Effect of EGFP gene transfection on the cell cycle distribution of primary cultured human chondrocytes     

JIANG Xun  ZENG Yao-ying  HE Xian-hui  XU Li-hui  DI Jing-fang  FENG Zheng  ZHAO Jing-xian  WANG Qing  WANG Tong  SHI Jian-bo 《园艺学报》2004,20(6):924-928

AIM: To investigate the effect of enhanced green fluorescence protein (EGFP) gene transfection on the cell cycle distribution of primary cultured human chondrocytes in order to establish a tracking method of cultured human nasoseptal chondrocytes. METHODS: pEGFP-N1 plasmid was amplified in E.coli, and purified by high purity kit. Primary cultured human chondrocytes,which were initially obtained from the nasoseptal cartilage, were cultured in vitro and transferred with pEGFP-N1 by means of electroporation with Amaxa nucleofector device. Transfering process and transient expression were evaluated by laser scanning confocal microscope (LSCM), the transfer efficiency and the cell cycle distribution were evaluated by flow cytometry. RESULTS: There was significant expression of EGFP at 24 h after transferring. The transfection efficiency of pEGFP-N1 into primary cultured human chondrocytes reached 35.37％ at 48 h. It didn't affect the process of cell adherance and had no effect on the cell cycle distribution. CONCLUSION: Primary cultured human chondrocytes, which were transfected with pEGFP, are alive in vitro, and the transferring process doesn't affect the cell cycle distribution. These results suggest that pEGFP-N1 is an ideal transient expression vector for primary cultured human chondrocytes and it might be a well tracer in construction tissue engineered cartilage.  相似文献   

The molecular mechanism of inhibition of murine Lewis lung carcinoma metastasis by weimaining in vivo     

LOU Jin-li  LIN Hong-sheng  QIU Quan-ying  PEI Ying-xia  QI Xin  HE Xiu-juan 《园艺学报》2004,20(4):627-630

AIM: To investigate the anti-metastasis effect of weimaining, extracted from fragopyrum cymosum meissn, a Chinese medicine, on murine Lewis lung carcinoma (3LL). METHODS: The anti-metastasis effect of weimaining in vivo was detected in the grafting lung metastasis model of murine Lewis lung carcinoma. The effects of the drug on the expression of CD34 and E-cadherin were investigated by immunohistochemical staining and RT-PCR. RESULTS: Weimaining effectively inhibited the lung metastasis of 3LL at a concentration of 250 mg·kg^-1·d^-1, significantly suppressed the expression of CD34 and increased the expression levels of E-cadherin protein and mRNA in 3LL cells. CONCLUSIONS: Weimaining inhibits the metastasis of murine Lewis lung carcinoma (3LL) in vivo via increasing the expression of E-cadherin and decreasing microvessel density of tumor tissue.  相似文献   

家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化   总被引：4，自引：0，他引：4  

施振旦  邵西兵  方梅霞  于迎春  刘颖  陈楠 《中国兽医学报》2004,24(3):258-260

从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2～ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0～ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右  相似文献   

水牛精子在胞质内注射后的早期形态变化   总被引：1，自引：0，他引：1  

孟凡丽  韦精卫  石德顺  卢晟盛 《中国兽医学报》2004,24(6):609-612

应用胞质内精子注射 (intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术探讨了水牛卵母细胞胞质与注射精子间的相互作用以及 ICSI精子的形态变化。ICSI后 13h,5 9.4 %的精子头部已膨大 ,且有 18.8%的精子进入解聚状态。雌雄原核发育不同步 ,雄原核在 ICSI后 16 h和 19h的形成率分别为 3.2 %和 4 0 .0 % ;雌原核在 ICSI后 13h已达到 71.9% ,16 h时提高到 90 .3%。经离子霉素与 6 - DMAP联合激活 ,ICSI后 19h产生的胚胎核型以 2 PN PB1 为主 ,其雌原核形成 (激活 )率为 91.3% ,雄原核形成率为 4 0 .0 % ,5 1.3%为孤雌胚。用 5 mm ol/ L 的 DTT预处理精子 1h,可提高精子的解聚率 (30 .9%比 12 .7% ,P<0 .0 5 ) ,但对雄原核的形成率无显著影响 (33.3%比 32 .7% ,P>0 .0 5 )。结果表明 ,水牛精子 ICSI后的雄原核形成时间晚于卵子雌原核形成时间 ,且其比率低于卵子 ,DTT处理精子能提高其解聚率 ,但对雄原核形成无影响  相似文献   

