金标记强弱毒抗原.运用双抗原夹心法于国内首先建立了HCV抗体检测的免疫层析试纸条,该试纸条的建立在典型猪瘟标记疫苗的研制与应用上具有重要的血清学鉴别功能,对于监测猪瘟病毒的流行情况和疫苗免疫情况及制定免疫程序具有重要作用.同时该方法还具有操作简单、灵敏度高、特异性好、能区分强弱毒感染等特点,适合猪瘟的临床诊断. 相似文献
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从20份疑似猪败血型和神经型链球病的病料中分离到12株细菌，通过培养特性、菌落形态、染色特性、生化试验及斑清学试验确定为C群静医链球菌7株．D群猪链球菌5株。药敏试验证明分离菌对先锋霉索、阿米卡星敏感，经临床应用效果觑好。用分离菌株研制成二价氢氧化铝胶灭活苗能有效地预防猪链球菌病。 相似文献