传染性法氏囊病病毒超强毒株的分离与VP2基因序列分析     

宇文延青  高玉龙  高宏雷  祁小乐  王笑梅 《黑龙江畜牧兽医》2009,(9)

为了探讨传染性法氏囊病流行的原因,从4个发生传染性法氏囊病的鸡场采集病变法氏囊,处理后用特异性单克隆抗体进行荧光检测,结果均为阳性;然后提取病毒RNA,利用RT-PCR扩增病毒VP2基因cDNA并进行序列和遗传进化分析.结果表明:所分离的4株病毒均具有超强毒的分子特征,属于传染性法氏囊病病毒超强毒病毒群,4株病毒在第1亲水区的212位有1个氨基酸突变(D→N);HLJ-3和HLJ-4在第2亲水区321位还有1个突变(A→V),这些突变可能造成传染性法氏囊病病毒的抗原发生变异,进而发生免疫失败.  相似文献   

鸡传染性法氏囊病超强毒Gx与疫苗毒Gt在鸡体内的复制研究     

李久宽  王永强  康忠惠  王琦  高玉龙  高宏雷  祁小乐  秦立廷  林欢  王笑梅  许修宏 《中国家禽》2012,(1):15-18

本试验利用鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱疫苗毒Gt为对象,研究超强毒与弱毒株在鸡体主要免疫器官内的复制情况,以探讨两类毒株表现不同生物特性的原因。分别利用鸡胚半数致死量和鸡胚成纤维细胞半数感染量对超强毒Gx和疫苗株Gt进行病毒滴度的测定;再利用荧光定量RT-PCR对两类毒株进行病毒量的校准。以相同量的病毒对2周龄SPF鸡进行攻毒。攻毒试验表明超强毒Gx能造成47.5%的死亡,法氏囊、脾脏、胸腺等免疫器官均严重损伤;而疫苗毒Gt无致死,且未能造成任何病理可见的损伤。病毒的体内复制情况表明超强毒相对于疫苗毒复制更为迅速,病毒载量更高。  相似文献   

鸡传染性法氏囊病毒基因组A节段编码前体多聚蛋白的遗传踪迹分析     

侯仲杰  王靖飞  付朝阳  高宏雷  高玉龙  祁小乐  郭莹莹  王笑梅 《中国预防兽医学报》2012,34(1):28-32

为研究鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)毒力变异的分子机理,本实验采用进化踪迹分析方法对GenBank中登录的28个毒力不同的IBDV参考病毒株的基因组A节段编码的前体多聚蛋白(NH2-pVP2-VP4-VP3-COOH)推导的氨基酸序列进行分析。结果表明超强IBDV与标准IBDV的差异位点集中在第299位、451位、680位、715位和751位氨基酸上;致弱IBDV与标准IBDV的差异位点在第242位、253位、330位和981位氨基酸。该结果为进一步研究IBDV的毒力变异奠定基础。  相似文献   

IBDV血清Ⅱ型VP5蛋白原核表达及型特异性单克隆抗体的制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

秦立廷  祁小乐  高宏雷  高玉龙  王笑梅 《中国预防兽医学报》2009,31(4)

本实验构建表达了传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清Ⅱ型23/82株VP5蛋白,并制备出能够区分不同血清型IBDV的单克隆抗体(mAb).利用EcoR I和Xho I双酶切pUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株IBDV VP5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a,经酶切鉴定获得重组质粒pET-23/82VP5,转化到宿主茵BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白,SDS-PAGE分析表明该融合蛋白分子量大小约为23 ku.Ni-NTA柱纯化重组蛋白,复性后免疫8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,常规方法进行细胞融合,获得1株阳性杂交瘤细胞株(5D3),IFA和western blot分析表明该细胞株分泌的mAb仅与血清II型IBDV 23/82株VP5反应,不与血清I型IBDV Gt株VP5反应.腹水抗体间接ELISA效价为1×104.该mAb的制备为研究血清II型IBDV的VP5的功能和标记疫苗的研制奠定了基础.  相似文献   

烟草MITE位点间多态性(IMP)标记开发及其遗传作图应用     

高玉龙  桂毅杰  肖炳光  薄世平  严广号  樊龙江 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2012,38(6)

为在烟草(Nicotiana tabacum)上进行IMP (inter-MITE polymorphism,MITE位点间多态性)标记开发,利用美国烟草基因组测序数据和MITE (miniature inverted repeat transposable element,微型反向重复转座元件)结构特征,通过生物信息学方法获得11 581组具有特异TIR (terminal inverted repeat,末端重复元件)序列的MITE及其多序列联配结果,并根据联配结果设计219条烟草IMP引物;利用9个不同类型烟草代表性品种进行测试,其中119条引物PCR扩增成功,引物开发成功率为54.6％;进一步对一个烤烟遗传群体亲本‘红花大金元’和‘Hicks Broadleaf'进行标记筛选,共获得29个多态性标记,群体检测表明有21个标记可以整合定位到一个SSR标记遗传连锁图上.说明IMP标记在烟草中是一种可以利用的分子标记,但跟其他标记一样表现出较低的多态性,需高通量检测平台与之配套来提高其开发效率.  相似文献   

丝状支原体丝状亚种SC型脂蛋白Q的N末端定点突变及表达载体的构建     

高玉龙  辛九庆  李媛  王砚范 《畜牧兽医学报》2006,37(1):95-99

根据已发表的丝状支原体丝状亚种SC型（MmmSC）LppQ基因序列设计引物，从MmmSC HVRIx株中扩增出了LppQN末端基因，并将其分别克隆到pUC18和pUC19上，利用一步重叠延伸PCR突变方法将其66位的TGA突变为TGG，经克隆与序列测定证实突变成功后，将已突变的LppQN末端基因插入原核表达载体pET32a的多克隆位点，成功地构建了LppQN末端基因原核表达载体pET32a-LppQ，为其下一步体外表达奠定了基础。  相似文献   

微生态制剂在养鸡业中的应用   总被引：10，自引：0，他引：10  

高玉龙  包红梅  辛九庆  李希强 《饲料研究》2002,(2):17-19

微生态制剂是在微生态理论指导下发展起来的一种新型活菌制剂。在饲料中添加适量的微生态制剂，可改善饲料利用率；提高蛋鸡产蛋率和蛋品质；提高雏鸡成活率，降低雏鸡肠道疾病的发病率；提高肉鸡日增重，降低死亡率。它作为鸡的饲料添加剂有很有推广价值。  相似文献   

犬瘟热疫苗株CDV01/23的遗传演化分析     

吴金  高玉龙  杨金梅 《中国兽医学报》2014,(5):727-728

<正>犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbilivirus),是一种单股负链不分节段的RNA病毒,可引起犬、狐、貉和貂等的一种急性、高度接触性传染病,可导致大批动物发病,死亡率30%⁸0%[1]。疫苗接种是预防犬瘟热唯一有效的手段。目前关于犬瘟热疫苗的研究不断报道,包括利用病  相似文献   

仪征市近两期二类调查森林资源动态变化分析     

邓永庆  李卫国  李洋  高玉龙 《绿色科技》2011,(1):63-64

通过对1987年和2008年仪征市近两期二类调查资料的比较研究,从宏观上分析了仪征市森林资源的现状以及动态变化,并对仪征市的森林经营活动作出客观的评价。  相似文献   

非洲猪瘟病毒核酸双重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的构建     

宝梅英  吴金  高玉龙  郭丽萍  张中洋 《现代畜牧兽医》2020,(11):41-45

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