禽白血病病毒群特异性抗原单克隆抗体的制备与鉴定     

贠炳岭  李德龙  胡晓亮  刘在斯  秦立廷  吴关  刘文  祁小乐  王永强  高宏雷  高玉龙  王笑梅 《中国预防兽医学报》2012,(10):782-785

为制备禽白血病病毒(ALV)群特异性抗原的单克隆抗体(MAb),本研究从ALV-J病毒株感染DF-1细胞的冻融裂解液中提取DNA,通过PCR方法扩增出ALV群特异性抗原p27基因,并将其克隆至pMD18-T载体中,酶切鉴定后进行序列测定和分析。最后将p27基因亚克隆至载体pET-30a(+)中,转化受体菌BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测获得融合蛋白。经过western blot检测,表达的蛋白具有良好的反应原性。将纯化的p27蛋白作为抗原,免疫7周龄BALB/c小鼠,利用淋巴细胞杂交瘤技术,获得5株能稳定分泌特异性MAb的杂交瘤细胞株。5株MAb与纯化的p27蛋白以及不同亚群ALV可以发生特异性反应。所制备的MAb为禽白血病的诊断方法研究奠定了基础。  相似文献   

禽白血病病毒衣壳蛋白p27基因的原核表达及多克隆抗体的制备     

李德龙  刘在斯  贠炳岭  吴关  高玉龙  秦立廷  祁小乐  王永强  高宏雷  刘思当  王笑梅 《中国家禽》2012,(9):13-16

从J亚群禽白血病病毒(ALV-J)HB09JY03株感染的DF-1细胞的冻融裂解液中提取DNA,通过PCR方法扩增出约720bp的gag-p27基因片段,克隆至pMD18-T载体。鉴定正确后,将该片段克隆至pET-30a(+)原核表达载体,经IPTG诱导表达。表达产物经His Trap TMHP纯化后,测蛋白浓度达到9mg/mL。用兔抗自然p27蛋白阳性血清进行Western blot检测,表明重组p27蛋白有抗原反应活性。免疫新西兰大白兔后,产生的抗体与禽白血病全病毒抗原可以发生特异性反应。所制备的重组p27蛋白和多克隆抗体将在ALV的抗原分析、血清学诊断等方面有着重要的应用价值。  相似文献   

我国部分省区牛传染性胸膜肺炎流行病学调查     

辛九庆  李媛  高玉龙  王砚范 《畜牧兽医科技信息》2005,(9):38-40

牛传染性胸膜肺炎（Contagious bovine pleuroopneumonia CBPP）又名“牛肺疫”是由丝状支原体丝状亚种SC生物型（Mycoplas mamycoides subsp．Mycoides SC MmmSC）引起的一种亚急性或慢性、接触性传染病，其特征为纤维素性肺炎和浆液性纤维素性胸膜炎，被世界动物卫生组织（OIE）列为A类传染病。该病在20世纪20年代传入我国，流行历史较久，分布甚广，危害严重。  相似文献   

鸡马立克氏病病毒感染对鸡神经系统损伤的研究     

周林宜  张艳萍  孙国荣  张峰  于正浩  高玉龙  祁小乐  李凯  王笑梅  刘长军 《中国预防兽医学报》2019,(2):113-117

为研究不同毒力的鸡马立克氏病毒(MDV)在鸡神经系统中的感染规律及其对神经系统的损伤进程,本研究选用不同毒力的血清1型MDV (MDV-1)病毒株感染4日龄的SPF鸡,在接毒后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、17 d、21 d、25 d、28 d和35 d动态检测病毒载量的变化,并对感染后5 d和21 d的不同病毒株感染鸡的脑部和坐骨神经进行组织病理学观察。结果显示,MDV-1强毒株在SPF鸡脑部的复制能力显著高于弱毒株(p<0.05);特超强病毒株BS在脑组织中出现的时间最早,早期复制最快。但不同毒力的MDV-1株在坐骨神经处的复制能力与其毒力无直接的关系。组织病理学观察显示,在感染早期MDV-1强毒株对SPF鸡脑组织的损伤强于弱毒株;在感染后21 d,强毒株和弱毒株造成的脑部损伤存在明显的不同;而在坐骨神经处,强毒株造成的损伤明显强于弱毒株。本研究揭示了不同MDV病毒株在SPF鸡脑和坐骨神经的复制动力学特征和组织病理学特征,为MDV-1在宿主神经系统中的感染、增殖及造成的损伤提供了实验依据。  相似文献   

鸡贫血病毒vp1和vp2基因在毕赤酵母中的表达及产物免疫学特性的初步研究     

林欢  高宏雷  王晓艳  高玉龙  宋修庆  李术强  王笑梅 《中国预防兽医学报》2008,30(7)

