重组牛α-干扰素的原核表达与纯化     

张弦  缪德年  廖学文  黄克和  张克春 《畜牧与兽医》2015,(3):97-101

为在大肠杆菌表达系统中高效表达牛α-干扰素(bovine interferon-α,Bo IFN-α),将经密码子优化后的牛α-干扰素成熟蛋白基因合成并克隆到表达载体p Cold II中,转化大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,获得可溶性的表达蛋白。对重组菌表达条件进行优化,结果显示在IPTG浓度为0.64 mmol/L,诱导温度为15℃,诱导时间为9 h的条件下,可溶性目的蛋白的表达量最高。重组蛋白经镍柱纯化后的纯度为99.2%,表达量为36 mg/L菌液。重组蛋白在MDBK细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1×106U/mg。  相似文献   

硒增强雏鸡对IBD抵抗力机制的细胞免疫研究   总被引：5，自引：0，他引：5  

步志高  黄克和 《中国兽医学报》1996,16(3):273-276

为了解硒对雏鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）抵抗大的影响及其细胞免疫机制，自１日龄起给雏鸡分别饲喂基础（含硒０．０８６ｍｇ／ｋｇ）、补硒０．３ｍｇ／ｋｇ和０．６ｍｇ／ｋｇ的不同日粮，于４９日龄采用微量全血培养￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定其中自然发生ＩＢＤ后第１０天和正常对照雏鸡的Ｔ淋巴细胞转化率，并计算ＩＢＤ鸡死亡率。结果，两补硒组ＩＢＤ雏鸡死亡率显著低于基础日粮组ＩＢＤ雏鸡（Ｐ＜０．０１）；ＩＢＤ明显抑制雏鸡Ｔ淋巴细胞转化率（Ｐ＜０．０５；Ｐ＜０．０１）；补硒的正常对照雏鸡和ＩＢＤ雏鸡Ｔ淋巴细胞转化率分别高于各自基础日粮雏鸡（Ｐ＜０．０５；Ｐ＜０．０１）。结果显示补硒可提高雏鸡细胞免疫功能，从而增强雏鸡对ＩＢＤ抵抗力，降低雏鸡死亡率。  相似文献   

卵磷脂水解抑制试验测定家兔血清中的抗α毒素水平     

陈兴祥  薛家宾  黄克和  王启明  徐为中 《江苏农业学报》2002,18(3):163-166

以卵磷脂水解试验为基础 ,根据α毒素在被抗毒素完全中和后将出现水解抑制这一原理 ,建立了测定家兔血清抗α毒素水平的卵磷脂水解抑制试验方法。结果显示 ,卵磷脂水解抑制试验可用于测定不同血清样品的抗α毒素水平 ,抗血清完全中和单位剂量α毒素时 ,水解抑制试验结果明显。所能测定出的最小血清抗体量相当于中和 1/ 6 4MLD毒素的量 ,最适毒素中和时间为 30min ,其敏感性和精确性优于小鼠毒素中和试验 ,且操作简单 ,取材经济 ,易于推广应用  相似文献   

A型魏氏梭菌毒素毒力测定替代试验     

薛家宾  陈兴祥  蔡吉日  徐为中  黄克和 《江苏农业学报》2002,18(1):52-55

通过Kaerber方法测定α毒素对小鼠的半数致死量后 ,定量出 10LD50 毒力标准的毒素所能引起卵磷脂水解反应的稀释度为 6 ,每一水解稀释度相当于LD50 /6 4的毒力标准 ,从而建立起A型魏氏梭菌毒素毒力测定动物试验的替代试验。α毒素毒力与卵磷脂水解反应的浑浊度在该试验条件下具有稳定的相关性 ,不同批次的卵磷脂及毒素中所含菌体的数量对试验结果的判定无影响。该替代试验比原方法操作更简单 ,取材也经济 ,并能对毒素毒力进行定量计算  相似文献   

不同硒源对羔羊抗氧化能力、细胞因子及T3、T4的影响   总被引：1，自引：2，他引：1  

秦顺义  黄克和  高建忠  段颖 《南京农业大学学报》2007,30(2):102-106

健康滩羊羔羊24头,随机分为3组.对照组(C)饲料中添加玉米淀粉,试验组(T1、T2)饲料中分别添加富硒酵母和亚硒酸钠,试验期60 d.分别于试验期30和60 d测定全血中GSH-Px活性、血浆SOD活性、血浆MDA含量、血浆IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α水平以及血浆甲状腺激素T3、T4浓度;试验期60 d时测定组织硒含量.结果发现,在30和60 d时,T1和T2组羔羊组织硒含量、全血GSH-Px活性、血浆SOD活性、血浆IL-1、IL-2、IL-6、TNF-α水平以及血浆T3浓度均显著或极显著高于C组(P＜0.01或P＜0.05);血浆MDA含量及T4浓度均显著或极显著低于C组(P＜0.01或P＜0.05).在30 d时,T1组羔羊全血GSH-Px活性及组织硒含量均极显著高于T2组(P＜0.01).在60 d时,T1组羔羊全血GSH-Px活性及组织硒含量均极显著高于T2组(P＜0.01);T1组羔羊血浆MDA含量显著低于T2组(P＜0.05).结果表明,有机硒源提高羔羊机体硒状态以及机体抗氧化能力的效果优于无机硒源,但在提高细胞因子水平和血浆T3浓度以及降低血浆T4浓度方面两者差异不显著.  相似文献   

