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为了确定鸡艾美耳球虫（Eimeria）不同种以及来自不同地区同种不同株之间的亲缘关系,研究其分类地位,对实验室保藏的柔嫩艾美耳球虫（Etenella）、毒害艾美耳球虫（Eneeatrix）、巨型艾美耳球虫（Emaxima）、堆形艾美耳球虫（Eaaervulina）等4种15株鸡球虫孢子化卵囊的18SrDNA基因进行克隆、测序,并与从GenBank下载的鸡球虫18SrDNA序列一起,使用软件DNAstar 5．0 MegAlign进行系统发育分析。结果显示,4种艾美耳球虫种间同源性在94．6％～99．4％之间,7株柔嫩艾美耳球虫的株间同源性在99．0％-99．9％之间,5株巨型艾美耳球虫的株间同源性在96．9％～99．8％之间。用该4种鸡球虫的18SrDNA序列与GenBank下载的另外4种鸡球虫18SrDNA序列构建系统发育树,显示这8种鸡艾美耳球虫形成2个分支,即堆形艾美耳球虫（EASH）、巨型艾美耳球虫（EMSH）、变位艾美耳球虫（Emivati）、和缓艾美耳球虫（Emitis）、布氏艾美耳球虫（Ebrunetti）、早熟艾美耳球虫（Epraecox）构成1个分支,柔嫩艾美耳球虫（ENSH）、毒害艾美耳球虫（ETAS）构成另1分支。巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫各株的系统发育树均根据地域关系产生2个分支。柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫的亲缘关系较近,不同地理区域的同种不同株的亲缘关系相对较远,种间和种内的鉴定结果与普通生物学结果一致。本研究提示18SrDNA基因可用于鸡球虫不同种／株的分类鉴定,为艾美耳球虫分子遗传学鉴定提供了理论基础。 相似文献
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柔嫩艾美耳球虫抗马杜拉霉素、地克珠利虫株特异消减文库的构建 总被引：8，自引：0，他引：8
以遗传背景一致的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株孢子化卵囊为驱动组，马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊为试验组，利用抑制消减杂交（SSH）方法，通过两轮杂交和两次PCR分别构建了富含两个抗药株孢子化卵囊与敏感株孢子化卵囊之间差异表达基因的消减cDNA文库。随机从两个消减文库中分别挑取50个克隆，经PCR鉴定马杜拉霉素抗药株和地克珠利抗药株孢子化卵囊的消减文库重组率分别为96%和98%，差异基因片段大小分布在250 bp～1.0 kb之间。从每个文库中随机挑取65个阳性克隆经斑点杂交试验，分别选择表达量上调的6个克隆进行序列分析和同源性比较。结果发现，有4个cDNA片段可能是新基因片段，与地克珠利抗药株的产生有关；有3个新的cDNA片段可能与马杜拉霉素抗药株的产生有关。这些结果将为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生及发展的分子机理奠定了一定的基础。 相似文献
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为研究壳寡糖对柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡免疫效果的影响,本研究先通过笼养试验筛选壳寡糖的有效剂量,再在平养试验中考察免疫期间鸡只体重、攻虫后的抗球虫指数(Anticoccidial index, ACI)以及血清抗体、细胞因子水平等指标。结果显示,笼养试验中5.0 mg和7.5 mg壳寡糖组的免疫增强效果均优于2.5 mg壳寡糖组。平养试验中5.0 mg和7.5 mg壳寡糖组免疫期间雏鸡体重和ACI均高于无佐剂免疫组,且7.5 mg壳寡糖组的ACI稍高于5.0 mg组;在免疫期间壳寡糖可明显促进鸡只CD8分子的增殖,而在免疫初期对CD4分子的增殖具有抑制作用,可明显刺激鸡只TNF-α的产生,而对IgM、IgG抗体以及TGF-β1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-10等细胞因子均无显著性影响(P0.05)。 相似文献
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目前,关于宿主细胞应对球虫感染机制的研究极其有限。在前期研究中,我们利用相对和绝对定量同位素标记技术结合液相色谱串联质谱技术分析了感染柔嫩艾美耳球虫子孢子72 h后鸡胚成纤维(CEF)细胞的蛋白质组表达变化,作者拟进一步研究其中一个上调蛋白——甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响。克隆鸡GAPDH基因并构建原核重组质粒pGEX-4T-1-GAPDH,表达重组GAPDH蛋白,用Western blot对表达进行验证。使用q-PCR、Western blot和免疫组织化学的方法检测感染柔嫩艾美耳球虫子孢子后DF-1细胞中GAPDH的表达量,并使用抗体抑制试验检测GAPDH多克隆抗体对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵细胞的影响。结果显示:成功克隆1 123 bp的GAPDH基因,并获得61.7 ku的重组GAPDH蛋白。q-PCR和免疫组织化学检测均显示,GAPDH在柔嫩艾美耳球虫子孢子感染的DF-1细胞中的表达显著升高。抗体抑制试验表明,与相同浓度的正常兔IgG相比,50、100、200、300和400μg·mL~(-1)的抗GAPDH抗体均能明显抑制子孢子的入侵。以上结果表明,子孢子感染会引起宿主细胞GAPDH蛋白的上调,并且宿主GAPDH蛋白在子孢子入侵过程中起正调控作用。 相似文献
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为克隆和研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)新基因,本研究在所获得的ESTs序列的基础上,应用RACE技术克隆获得了1个在子孢子阶段高表达新基因的全长cDNA序列(GU553107),命名为ZB7-C11,该基因全长1439bp,ORF为525bp,编码174个氨基酸,预测表达蛋白的分子量约为18.7ku。Real-timePCR对E.tenella不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析显示,该基因在子孢子阶段的表达高于其它阶段。另外,将ZB7-C11克隆于pGEX-4T中构建重组质粒pGEX-4T-C11,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达6h后其表达量最高,并且重组蛋白分子量约44.7ku大部分以可溶性存在。Westernblot分析显示该重组蛋白可被抗E.tenella的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性。该结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。 相似文献
