抗凋亡融合蛋白PTD-Bcl-xL原核表达载体的构建及表达纯化     

王晓晔  石博妹  王英群  李珣  刘徳玉  李铭  李芳芳  胡传活 《华北农学报》2016,(1):1-7

人工抗凋亡蛋白PTD-Bcl-x L能保护多种因素引起的细胞异常凋亡,为了获得高纯度Bcl-x L与PTD(Protein transduction domains)的融合蛋白,首先采用TRIzol法提取SD大鼠肝脏总RNA,将RNA反转录为c DNA,设计引物以c DNA为模板,PCR扩增Bcl-x L基因,构建p UM19-T-Bcl-x L质粒,并对质粒双酶切鉴定和测序鉴定;其次设计包含PTD序列的Bcl-x L引物,以测序正确的p UM19-T-Bcl-x L质粒为模板,PCR扩增PTD-Bcl-x L序列,将扩增序列克隆入p ET28a载体,构建PTD-Bcl-x L蛋白的原核表达质粒p ET28a-PTD-Bcl-x L,并对p ET28a-PTD-Bcl-x L载体双酶切鉴定和测序鉴定;将p ET28a-PTD-Bcl-x L重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,并对IPTG诱导融合蛋白表达的浓度和诱导时间进行了优化;SDS-PAGE分析表达蛋白的可溶性情况,在变性条件下用Ni-NTA琼脂纯化融合蛋白;最后用SDS-PAGE、Western Blot及质谱对融合蛋白进行鉴定。结果表明:双酶切p UM19-T-Bcl-x L质粒出现约774 bp大小条带,p UM19-T-Bcl-x L质粒测序结果与NCBI数据库比对序列一致,表明成功构建p UM19-T-Bcl-x L质粒;双酶切p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒出现约744 bp大小条带,p ET28a-PTD-Bcl-x L质粒测序结果与预期序列一致,表明成功构建了p ET28a-PTD-Bcl-x L原核表达载体;在IPTG诱导下p ET28a-Bcl-x L重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出36 k Da大小蛋白,最优IPTG诱导浓度为0.1 mmol/L,最佳IPTG诱导时间为6 h;SDS-PAGE电泳显示融合蛋白主要出现在菌液超声后的沉淀里,以包涵体形式表达,经Ni-NTA琼脂纯化获得了高纯度的融合蛋白;Western Blot和质谱鉴定证明IPTG诱导表达蛋白和纯化的融合蛋白为PTD-Bcl-x L蛋白。纯化得到了PTD-Bc L-x L融合蛋白,推进了PTD-Bcl-x L蛋白在猪、牛等家畜精液冷冻保存的应用进程。  相似文献   

新会柑普茶的活性成分及其保健功效的研究进展     

黄维  胡秀  廖金梅  黎攀  陈玉春  刘少群  孙彬妹  郑鹏 《茶业通报》2021,43(4)

