尤力克柠檬上一种新病害的生物学特性及RT-PCR检测   总被引：5，自引：3，他引：2  

陈洪明  王雪峰  周彦  周常勇  郭俊  李中安 《植物保护学报》2015,42(4):557-563

近年我国云南瑞丽市的一果园尤里克柠檬上出现一种引起叶片皱缩、反卷或呈船形,叶背水浸状、侧脉脉明、黄化的柑橘新病害。为明确该病害的病原及其生物学特性,通过田间观察、病样接种、电镜观察,并基于柑橘黄脉病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)外壳蛋白基因设计引物对病样进行RT-PCR检测。结果表明,该病是一种嫁接传染性病害,能侵染柠檬和酸橙品种且症状明显,并能摩擦接种到辣椒和豇豆等草本植物。该病发病最适温度为18~24℃。春梢嫩叶症状表现明显,夏梢和秋梢基本不表现症状,而晚秋梢也表现出较春梢稍弱的典型症状。引致该病的病毒为(13~15)nm×(400~1 000)nm大小的联合丝状病毒。RT-PCR扩增产物为614 bp,且其与CYVCV外壳蛋白序列相似性达97%以上,表明该病害是由CYVCV引起的柑橘黄脉病,并初步建立了该病的RT-PCR检测技术。  相似文献   

普通烟草铁氧还蛋白I的原核表达、抗体制备及在ToMV侵染烟草体内表达分析     

孙现超  李勇  周常勇  青玲 《中国农业科学》2010,43(19):3981-3987

【目的】构建普通烟草铁氧还蛋白I(ferredoxin I,Fdn-I)原核表达载体,表达可溶性Fdn-I蛋白,并制备其多克隆抗体,分析Fdn-I在ToMV侵染烟草叶片内的表达情况。【方法】以Fdn-I全长cDNA为模板,用PCR扩增Fdn-I,克隆至原核表达载体pEGX-6p-1,构建Fdn-I与GST融合表达载体pEGX-Fdn-I,重组质粒转化原核表达菌株BL21,优化GST-Fdn-I可溶性表达条件后大量表达蛋白,用GST亲和层析法纯化获得可溶性GST-Fdn-I蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体。ELISA测定抗体效价,Western印迹法检测抗体的特异性和ToMV侵染前后烟草叶片内Fdn-I的表达情况。【结果】在温度为28℃,IPTG诱导浓度为0.3 mmol?L-1条件下表达出大小为41.3 kD的可溶性融合蛋白。纯化获得约4 mg可溶性蛋白,免疫家兔制备了效价为1/6 400的多克隆抗体。Western印迹结果表明,该抗体可以与Fdn-I的原核和酵母表达产物特异性结合。分析表明Fdn-I在ToMV侵染后烟草叶片内含量明显低于其在健康烟草叶片内的含量。【结论】通过Fdn-I大肠杆菌中的可溶性表达,制备获得了其高效价特异性多克隆抗体,利用该抗体检测表明ToMV侵染烟草降低了Fdn-I的表达。  相似文献   

重庆南瓜病毒病病原ELISA 检测及CMV 变异分析     

青玲  包凌云  周常勇  杨水英  孙现超 《园艺学报》2010,37(3):405-412

 利用7 种植物病毒的抗体,对采自重庆7 个区县的67 份南瓜病毒病样品进行了抗原直接包被酶联免疫吸附分析（ACP-ELISA）检测。检测结果表明,在这67 份样品中,至少59 份感染了所要检测病毒,其中,感染黄瓜花叶病毒 (Cucumber mosaic virus, CMV)、烟草花叶病毒 (Tobacco mosaic virus,TMV)、番茄花叶病毒 (Tomato mosaic virus, ToMV)、芜菁花叶病毒 (Turnip mosaic virus, TuMV)、蚕豆萎蔫病毒2 号 (Broad bean wilt virus 2, BBWV-2)、马铃薯Y 病毒 (Potato virus Y, PVY)和马铃薯X 病毒(Potato virus X, PVX) 的样品分别为80.60%、77.61%、74.63%、82.09%、76.12%、83.58%和55.22%。在检测呈阳性的59 份样品中有93.22%的样品受到2 种以上病毒的复合侵染,而受7 种病毒复合侵染的样品高达60.00%,表明在南瓜上病毒复合侵染现象相当严重。进一步对54 份受CMV 侵染的南瓜样品检测发现,CMV 亚组Ⅰ (CMVⅠ) 病毒侵染的样品有49 份,占90.74%,CMV 亚组Ⅱ (CMVⅡ) 病毒侵染的样品为11 份,占20.37%;其中6 份（11.11%）样品检测到CMVⅠ和CMVⅡ的复合侵染。以免疫捕获反转录PCR (IC-RT-PCR) 扩增了一个CMVⅠ分离物 (CMV-CQ) 近全长CP 基因并进行序列分析,结果证实其属于CMV 亚组Ⅰ型,其核苷酸序列与国内CMVⅠ型赤豆分离物 (CMV-RB) 的同源性最高,为98.1%。  相似文献   

