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应用DNA重组技术把微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)子孢子抗原p23基因克隆入表达载体pMG36e当中,成功构建了可在干酪乳杆菌(Lactobacillus casei Zhang)胞浆中表达的重组载体pMG-p23。并以SDS-PAGE、Western blotting以及IFAT试验方法,分别在破碎菌体组分和活菌体当中鉴定p23基因表达产物并确定其在细胞中表达的位置。本试验为进一步构建分泌型或锚定型干酪乳杆菌(L.casei Zhang)活菌载体奠定了基础。 相似文献
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浙江省8大水系是支撑该省经济发展和保障饮用水来源的主要水系。目前8大水系都呈现出不同程度的污染。通过因子分析方法,对影响浙江省8大水系污染的主要社会经济因子进行了分类。结果表明,社会经济影响因子可划分为区域经济发展水平、种植业发展、农林服务业发展水平、渔业发展水平、人口密度水平等5大类。浙江省8大水系社会经济因子总得分排序为:甬江>苕溪江>曹娥江>鳌江>椒江>钱塘江>瓯江>飞云江。当这5大因子得分同时介于-1~0时,水系水质污染程度最低。社会经济因子总得分大于3或小于-3时水污染程度最低,水系的Ⅰ-Ⅲ类水所占比例在90%以上。水系污染与经济发展水平存在一定关系,但更多是经济发展水平与其他因子综合作用的结果,水系污染与社会经济发展各因子之间的平衡发展有着密切关系。在农林业占非主导地位的地区,单位面积第一产值高低与水系污染呈正相关性关系。 相似文献
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本试验旨在建立IFAT和间接ELISA方法作为微小隐孢子虫病诊断方法.应用DNA重组技术,构建原核表达载体pGEX-P23,经IPTG诱导表达出GST-P23融合蛋白,并进行纯化,将该重组融合蛋白作为包被抗原,建立ELISA诊断方法;同样构建重组载体pMG-P23,用电转化方法将其转入干酪乳杆菌中,称为重组活干酪乳杆菌(含pMG-P23),以此为已知抗原,建立IFAT诊断方法.应用ELISA和IFAT方法检测来自内蒙古地区的508份牛血清、187份绵羊血清和197份山羊血清:其中ELISA方法在各种动物血清中阳性率依次分别为0.59%、5.88%和4.57%,而IFAT方法则为0.19%、5.88%和4.57%.2种检测方法阳性符合率在牛血清样品中为33.33%,在绵羊和山羊中则均为100%.试验结果表明,重组抗原P23具有良好的反应原性,2种诊断方法的结果基本吻合,显示出良好的一致性和敏感性,可在微小隐孢子虫病的诊断实践中推广应用. 相似文献
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从已构建的牛微小隐孢子虫子孢子cDNA文库中,用PCR方法扩增出子孢子表面抗原p23基因,将其插入到编码谷胱肽转移酶(GST)的质粒(pGEX-4T-2)多克隆位点,构建原核表达载体pGEX-p23。重组质粒经EcoRI/Sal I酶切、测序鉴定后转入大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达蛋白。结果成功构建了pGEX-p23原核表达载体,经IPTG诱导,转化的大肠杆菌表达出分子质量为47kDa的GST融合蛋白,且该蛋白能与抗p23抗体发生特异性结合反应。本研究为进一步研究p23的生物学功能和临床应用奠定了基础。 相似文献
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鸡白介素-17 cDNA基因的克隆、序列分析及表达 总被引：2，自引：0，他引：2
用RT-PCR方法,分别以ConA体外刺激培养12、24、48 h的鸡脾脏淋巴细胞(SP)和经人工感染2次堆型艾美尔球虫(E im eria tenella)孢子化卵囊(约3.6×104个/鸡)的鸡盲肠扁桃体/肠上皮淋巴细胞(IELS)总RNA为模板,成功扩增出预计大小的鸡白介素-17 cDNA基因,并克隆入pM D 18-T载体,进行序列测定。测序结果显示其阅读框(ORF)为507 bp,与G enB ank上鸡IL-17基因已知序列(A J493595)BLA ST的比较表明:核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.4%和82.4%。将cDNA基因克隆入pET-32a质粒,构建了pET 32a-IL-17原核表达载体,IPTG诱导后表达出的融合蛋白大小为36 000左右。 相似文献
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Vaccination of chickens with DNA vaccine expressing Eimeria tenella MZ5-7 against coccidiosis 总被引：1，自引：0，他引：1