  相似文献   

中山市坦洲镇特色水果生产现状与发展对策   总被引：1，自引：1，他引：0  

张金妹  梁容森  李扇妹 《现代农业科技》2013,(17):147-149

阐述了中山市坦洲镇特色水果的生产现状,概述了该镇主要水果种类发展情况,并提出了发展对策,以期促进该镇水果产业的长足发展。  相似文献   

日粮中添加富利宝和谷氨酸对猪肥育与屠宰性能及肉品质的影响          下载免费PDF全文

杨翠  罗鲜青  黄丽霞  何仁春  周俊华  梁琪妹  李绍波  周志扬  王启芝  杨家晃 《家畜生态学报》2016,37(2):28-33

研究旨在探讨日粮添加富利宝和谷氨酸对大约克×长白二元杂种猪肥育与屠宰性能及肉品质的影响。选取体重约51kg的"大×长"二元杂12头,随机分2组,每组设3个重复,每个重复2头,对照组喂常规(对照)日粮,试验组日粮是在对照日粮的基础上添加0.1%富利宝和0.6%L-谷氨酸。试验期共62d,试验结束后,从每个重复中选取1头体重相似的试验猪进行屠宰和肉品测定。结果表明:两组试验猪的肥育性能无显著差异(P0.05);但试验组猪背膘厚显著高于对照组(P0.05),相反,对照组眼肌面积、肉色和系水力显著高于试验组(P0.05);试验组猪眼肌的谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、苏氨酸、脯氨酸、缬氨酸和精氨酸含量显著高于对照组(P0.05),其总氨基酸和总鲜味氨基酸含量也分别较对照组提高了5.85%(P0.05)和6.87%(P0.05);此外,眼肌的肌内脂肪也由对照组的5.11±0.24%提高到8.86±0.52%(P0.05)。由此可见:日粮添加富利宝和谷氨酸虽然未能提高"大×长"二元杂种猪的肥育和屠宰性能,但可显著提高肌肉总氨基酸、总鲜味氨基酸和肌内脂肪的含量,从而改善其肉质。  相似文献   

加工工艺对工夫红茶品质特点影响的研究进展     

黄维  胡秀  廖金梅  陈玉春  刘少群  孙彬妹  郑鹏 《茶业通报》2021,43(1):32-36

加工工艺对红茶品质有重要影响,是红茶品质形成的主要因素之一.本文就萎凋、揉捻、发酵和干燥四大工序与工夫红茶品质的关系作了综述,分析工夫红茶加工工艺目前研究的细微差别,以期为改进加工工艺、提升工夫红茶品质提供理论依据.  相似文献   

猪miR-124靶向IQGAP2调节巨噬细胞内沙门氏菌的增殖          下载免费PDF全文

陈旺  邓榆  殷俊  官州  金凯  石博妹  黄廷华  姚敏 《南方农业学报》2020,51(12):3066-3072

[目的]明确猪miR-124与其靶基因IQGAP2间的表达调控关系,以及miR-124表达水平与猪巨噬细胞内沙门氏菌数量的关联,为揭示沙门氏菌在感染细胞内存活与增殖的机制提供理论依据.[方法]通过荧光素酶报告基因系统验证miR-124与IQGAP2基因的作用位点;再以GM-CSF诱导的猪巨噬细胞和鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 14028)为试验材料,通过实时荧光定量PCR和流式细胞术测定沙门氏菌感染猪巨噬细胞中miR-124和IQGAP2基因的表达及巨噬细胞内沙门氏菌的增殖情况.[结果]miR-124结合位点野生型载体转染的荧光报告信号显著低于miR-124结合位点突变载体(P<0.05,下同),但共转染anti-miR-124序列后能显著增强miR-124结合位点野生型载体的荧光报告信号.经沙门氏菌感染后,猪巨噬细胞中的miR-124表达被激活,感染12、24和48 h后的相对表达量均显著高于沙门氏菌感染前(0 h),而IQGAP2基因表达水平呈显著下调趋势;在沙门氏菌感染猪巨噬细胞内,miR-124表达水平与IQGAP2基因表达水平呈明显负相关(r=-0.92).miR-124高表达组细胞内的沙门氏菌数量显著高于正常巨噬细胞,但miR-124敲低表达组细胞内的沙门氏菌数量显著低于正常巨噬细胞;IQGAP2基因敲低表达组细胞内的沙门氏菌数量显著高于正常巨噬细胞;此外,miR-124高表达+IQGAP2基因敲低表达组细胞内的沙门氏菌数量与IQGAP2基因敲低表达处理组相比无显著差异(P>0.05),但显著高于miR-124高表达组细胞.[结论]沙门氏菌感染猪巨噬细胞中的miR-124表达水平与IQGAP2基因表达水平及胞内沙门氏菌数量呈负相关,即沙门氏菌可通过上调miR-124表达靶向抑制IQGAP2基因表达,从而调节其在猪巨噬细胞内的增殖.  相似文献   

