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猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种高度传染性疾病,临床上表现为母猪发热、厌食、流产,产死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍,以及仔猪呼吸道病症状和高死亡率.1991年荷兰中央兽医研究所首次分离并命名为Lelystad的新病毒(LV),经鉴定为PRRSV.随后,欧、美、日学者相继分离ATCC VR-2332、IAF-exp91和IAF-klop等毒株,1992年5月,首届SIRS/PRRS国际研讨会,将此类疾病统称为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS).目前,PRRS遍及全球,成为危害养猪业最重要的传染病之一,被国际兽疫局(0IE)认定为B类传染病,给世界养猪业造成了巨大的经济损失,至今未找到根除PRRS的有效方法. 相似文献
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采用RT-PCR方法扩增猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)临床分离株的M基因(525 bp),通过设计4对引物,把M蛋白分成4段K1(78-112)、K2(98-131)、K3(118-153)、K4(139-174),分别扩增相应基因M1、K1、K2、K3和K4,连接pET-32a(+)表达载体,经鉴定后转化Escherichia coliBL21,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot检测结果显示,分别在相对分子质量30.8×103和24.4×103位置出现目的条带,重组蛋白均可与阳性血清发生特异反应。将蛋白M1免疫BALB/c小鼠,于第三次免2周后从小鼠脾脏分离淋巴细胞,分别用K1、K2、K3、K4蛋白进行体外刺激。流式细胞仪检测分泌IFN-γ细胞因子的T细胞的频率,K1蛋白刺激组显著高于其他组和对照组(P≤0.01)。结论:M1蛋白K1(78-112)段为T细胞表位优势区。 相似文献
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参照GenBank已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型代表株VR-2332的ORF6(M蛋白)基因序列,设计1对引物,扩增大约420 bp的基因片段,建立检测PRRSV的RT-PCR方法,同时应用该方法对PRRSV美洲毒株、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)及空白对照进行检测。结果显示,除PRRSV外,CSFV、PRV、PCV及空白对照的检测结果均为阴性。将250μL细胞培养的PRRSV提取RNA后,依次稀释成10-1～10-8,均能扩增出明显的目的条带;且多次重复均能得到一致的结果。表明本研究建立的RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、重现性好的优点。用此方法对信阳市10县区疑似PRRS病例进行临床检测,检测病料478份,检出阳性病料265份,阳性率为55.4%。 相似文献
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蜂素信号肽介导猪干扰素-γ在杆状病毒中分泌表达及抗病毒活性检测 总被引：1，自引：0，他引：1
应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟的猪干扰素-γ基因插入供体质粒pFastBacTM1polyhedrin启动子控制下的多克隆位点,引入昆虫细胞可识别的蜂素信号肽(Honeybee melittin signal peptide)取代猪干扰素-γ原有信号肽以实现在昆虫细胞中分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭载体质粒,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。重组蛋白通过SDS-PAGE、间接免疫荧光、Western-blot证明在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中获得分泌表达。通过在猪肾细胞(PK-15)上抑制水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性是1.38×106U/mL。 相似文献
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应用RT-PCR技术,直接从成年麻鸭脾淋巴细胞提取的总RNA中扩增出麻鸭γ-干扰素基因(duIFN-γ),并克隆、测序。测序结果表明,麻鸭IFN-γ全序列大小为515 bp,包含一个完整阅读框(495 bp),编码164个氨基酸残基,推导的氨基酸有3个潜在的N-糖基化位点,有5个与二硫键形成有关的半胱氨酸。麻鸭IFN-γ基因序列与AF087134、AF100929、AJ012254的序列完全一致,而与北京鸭(AY166850)核苷酸同源性为99.6%,有2个碱基差异,为非同义突变,氨基酸同源性为98.8%。麻鸭IFN-γ基因与鸡、火鸡和鹌鹑IFN-γ基因核苷酸序列同源性分别为77.2%、78.0%、78.8%,氨基酸序列同源性均67.1%,而与人、狒狒、猪、牛、绵羊、犬、猫IFN-γ核苷酸序列同源性为39.7%～42.1%,氨基酸序列同源性在28.0%～31.7%之间。 相似文献