苗床柑桔脱毒苗的培育技术研究     

李太盛  周常勇  陈洪明 《中国南方果树》2010,39(3)

柑桔苗木依照其育苗程序一般分为普通苗、脱毒苗.普通苗是指育苗所用接穗采自普通桔园或采穗圃,其操作规程一般无严格要求.脱毒苗是指砧木种子经过消毒处理,或来自专用砧木种子园,接穗采自脱毒采穗圃或母本园,育苗过程中严格遵循柑桔脱毒苗繁育技术规程,执行无病毒操作而培育出来的苗木.  相似文献   

柑橘疮痂病研究进展     

段硕  周常勇 《中国果业信息》2012,41(5)

柑橘疮痂病是一种重要的柑橘真菌性病害,1994年曾在我国温州蜜柑产区爆发,给当地柑橘产业造成了严重的经济损失。且该病害在我国分布广泛,危害较重。为了进一步掌握该病的发生发展规律、设计有效的防治手段。本文对柑橘疮痂病发病症状、病原、流行因素、病害鉴定、防治方法等方面进行了概述。  相似文献   

柑桔木质陷孔病 —一种柑桔生产上值得重视的类病毒病害     

吴琼  王雪峰  周常勇 《中国果业信息》2013,42(1)

柑桔木质陷孔病是世界柑桔生产上一种重要的类病毒病害,主要为害宽皮柑桔及宽皮柑桔的某些杂种。虽然我国此前未报道有该病的发生,但近年来应用分子检测技术在我国部分柑桔产区已检测到该病的病原。本文简述了木质陷孔病的发生分布、病原、致病机理及我国的研究进展,以期引起各级生产部门重视,并为该病防控提供依据。  相似文献   

温州蜜柑萎缩病     

周常勇 《中国柑桔》1991,20(2):35-37

  相似文献   

柑桔花叶病毒的一种新的鉴别寄主——枸头橙     

周常勇  赵学源 《中国柑桔》1994,23(1):12-14

在枸头橙上接种柑桔花叶病毒（ＣｉＭＶ），以后抽发的春梢幼嫩期表现黄化症状，随着春梢叶片的伸展产生花叶症状。而在枸头上接种类似病毒温州蜜柑萎缩病毒（ＳＤＶ），以后抽发的春梢表现正常。故认为枸头橙是ＣｉＭＶ的一种新的鉴别寄主，可以区分开ＣｉＭＶ和ＳＤＶ.  相似文献   

基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的柑橘溃疡病菌检测方法     

马志敏  段玉  许建建  宾羽  周常勇  宋震 《园艺学报》2021,(3):590-599

根据柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri ssp.citri,Xcc)基因组的保守序列设计特异引物,通过对引物浓度、反应温度和反应时间条件优化,建立了柑橘溃疡病菌重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法。该方法无需PCR仪等复杂设备,在39℃恒温反应30 min即可完成检测过程,快速简便。该检测方法与其他柑橘病原无交叉反应,特异性强;检测灵敏度是普通PCR的100倍,与实时荧光定量PCR基本一致。对71个柑橘样品进行检测,RPA检测出溃疡病阳性样品22个,与PCR、实时荧光定量PCR检测结果一致。  相似文献   

叶面肥在柑桔育苗上的应用效果初探   总被引：3，自引：0，他引：3  

卢志红  邓烈  何绍兰  周常勇  李太盛  李中安  吴荣伦 《中国南方果树》2009,38(3)

以奇农素、多效灵、宝力丰等3种复合型肥料以及尿素、磷酸二氢钾、钾宝等3种常用肥料做叶面肥,喷施于1年生柑桔幼苗上,观测不同叶面肥对柑桔幼苗生长的影响.结果表明,喷施奇农素、宝力丰和尿素的一级苗比率明显提高,为对照(清水)的4.1～7.1倍;合格苗比率比对照提高21.6%～26.1%.6个叶面肥处理的平均径粗明显增大,增加幅度为0.1～0.8 mm.喷磷酸二氢钾处理的叶绿素含量和苗木高度低于对照.  相似文献