外源激素对紫薇种子萌发的影响     

肖杰  薛欢  苑景淇  于忠亮  李成宏  王梅芳  周梅妹  杜凤国 《浙江农业科学》2020,61(6):1119-1122

以红火箭、红火球和百日红3个紫薇栽培品种的种子为试验材料,研究了NAA、IBA和GA₃外源激素对紫薇种子发芽率、发芽势、萌发时间等指标的影响。结果表明,3种外源激素均可正向调控红火箭的发芽率,红火球和百日红的发芽率主要受IBA正向调控,10 mg·L^-1 IBA显著提高3个紫薇品种的种子发芽率和发芽势,20~100 mg·L^-1 GA₃均能显著提高3个紫薇品种种子发芽势;1 mg·L^-1 NAA、10 mg·L^-1 IBA、20~50 mg·L^-1 GA₃浸泡红火箭种子后,发芽率和发芽势显著高于对照及其他处理。10 mg·L^-1 IBA浸泡红火球种子后,发芽率和发芽势显著高于对照及1、5、20 mg·L^-1 IBA处理。5和10 mg·L^-1 IBA浸泡百日红种子后,发芽率和发芽势显著高于对照及其他处理。其中,1 mg·L^-1 NAA、10 mg·L^-1 IBA、5 mg·L^-1 IBA分别浸泡红火箭、红火球、百日红后,发芽率最高为88.0%、85.3%、87.3%;此外,各处理与对照组起始萌发时间相差不大,1 mg·L^-1 NAA、10 mg·L^-1 IBA、5~10 mg·L^-1 IBA分别使红火箭、红火球、百日红的萌发时间缩短5、3、4 d。试验结果对紫薇栽培品种的苗木快繁提供理论依据和实际生产的支撑。  相似文献   

农村电商3.0:重构一个鲜活的新乡村     

何莉  陈光炬  陆婷妹 《农村实用技术》2020,(2)

文章立足中国乡村治理的现实背景和客观需求,通过梳理农村电商的发展历程,提出并阐释"农村电商3.0"新概念。结合"互联网+"时代乡村智能化变革的愿景与行动,促使中国农村电商成为连接乡村的新纽带、激活乡村的新平台。  相似文献   

高等学校青年教师提升职业道德修养的路径和意义研究     

万顺妹 《现代农村科技》2023,(6):100-102

高等学校青年教师是高等学校教育事业的有生力量和未来骨干,高等学校青年教师职业道德修养提升面临着诸多挑战和压力,面对这些挑战、压力和诱惑,高等学校青年教师职业道德失范的风险加大。高等学校青年教师提升职业道德修养意义重大,为高等学校青年教师职业生涯发展奠定了坚实基础,为培育符合时代要求的大学生树立了可靠保障,为高等学校教育事业健康有序发展构筑了作风防线。高等学校青年教师职业道德修养提升任重道远,对实现伟大复兴“中国梦”也将产生积极影响。  相似文献   

盐旱胁迫下侧柏幼苗的生理响应及水杨酸的调控作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

偶春  胡欣  姚侠妹  徐莹莹  王伟  王群群 《干旱区资源与环境》2019,33(8):186-193

以侧柏(Platycladus orientalis)幼苗为材料,采用根灌外施水杨酸的方式,探讨盐(200mM NaCl)旱(15%PEG6000)胁迫下侧柏幼苗的生长、叶绿素、活性氧代谢和渗透调节物质含量的响应变化以及水杨酸(0.5mM SA)对其的调控。结果显示:NaCl、PEG6000和NaCl+PEG6000三种胁迫处理抑制了侧柏幼苗的生长、叶绿素、抗氧化物酶(SOD和POD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量,过氧化氢(H_2O_2)、丙二醛(MDA)、脯氨酸和可溶性糖含量显著增加,可溶性蛋白则降低,且均表现为复合胁迫介于单一胁迫之间,除GSH外,影响程度均为NaCl>NaCl+PEG>PEG;外施低浓度0.5mM水杨酸可提高侧柏幼苗的生长、叶绿素含量、抗氧化酶活性和GSH含量、渗透调节物质含量,并降低了H_2O_2和MDA积累。研究发现,盐旱复合胁迫对侧柏幼苗生理特性的影响并不是单一胁迫的简单叠加,与单一干旱胁迫相比,盐旱复合胁迫在一定程度上能够缓解干旱胁迫对侧柏幼苗生长的影响;一定浓度水杨酸同样能够有效缓解盐旱单一或复合胁迫对侧柏幼苗造成的生理伤害,提高其抗性。  相似文献