利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒（CAV）vp1、vp2基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表达质粒pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2。将pPIC9K-VP1和pPIC9K-VP2转化至毕赤酵母SMD1168中,在0.5%甲醇诱导下表达CAV-VP1、CAV-VP2蛋白,运用Westernblot和Dot-ELISA鉴定表达蛋白。结果表明,重组酵母菌株表达出约54ku和24ku的目的蛋白,与针对鸡贫血病毒的单克隆抗体发生特异性反应。将表达产物乳化后免疫6周龄BALB/c小鼠,用ELISA、IFA检测免疫小鼠血清,均检测到抗体。  相似文献   

禽白血病的防治     

高玉龙  王笑梅 《预防兽医学进展》2010,(1):94-96

禽免疫抑制病研究组,主要从事免疫抑制病（鸡传染性法氏囊病、禽白血病、鸡传染性贫血病等）的流行病学、致病机理、诊断方法及疫苗开发等研究。欢迎广大基层养鸡场及临床兽医技术人员来电、来函进行技术咨询。  相似文献   

禽网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其体外复制研究     

邓小芸  祁小乐  高玉龙  高宏雷  秦立廷  高立  王笑梅 《中国兽医寄生虫病》2010,18(1):23-27

禽网状内皮组织增生病是一种重要的肿瘤病和免疫抑制病。本研究从黑龙江省某鸣场分离到一株禽网状内皮组织增生病病毒,经间接免疫荧光、PCR和电镜鉴定,将该株病毒命名为HLJR090l。克隆HLJR0901主要保护性抗原的基因gp90,并进行了序列分析。HLJR0901与我国早期分离的南方毒株HA9901亲缘关系较远,而与美国和台湾的某些毒株同源性较高。HLJR0901的TCID50为10^52／mL。通过绘制复制动力学曲线对HLJR0901在cEF细胞上的增殖动态规律进行了研究,发现d6和d7REV增殖的滴度最高。该研究丰富了REV流行病学调查,为后续研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础。本研究不仅丰富了我国REV流行病学资料,也为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定了基础。  相似文献   

TMV、CMV双价抗性RNA沉默表达载体的构建   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈瑜欣高玉龙  徐照丽丁灿 《中国农学通报》2011,27(5):317-321

本研究以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子双链RNA（dsRNA）为目标,根据已报道的TMV ΔMP和CMV ΔRep的核苷酸序列设计特异性引物,分别从质粒pBIN-TMV ΔMP(i/r)、pBIN-CMV ΔRep(i/r)扩增MP基因、Rep基因,并在pGEM-T Easy 载体上将2片段串联起来,再用PCR扩增串联好的正反向MP-Rep基因。正向MP-Rep基因用BamHI和Kpn I切下,将所得基因片段与用同样酶切开的含内含子的pKAN-In相连,取名+pKAN;用同样的方法,将反向MP-Rep基因用Xba I切下,将所得基因片段与用同样酶切开的+pKAN相连,取名pKAN-In-MP-Rep,再用Not I将包括Intron和正反向MP-Rep基因在内的片段切下,将其定向插入同样酶切开的pART27上,获得重组质粒pART27-In-MP-Rep。获得的载体可以应用于植物转基因抗病毒育种工程中。  相似文献   

MDCC-MSB1细胞酵母双杂交cDNA表达文库的构建与鉴定     

崔鹏鹏  高宏雷  李凯  高立  高玉龙  祁小乐  王笑梅 《中国畜牧兽医》2013,(5):22-25

提取生长状态良好的MDCC-MSB1细胞的mRNA,以5'端标记有生物素的Oligo dT primer为引物反转录,合成双链后连接Adapter。分级纯化后,通过BP重组反应构建入门文库,滴度为1×10⁵ CFU/mL,文库总容量为1.1×10⁶ CFU,平均插入片段长度为1190 bp,阳性重组率为100%。入门文库扩增后提取质粒,通过LR重组反应转化为表达文库,平均滴度为1×10⁵ CFU/mL,文库总容量为1.2×10⁶ CFU,平均插入片段长度为1087 bp,重组率为100%。构建的表达文库具有较高的质量,为研究鸡传染性贫血病毒的受体及其细胞嗜性奠定了基础。  相似文献   

转基因动物研究进展   总被引：5，自引：1，他引：4  

高玉龙  欧阳五庆 《动物医学进展》2000,21(2):47-50

本文从转基因动物的产生、转基因细胞载体的运用、基因的转移、转基因的命运、转基因的载体、基因功能的研究,生物医学模型、制备重组蛋白、改善乳成分等方面综述了转基因动物的最新研究成果。  相似文献