几种脲酶抑制剂对大豆脲酶和绵羊瘤胃微生物脲酶的抑制作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘大森  单安山  石宝明  孙金艳 《中国畜牧杂志》2004,40(6):8-10

本文研究了脲酶抑制剂乙酰氧肟酸 (AHA)、邻苯二酚、氢醌 (HQ)和硼砂对大豆脲酶和绵羊瘤胃微生物脲酶的抑制作用。结果表明 ,在浓度为 0 .0 0 0 1,0 .0 0 1,0 .0 1和 0 .1mmol/L时 ,4种脲酶抑制剂对大豆脲酶的抑制率分别为 :AHA为 6 % ,6 .2 % ,9.6 6 %和 2 9.79% ;HQ为 8.4 % ,13.0 3% ,19.79%和 4 4 .75 % ;邻苯二酚为 2 0 .34% ,19.12 % ,83.16 %和 93.78% ;而硼砂为 16 .5 5 % ,17.18% ,18.95 %和 35 .5 0 %。在相同浓度下 ,4种脲酶抑制剂对绵羊瘤胃微生物脲酶的抑制率分别为 :AHA为 9.5 8% ,14 .0 4 % ,4 1.30 %和 72 .73% ;HQ为 12 .2 1% ,39.99% ,6 4 .6 2 %和 78.87% ;邻苯二酚为 6 .0 7% ,9.36 % ,31.2 9%和 5 0 .4 4 % ;而硼砂分别为 4 .97% ,8.6 3% ,2 1.78%和 32 .0 2 %。  相似文献   

昆虫抗菌肽生物学活性及其应用前景   总被引：8，自引：0，他引：8  

宫霞  施用晖  乐国伟 《中国畜牧杂志》2004,40(8):37-40

昆虫抗菌肽是昆虫免疫后存在于血淋巴中的一类活性肽 ,具有广谱的抗菌、抗病毒、抑制肿瘤的生物活性 ,具有很高的应用潜力。本文主要介绍昆虫抗菌肽的类型、生理活性、基因的克隆与表达及在动物科学中的应用前景  相似文献   

三江白猪线粒体DNA-RFLP的分析     

杨隽李馨  耿忠诚 《黑龙江畜牧兽医》2004,(3):11-13

采用22种限制性内切酶分析了三江白猪线粒体DNA的多态性。结果表明：在60头个体中检出30种限制性态型．归结为7种基因单倍型；其间的差异来自少数限制性位点的突变。单倍型间平均遗传距离为0．35%，群体遗传多态程度为0．044％。三江白猪遗传多样性非常贫乏，说明三江白猪与地方种猪起源于一个共同祖先，在品种形成早期受到创立者效应的制约。  相似文献   

几种绿色饲料添加剂在肉鸡生产上的应用效果     

刘雪兰  石天虹  黄宝华  刘辉  梁永利  冯墨竹 《水禽世界》2004,(5):10-12

选1日龄AA肉鸡390只,分成13组,分别添加不同种类和不同种类组合的绿色饲料添加剂。试验结果表明,益生素能显著(p<0.05)提高肉鸡的生产性能,改善肉品质。  相似文献   

禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究   总被引：21，自引：1，他引：21  

肖运才  李自力  胡思顺  石德时  许青荣  程峰  刘梅  毕丁仁  王桂枝 《畜牧兽医学报》2004,35(5):536-541

以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原，制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体，经用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体，兔抗AIVIgG为第二抗体，建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明，鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL，兔抗AIV IgG的最适工作浓度为5μg/mL；对已知的阳性样品，用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上，且能检出其它亚型的禽流感病毒；与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应，说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测，结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。  相似文献   

家蚕幼虫体黄酮类化合物的提取及测定方法   总被引：2，自引：4，他引：2  

刘淑梅  时连根  李有贵 《蚕业科学》2005,31(1):74-78

为推进家蚕幼虫体的药用开发,研究了家蚕幼虫体黄酮类化合物含量的测定方法。将家蚕幼虫粉过80目筛,选用80%乙醇为溶剂,原料质量浓度按00333g/mL在60℃下抽提4h,重复抽提3次,可高效地提取家蚕幼虫体黄酮类化合物。以NaNO2Al(NO3)3显色,用紫外分光光度计于510nm波长下比色,可精确、稳定地测定出家蚕幼虫体中黄酮类化合物含量。家蚕幼虫体富含黄酮类化合物,其质量比达23770mg/g左右。  相似文献