猪流行性腹泻病毒S1D蛋白的优化表达及其单克隆抗体的制备     

李洁森  孙荣航  邝燕齐  陈路漫  刘青  郭霄峰 《中国畜牧兽医》2021,48(12):4641-4651

为进一步探究猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白的抗原表位及其功能,本试验通过优化S1D基因的密码子,构建了S1D基因未优化的重组原核表达质粒pET-S1D和已优化的pET-ΔS1D,并进行了诱导表达和纯化。使用SDS-PAGE和Western blotting方法验证S1D、ΔS1D蛋白在大肠杆菌内得到正确表达,利用Image J软件对S1D、ΔS1D蛋白表达量进行灰度扫描,通过t检验分析两者差异性。将纯化的ΔS1D 蛋白免疫 BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,获得单克隆细胞株。利用体内诱生法制备抗PEDV S1D蛋白的单克隆抗体腹水,使用ELISA、Western blotting、间接免疫荧光试验3种方法对腹水效价及特异性进行检测和验证。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,表达S1D、ΔS1D蛋白的样品均在34 ku处出现正确的目的条带。t检验结果表明, S1D、ΔS1D两者蛋白表达量差异极显著(P<0.01)。ELISA结果显示, 腹水的抗体效价达到了1∶1 000 000,腹水与PEDV病毒粒子和纯化后的ΔS1D蛋白反应均呈阳性,与PEDV N蛋白、pET-32a(+)空载体蛋白和猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV) 5种病毒反应均呈阴性。Western blotting结果显示,腹水与ΔS1D蛋白和PEDV S蛋白分别在34和180 ku处有特异性条带出现,与pET-32a(+)空载体蛋白、正常Vero细胞蛋白均无特异性条带出现。间接免疫荧光试验结果显示,腹水及阳性对照组均能使细胞出现特异性绿色荧光信号,而空白及阴性对照组均未见绿色荧光信号。密码子优化可在原核表达系统中显著提高重组蛋白的表达水平,本研究基于高效表达的ΔS1D蛋白,成功制备了1株能稳定分泌与 PEDV S蛋白特异性结合的单克隆抗体的细胞株,为进一步探究 PEDV S蛋白抗原表位及蛋白功能的研究奠定了基础。  相似文献   

乌鲁木齐市屠宰场三种食源性细菌的污染情况调查   总被引：1，自引：0，他引：1  

蔡扩军  齐新林  欧秀玲  蒲敬伟  李爱巧  徐敏  杨小亮 《甘肃畜牧兽医》2016,(21):91-92

为了解乌鲁木齐市冬季不同畜禽屠宰场屠宰加工环节中大肠杆菌O157:H7、沙门氏菌、单增李斯特菌的污染情况。采集羊、牛、猪、鸡屠宰场的肉、环境拭子样本100份,按食品安全国家标准中的相关食品微生物学检验方法进行检测。结果共检出沙门氏菌11株,检出率为11%;检出单增李斯特菌2株,检出率为2%;没有检测出大肠杆菌O157:H7。调查结果表明乌鲁木齐市冬季屠宰中场沙门氏菌的污染主要存在于猪、鸡屠宰场的屠宰工具、传送带等环境中,单增李斯特菌存在于羊屠宰场的羊肉和环境中。各相关部门应加强屠宰场监管力度,以降低食品安全问题发生的可能。  相似文献   

水氮调控对苜蓿与无芒雀麦混播草地生长和辐射利用的影响     

汪爱霞  齐广平  银敏华  康燕霞  马彦麟  汪精海  贾琼  唐仲霞  姜渊博 《干旱地区农业研究》2023,(2):168-178

针对我国内陆干旱区人工草地生产管理粗放及气候资源利用不充分等问题,探究合理的牧草种植与水氮供应模式,以充分挖掘区域牧草的生产潜力。采用3 a生(2018年播种)紫花苜蓿(简称‘苜蓿’)和无芒雀麦,分析种植模式(苜蓿与无芒雀麦混播,D1;无芒雀麦单播,D2)、施氮量(低氮量N1:60 kg·hm^-2;高氮量N2:120 kg·hm^-2)和灌水量(以灌水下限占田间持水量θ_f的百分比计,分枝期均充分灌水(75%～85%θ_f),现蕾和初花期轻度亏水W1:65%～75%θ_f、中度亏水W2:55%～65%θ_f、重度亏水W3:45%～55%θ_f,灌水上限均为85%θ_f)对牧草叶面积指数(LAI)、干物质累积量、累积截获光合有效辐射量(CIPAR)、辐射利用效率(RUE)、产量(Y)、耗水量(ET_a)、水分利用效率(WUE)和氮肥偏生产力(PFP_N)的影响。结果表明：(1)牧草LAI和...  相似文献   

