利用DNA池技术提高基于InDel标记的种子纯度鉴定效率     

兰青阔  余景会  赵新  王永  张桂华  朱珠  陈锐  李欧静  郭永泽  程奕 《种子》2012,31(2):31-33,38

为提高基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测通量,降低检测成本,本研究模拟10种DNA Pooling进行PCR、Pyrosequencing及等位基因频率分析。通过TTest分析不同Pooling间等位基因频率的差异性,确定3 Pooling为种子纯度检测最适Pooling数;建立3 Pooling-InDel-Pyrosequencing标准曲线,其R2达0.999 1;根据该标准曲线,检测黄瓜杂交品种"园中王"30粒杂交种种子纯度,结果为96.67%。本研究丰富了基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测技术体系。  相似文献   

转G2-EPSPS 和GAT 基因的耐除草剂大豆ZH10-6对田间生物多样性的影响     

王成  姚俊津  高越  王雅偲  解美霞  赵新  兰青阔  王永 《中国油料作物学报》2021,43(1):141

明确转基因大豆ZH10-6（转G2-EPSPS 和GAT 基因,耐除草剂）在生物多样性方面的安全性,从田间节肢 动物多样性、大豆病害、大豆根瘤菌和田间杂草等方面进行了调查和分析。结果表明,转基因大豆ZH10-6对田间 节肢动物群落组成、群落结构、主要节肢动物种群的发生规律、大豆主要病害的发生及根瘤菌数量等方面的影响, 与非转基因对照材料相比均无显著差异。目标除草剂草甘膦的施用,能够有效抑制田间杂草的生长,具有较好的 防控效果。因此认为,转基因耐除草剂大豆ZH10-6对田间生物多样性没有明显的负面影响,本研究为转基因耐除 草剂大豆ZH10-6的推广提供了安全性的数据支撑。  相似文献   

4种食源性致病菌多重PCR检测技术的研究及应用   总被引：4，自引：0，他引：4  

赵新  王永  兰青阔  朱珠  程奕 《天津农业科学》2009,15(6):6-8

为建立一种利用多重PCR技术检测和鉴定沙门氏菌(Salmonellla spp)、单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的方法,根据沙门氏菌侵袭力蛋白A基因(invA gene)、单核细胞增生李斯特菌蛋白转录调控基因(prfA gene)、金黄色葡萄球菌自溶素基因(alt gene)、蜡样芽孢杆菌的促旋酶B亚单位基因(gyrB gene)设计引物,进行多重PCR扩增,并对多重PCR反应体系进行优化。在此基础上建立了4种致病菌的多重PCR检测体系,同时以国标法进行对比验证。结果表明,本研究建立的多重PCR检测方法简单、快速、灵敏度高,具有很好的应用前景。  相似文献   

LAMP在检测转基因抗草甘膦大豆cp4-epsps基因上的应用   总被引：4，自引：1，他引：3  

兰青阔  王永  赵新  朱珠  程奕 《安徽农业科学》2008,36(24)

以转基因抗草甘膦大豆为主要研究对象,利用环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),针对cp4-epsps合成酶基因(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)的6个区域设计4条特异性引物,利用一种链置换DNA聚合酶(BstDNA polymerase),在65℃保温30 min,通过荧光显色即可完成对转基因的检测工作。结果显示,该LAMP方法能够特异性检测cp4-epsps基因,其检测灵敏度是常规定性PCR方法的10倍。建立了针对转基因大豆cp4-epsps基因的LAMP检测方法,其具有高度的特异性及稳定性,结果可靠,适合转基因抗草甘膦大豆的快速检测。  相似文献   

环状等温扩增技术快速检测转基因玉米MON863的研究   总被引：3，自引：1，他引：2  

兰青阔  王永  赵新  朱珠  程奕 《玉米科学》2011,19(1):31-34

采用环状等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP),针对转基因玉米品系MON863中玉米基因组与外源基因结合处设计4条特异性引物,建立MON863的快速检测技术体系,并对时间、温度等反应条件及体系灵敏度、特异性等进行探索。结果表明:该检测体系最适反应温度为63℃,反应时间60 min,灵敏度是常规定性PCR的10倍。该检测方法具有高度的特异性和稳定性,操作方便、简单、省时。  相似文献   

改良Chelex-100法和CTAB法用于转基因抗草甘膦大豆检测效果的比较   总被引：2，自引：0，他引：2  

王永  兰青阔  张莉  赵新  朱珠  程奕 《大豆科学》2008,27(5)