A chimeric DNA vaccine co-expressing Eimeria tenella MZ5-7 and chicken IL-17 gene was constructed and its efficacy against E. tenella challenge was evaluated. The ORF of MZ5-7 from E. tenella's second generation merozoite and the mature interleukin 17 gene of chicken were cloned into the expression vector of pcDNA4.0 to construct DNA vaccine pcDNA4.0-MZ and pcDNA4.0-MZ-IL17. The expression of aim gene products in vivo was detected by western blotting. The expression of IL-2 and IFN-γ in chicken splenocytes was detected by RT-PCR 7 days post-immunization. The expression levels of the two cytokines in the pcDNA4.0-MZ-IL17 DNA vaccine immunized group were significantly higher than that in the pcDNA4.0-MZ immunized group (p<0.05). Either pcDNA4.0-MZ or pcDNA4.0-MZ-IL17 DNA vaccine could obviously alleviate cecal lesions, body weight loss and increase oocyst decrease ratio. The ACI of pcDNA4.0-MZ-IL17 group was 190, which is higher than that of pcDNA4.0-MZ group and all the three control groups. In short, MZ5-7 was an effective candidate antigen for vaccine and co-expression of cytokine with antigen was an alternative method to enhance the immunity DNA vaccine. 相似文献
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生态公益类毛竹林可持续经营及其生态效益评价 总被引：3，自引：0，他引：3
针对生态公益类毛竹林经营缺乏有效技术支撑现状,通过系统的试验,提出了一套适合生态公益类毛竹林可持续经营的技术措施,即采用适当保留毛竹林下的小树,伐桩施肥为主、沟施为辅的施肥方式,施肥量控制在750 kg.hm-2左右的经营方式,可使富阳市生态公益类毛竹林的新竹产量和林分质量得到明显提高;这种经营方式比单纯追求竹材产量的集约经营方式更有利于减少林地水土流失,更好地保护植物多样性。 相似文献
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在浙江省富阳市主产雷竹的7个乡镇的8个试验点生长正常的雷竹林和春建乡的2年生雷竹林中分别对雷竹主要器官Se的富集累积和同一竹鞭系统内立竹间Se的转移累积规律进行了研究.结果表明:在雷竹主要器官中,以叶片的Se含量最高,平均值为0.132 8mg·kg-1(干重),其次是竹笋,平均值为0.067 0 mg·kg-1(干重);其它器官之间差异较小,且硒含量极低;雷竹竹鞭硒含量与其它器官(竹笋、叶片、竹枝、竹秆)硒含量之间又均达到显著和极显著线性相关;在同一竹鞭系统内,一竹株茎秆注射亚硒酸钠后,另一未茎秆注射亚硒酸钠的竹株叶片的硒含量有明显的增加,证明了硒可在同一竹鞭系统内的立竹间传递. 相似文献
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以本实验室已构建的pMD19T-slp为模板,应用PCR方法亚克隆slp基因,将其定点插入到原核表达载体pGEX-4T-3中,成功构建原核表达载体pGEX-slp,经IPTG诱导获得重组融合蛋白GST-SLP并用LiCl的方法进行纯化。应用SDS-PAGE和Western blot方法对表达产物进行鉴定,应用ELISA方法鉴定重组融合蛋白的体外黏附特性。在大肠埃希菌裂解样品中,SDS-PAGE和Western blot结果均证明分子质量大小约为71ku的重组融合蛋白GST-SLP的存在;ELISA结果提示,该重组融合蛋白在体外能够有效地黏附在乳酸乳球菌NZ9000表面。本试验为S-层蛋白质生物学特性的进一步研究奠定了基础。 相似文献
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自2013年以来,H7N9亚型流感对我国养禽业和人类公共卫生造成了极大影响。疫苗作为重要防疫工具,在H7N9亚型流感防控中起到了至关重要的作用。目前我国批准使用的H7N9禽流感全病毒灭活疫苗安全性高、免疫效果好,已在国内广泛应用。随着对H7N9亚型流感病毒研究的不断深入,研究人员对核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗及通用流感疫苗等新型疫苗进行了探索和尝试,并取得了一定的进展,为我国禽流感疫苗的开发与应用夯实了技术基础。本文对各类型H7N9亚型禽流感疫苗的研发情况以及优点和应用情况进行了综述,以期为更好地防控禽H7N9亚型流感提供帮助。 相似文献