猪源隐孢子虫卵囊的分离及基因型鉴定     

陈甫  黄克和 《中国兽医学报》2011,31(2)

应用RT-PCR方法对南京、上海和合肥猪源隐孢子虫卵囊SSU rRNA部分序列进行扩增,产物测序后提交GenBank,收录号为DQ855266、DQ855267;用BLAST和DNAStar软件与GenBank参考序列进行比较,分析其同源性,绘制系统发育进化树,结合卵囊形态学观察和对小鼠、大鼠、兔、山羊和鸡的传染性试验确定隐孢子虫种类或基因型。结果表明,3地区猪源隐孢子虫分离株与微小隐孢子虫(C.parvum)同源性达94%~100%,与C.parvummouse型有99.8%~100%的同源性,并处于进化树的同一分支。因此,3地区猪源隐孢子虫是C.parvummouse型,提示猪和鼠之间存在交叉传播的可能。  相似文献   

细胞外高钙对鸡肾小管上皮细胞活力和NO产生的影响     

郭小权  黄克和  陈甫  骆建兵 《中国兽医学报》2005,25(6):640-642

为探讨一氧化氮（NO）在高钙致鸡痛风中的作用，利用已建立的鸡原代肾小管上皮细胞的体外研究模型，经不同浓度的钙进行处理．通过MTT比色法观察了高钙对细胞活性的影响；采用硝酸还原酶法测定了不同浓度高钙处理原代肾小管上皮细胞后培养上清液中亚硝酸根／硝酸根（NO2^-／NO3^0）的含量（NO的静态氧化形式）。结果表明，分别用4．0mmol／L（试验组Ⅰ），8．0mmol／L（试验组Ⅱ），12．0mmol／L（试验组Ⅲ），16．0mmol／L（试验组Ⅳ）Ca^2＋处理细胞，各时段组的细胞活性与对照组相比均显著降低（P〈0．01），且细胞外钙浓度越高，细胞活性降低越明显。高钙处理细胞24h后．各组培养液中NO的含量较对照组升高不显著；48h后，试验Ⅳ组的NO比对照组显著升高；72h后，各试验组与对照组相比NO的含量均显著升高。这些结果说明，细胞外高钙能够直接损害肾小管上皮细胞，而NO可能在肾小管上皮细胞的损害中起一定的作用。  相似文献   

南京地区奶牛软骨病的研究(摘要)     

陈振旅  王元林  王小龙  朱映天  黄克和  郁者华  郑广燮  秦德才  施家栋 《畜牧与兽医》1986,(1)

<正> 南京地区奶牛骨软病的发病原因与日粮中补充大量“南京石粉”(含碳酸钙99.05%)及冬春季节长期以稻草为主要粗饲料有密切的关系。本研究以南京浦口奶牛场为基地,通过牛场病史,临床症状,日粮和骨骼中钙、磷含量分析,血清钙、磷及碱性磷酸酶水平测定,以及骨骼X射线检查,确诊为日粮磷缺乏及钙过  相似文献   

蓝舌病病毒VP5蛋白的原核表达及其抗原性分析     

赵大维  朱彦青  陈伟业  胡倩倩  殷倩倩  黄克和  步志高 《中国预防兽医学报》2012,34(8):607-610

为表达蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白并检测其生物学活性,本实验采用RT-PCR方法扩增血清12型BTV的VP5基因,构建重组质粒pMAL-VP5。将重组质粒转化TB1感受态细胞,以0.4 mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果显示,融合了大肠杆菌麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的VP5重组蛋白以可溶形式表达,分子质量约为112.2 ku。利用MBP标签对重组蛋白进行纯化,并以其作为包被抗原,间接ELISA检测山羊血清样品,结果 5份羊血清P/N值均大于1,其中有1只羊检测结果 P/N值为2.396,鉴定为阳性血清,表明重组蛋白可以与VP5抗体反应,可以作为检测BTV VP5抗体的抗原,为今后进一步开展BT诊断研究奠定了基础。  相似文献   

乳酸菌清除霉菌毒素作用及其机制     

龙淼  李鹏  穆国冬  黄克和 《饲料工业》2012,33(3):62-64

霉菌毒素广泛存在于食品和饲料当中,严重地危害人类和动物的健康。如何有效清除霉菌毒素一直是重要的研究课题。乳酸菌具有多种生物学功能,近年来研究表明,乳酸菌具有清除霉菌毒素能力。为了更好地理解乳酸菌清除霉菌毒素的作用,文章就近年来乳酸菌对霉菌毒素的清除机制加以综述。  相似文献