以转基因抗草甘膦大豆为研究材料,分别采用改良Chelex-100法和常规CTAB法提取基因组DNA,以提取DNA的浓度和纯度,同时以PCR扩增大豆的内源基因(lectin)及外源特异性序列(CaMV35S,nos,Cp4-epsps)的效果对两种方法进行比较和评价.结果表明:虽然改良Chelex-100法DNA提取纯度不高,但是提取效率与常规CTAB法相当,而且改良Chelex-100法能够快速在1 h之内从大豆中提取DNA,所提取的DNA可以直接用于PCR扩增反应,PCR扩增产物电泳条带清晰.因此,改良Chelex-100法可以替代CTAB法提取DNA用于转基因检测,该方法具有经济、简便、快速的特点.  相似文献   

基于InDel标记快速检测黄瓜津优38种子纯度   总被引：4，自引：0，他引：4  

兰青阔  张桂华  王永  赵新  朱珠  杜胜利  程奕 《种子》2011,30(6)

以黄瓜品种津优38中插入缺失(InDel)标记为研究对象,筛选获得能够区分津优38父本、母本及其杂交种的[TT]缺失位点:应用焦磷酸测序技术检测该位点,初步建立基于InDel标记的津优38种子纯度鉴定方法并检测8批种子样品.结果表明,应用焦磷酸测序技术检测[TT]缺失住点能明显区分出津优38父本、母本及杂交种;基于InDel标记的津优38种子纯度鉴定方法具有高准确性、高通量、操作简单、易于自动化等优点;8批种子样品平均种子纯度为97.08%,与SSR鉴定结果(95.83%)基本相符.  相似文献   

国内外转基因检测标准体系现状与启示     

兰青阔  李文龙  孙卓婧  赵新  陈锐  王永  宋贵文 《农业科技管理》2020,39(3)

全球转基因作物产业化已经23年,种植面积增长了113倍,我国转基因技术已跻身国际先进行列,转基因作物产业化也有所突破。转基因检测标准体系是转基因生物安全管理必不可少的技术支撑。本研究对国内外主流的转基因检测标准体系进行检索,分析其转化体覆盖度、技术先进性等特点,并从定量检测方法、新型转基因产品检测方法、检测标准国际化等方面提出建议,以期为我国转基因检测标准体系进一步发展提供思路。  相似文献   

基于复合EST-SSR 标记的大白菜种子纯度
鉴定及SNP 位点获取     

赵　新　王　永兰青阔  贺长征陈　锐　李欧静　刘　娜朱　珠　郭永泽 《中国蔬菜》2013,1(14):31

以10 份大白菜杂交种及其亲本为研究对象,基于NCBI 基因组数据库中EST 序列信息,应
用SSR 标记及高分辨 率溶解曲线技术筛选出用于大白菜杂交种纯度鉴 定的SNP 位点及复合 SSR 位 点,并
根据 高通量分子检测技术 种子纯度鉴定的需要 ,对单粒种子育苗条件、单株植株提取 状态、快速DNA
提取方法、复合PCR 体系的建立等关键 技术进行了摸索及优化。结果显示：经过48 h 破壳状态的单粒
种子,采用改良CTAB 法可于3 h 内得到较高质量的DNA;同时经7 d 达到苗期状态的单株叶片,采用
chexe-100 法亦可于40 min 内完成DNA 提取;筛选得到的SNP 位点可对6 份大白菜杂交种进行纯度鉴定,
复合SSR 位点可对10 份大白菜杂交种进行纯度鉴定。  相似文献   

饲料中牛、羊源性成分现场可视化检测方法的建立     

朱珠  兰青阔  赵新  陈锐  郭永泽  王永 《中国畜牧兽医》2014,41(7):95-98

根据牛、羊线粒体中物种特异性序列设计引物,应用可视化环状等温扩增技术（visual loop-mediate isothermal amplification,vLAMP）对牛、羊源性成分进行快速扩增及可视化判断,同时建立牛、羊源成分人工污染的饲料模型,考察vLAMP检测方法的灵敏度。结果表明,牛源性引物和羊源性引物仅分别对牛、羊源性成分产生特异性扩增,灵敏度高达0.001%。本试验所建立的牛、羊源性成分现场可视化筛查方法具有较高的特异性与灵敏度,操作简单、快速,可用于饲料中牛、羊源性成分污染和食品掺伪的现场可视化检测。  相似文献