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[目的]探讨堆型艾美耳球虫早熟株和母株对常用抗球虫药的敏感性。[方法]选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西8种抗球虫药,进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（POAA）、病变记分减少率（RLS）、相对卵囊产量（ROP）和抗球虫指数（ACI）4项指标进行综合评定。[结果]堆型艾美耳球虫早熟株和母株均对地克珠利、氯苯胍、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感,对盐霉素轻度敏感,对二硝托胺不敏感。[结论]遗传背景相同的虫株,其药物敏感性也相同。 相似文献
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中国家畜家禽球虫种类概述 总被引：14，自引：0，他引：14
球虫是严重危害畜禽生长的一类重要寄生性原虫,隶属于艾美耳科(Eimeriidae)的4个属,即艾美耳属(Eimeria)、等孢属(Isospora.)、泰泽属(Tyzzeria)、温扬属(Wenyonella),具有显著的宿主特异性.了解我国畜禽球虫种类,对做好球虫病防治工作具有指导意义.作者通过对我国近50年的畜禽球虫调查资料进行整理、汇总,列出了发现于我国马、骆驼、牛(黄牛、水牛、奶牛、牦牛)、羊(绵羊、山羊)、猪、犬、猫、兔、鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑的球虫136种,其中艾美耳球虫117种、等孢球虫9种、泰泽球虫6种、温扬球虫4种.按宿主分别为马的球虫1种,为艾美耳球虫;骆驼的球虫8种,为艾美耳球虫;牛的球虫16种,为艾美耳球虫;羊的球虫28种,为艾美耳球虫;猪的球虫16种,其中艾美耳球虫14种、等孢球虫2种;犬的球虫3种,为等孢球虫;猫的球虫2种,为等孢球虫;兔的球虫17种,其中艾美耳球虫16种、等孢球虫1种;鸡的球虫9种,为艾美耳球虫;鸭的球虫20种,其中艾美耳球虫11种、等孢球虫1种、泰泽球虫4种、温扬球虫4种;鹅的球虫11种,其中艾美耳球虫9种、泰泽球虫2种;鸽的球虫2种,为艾美耳球虫;鹌鹑的球虫3种,为艾美耳球虫. 相似文献
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银染mRNA差异显示法克隆柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)抗药性相关基因 总被引：5，自引：0，他引：5
以柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）敏感株、地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株孢子化卵囊为材料，用银染mRNA差异显示方法筛选和克隆与球虫抗药性相关的基因。首先提取这3个虫株孢子化卵囊的总RNA为模板．用Oligo（dT）12GG为锚定引物和2个10碱基随机引物组合进行RTPCR，产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染。分别切取5务差异条带，进行2次PCR扩增，产物回收后与PGEM—T—easy Vector连接转化。经PCR鉴定正确后，再进行斑点杂交试验、序列分析和同源性比较。结果发现，地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株分离的差异片段中都有2个cDNA片段（可能为新的基因片段），这为克隆全长cDNA和探索球虫抗药性产生的分子机理奠定了一定的基础。 相似文献
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为了解上海地区规模化奶牛场奶牛感染球虫的情况,我们对上海地区17个牧场的奶牛球虫感染状况进行了随机抽样调查,分别于2005年10月和2006年4月按不同年龄阶段共采集粪样316份。调查结果显示:17个牧场都有球虫感染,1个牧场的感染率最高达70%,其中10月份调查的感染率为36.45%,4月份调查的感染率为40.05%,两者没有明显的差异;从不同年龄阶段奶牛的感染情况来看,发现感染率最高的2个阶段为0~2月龄和4~6月龄,感染率高达为45%,感染率最低的年龄阶段为12月龄以上的奶牛,感染率为25%;从感染强度来看,上海地区牧场奶牛的球虫感染强度大部分平均OPG低于1000,占58.82%,只有一个牧场的平均OPG比较高,为14250;从本次调查结果发现有6种艾美耳球虫(Eimeria),分别是牛艾美耳球虫(E.bovis)、椭圆艾美耳球虫(E.ellipsoidallis)、邱氏艾美耳球虫(E.zurnii)、怀俄艾美耳球虫(E.wyomingensis)、柱状艾美耳球虫(E.cylindrica)、亚球形艾美耳球虫(E.subspherica),优势虫种为牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、椭圆艾美耳球虫,其他3种球虫所占比例较少。 相似文献
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鸡球虫入侵相关分子的研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于肠道所引起的一种危害极其严重的寄生虫病,给养鸡业造成巨大的经济损失.艾美耳球虫属于顶复器门原虫,在入侵宿主细胞过程中需要通过入侵虫体顶端的顶复器分泌蛋白发挥作用.目前已报道与鸡球虫入侵相关的重要蛋白,包括微线蛋白、蛋白激酶、热激蛋白以及糖酵解酶等.这些蛋白主要参与了鸡球虫入侵宿主细胞以及在宿主细胞内的生长发育、参与了虫体的细胞周期活动以及参与了糖酵解提供虫体入侵需要的能量等,进一步对这些分子进行研究,对了解鸡球虫入侵宿主细胞的相关机理及发展抗球虫病疫苗和治疗药物将有积极的意义. 相似文献