东乡野生稻研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

姜文正  涂英文  丁忠华  沈显华  刘春芳  饶宪章  陈光宇  齐金富 《中国种业》1988,(3)

东乡野生稻属普通野生稻,是迄今金世界分布最北的野生稻。东乡野生稻具有分蘖力强、光合作用强、耐寒、耐旱、休眠期长、柱头外露、花药长大、茎秆较细、璧较厚、较硬、叶片窄且较硬、异交结实率高、根系发达、叶片衰老较慢、米质优、抗病虫性较好等特点。分析了东乡野生稻与籼、粳稻的同工酶、染色体组型及亲和性,但是,东乡野生稻是籼或粳还有待进一步研究,对东乡野生稻与栽培稻杂交后几个性状的遗传力进行了测定。  相似文献   

春大豆抗大豆花叶病毒病鉴定初报     

马继凤  赵政文  李小红  齐新民 《湖南农业大学学报(自然科学版)》1992,(Z1)

1990年和1991年对127个已定型的春大豆株系的抗大豆花叶病毒病的抗性及产量进行了测定.其中高抗材料有51个,中抗材料19个.在高抗材料中,有7个株系比对照增产10%以上,是很有希望的新品系,有15个材料病指在1.0以下,但产量表现不突出,可作为抗源材料,根据不同地区同一品种抗性差异较大这一结果,抗性自然鉴定圃宜设在大豆病毒病重病区.  相似文献   

一种治疗母畜子宫内膜炎凝胶剂的研制     

王俊丽  孙雪峰  朱静静  张要齐  李怀生  张新蕾 《上海畜牧兽医通讯》2011,(5):8-9

目的：制备一种治疗母畜子宫内膜炎的凝胶剂即复方醋酸氯己定凝胶,建立其质量标准。方法：以卡波姆940为基质和其他辅料,与醋酸氯己定和甲硝唑制成凝胶剂,采用HPLC法测定凝胶剂中醋酸氯己定和甲硝唑含量。结果：醋酸氯己定和甲硝唑精密度和重复率良好,平均回收率分别为99.23%和99.37%。结论：该制剂制备工艺简单,含量测定方法准确,重现性好。  相似文献   

当前农民教育培训面临的新形势及主要问题探讨   总被引：1，自引：0，他引：1  

张新涛  齐晓君 《吉林农业》2011,(9):7-7

以农民培训工作为立足点分析当前新形势下农民教育培训面临的新形势及主要问题。从科学技术发展,市场经济,农民教育自身,三个方向展开分析探讨,列举出现的问题及解决方案。  相似文献   

动物知识问答     

齐晓亮 《养殖技术顾问》2014,(2):238-238

两栖动物有哪些特征？ 答：两栖动物是介于鱼类与爬行动物之间的动物，有着两重性的生活，它的特征：第一，皮肤薄而湿润。由表皮和真皮构成，内含大部分腺体，皮肤下蜜集着许多血管；第二，两栖动物的肺呈囊状，其内被分隔成细小的末端气室。此外，两栖动物的心脏分两心耳，一心室。血液循环分大、小循环。  相似文献   

橡胶树抗寒种质遗传多样性分析   总被引：2，自引：1，他引：1  

王其同  安泽伟  胡彦师  方家林  黄华孙 《热带作物学报》2012,32(2):11-14

应用RAPD和ISSR技术对20份橡胶树抗寒种质进行遗传多样性分析。结果表明，16个RAPD引物和12个ISSR引物分别扩增出条带113和101条，多态性条带指数(PPB)分别为61.1%和63.4%。据Nei-Li相似系数，ISSR标记在相似系数约0.74处，可将20份材料分为野生种质和栽培种质两大类；RAPD标记在相似系数约0.70处，也可将供试材料分为野生种质和栽培种质两类，但只有XJ002420为野生种质。对2种标记的分析结果进行相关分析，结果表明，RAPD和ISSR所检测的遗传相似系数呈极显著正相关，相关系数为0.672。以上结论表明，RAPD和ISSR标记可用于橡胶树种质资源的遗传多样性研究，但鉴于ISSR较RAPD有更强的多态性检出能力，ISSR技术应作为遗传多样性研究的首选单引物标记。  相似文献   

设施蔬菜中为害较重的几种病害(二)     

李林  徐作廷  李长松  齐军山  张博 《中国蔬菜》2010,1(17):19-21

<正>在山东省设施蔬菜栽培中,有几种病害的发生有逐年加重的趋势,上期笔者介绍了黄瓜腐霉根腐病、番茄和西葫芦疫霉根腐病、黄瓜靶斑病、厚皮甜瓜死棵,本期重点介绍番茄灰叶斑病、西葫芦软腐病、西瓜水瓤瓜、甜椒烂果和番茄黄化曲叶病毒病。  相似文献