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旨在对山羊脂肪酸转运蛋白2(fatty acid transport protein 2,FATP2)基因进行克隆及生物信息学分析,检测FATP2基因在山羊不同组织中的表达差异,并进一步揭示干扰FATP2基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳羊(n=12)为试验动物。采用RT-PCR法扩增并克隆山羊FATP2基因,进行序列对比、系统发育树构建及生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR检测FATP2基因在山羊不同组织中及在山羊肌内前体脂肪细胞不同分化时期的相对表达水平,合成SI-RNA干扰序列并转染至山羊肌内前体脂肪细胞;使用RT-qPCR检测FATP2干扰效率及脂质代谢相关基因的表达情况;通过Bodipy染色法观察干扰FATP2对脂滴形成的影响,利用GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量。结果显示,获得山羊FATP2基因序列全长2 335 bp, CDS区1 863 bp, 5′UTR 188 bp, 3′UTR 284 bp;共编码621个氨基酸,山羊FATP2基因在肝脏表达量最高;RT-qPCR检测结果显示,FATP2表达在细胞中被显著干扰;B... 相似文献
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采用气相色谱法测定配合饲料中的肌醇含量,结果表明:该方法前处理快速简单,回收率稳定(91.3%~103.6%),灵敏度、准确度达到配合饲料日常分析要求,可作为检测配合饲料中肌醇含量的一种方法。 相似文献
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【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T(fast skeletal troponin T3,TNNT3)作为肌钙蛋白(troponin, Tn)家族成员,调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体,分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达模式及其在肌细胞分化中的作用,深入解析TNNT3基因在山羊骨骼肌生长发育过程中的作用机制。【方法】基于NCBI已公布山羊TNNT3基因(NM_001314210.1)和牛TNNT3基因(XM_010821200)mRNA序列,使用软件Primer Premier 6.0设计引物,以简州大耳羊胚胎期和出生后7个阶段骨骼肌为试验材料,克隆测序获得山羊TNNT3基因的CDS区可变剪切体,利用软件ORF Finder、EditSeq、DNAMAN、ClustalW和MEGA_X_10.1.8等对序列进行生物信息学分析;进一步设计实时荧光定量(real-time PCR,RT-qPCR)及半定量引物,研究TNNT3基因剪切体在7个不同组织(背最长肌(longissimus dorsi muscle,LD)、半膜肌(semimembranosus muscle,SM)、心、肝、脾、肺、肾)和7个发育阶段(胚胎期E75、E90、E105和出生后B3、B45、B150、B300)肌肉组织(背最长肌和半膜肌)中表达模式;此外,对转录本TNNT3_3进行体外编码能力检测确定其具有编码蛋白的能力,并在山羊骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,MuSCs)中过表达,观察细胞形态变化以及检测标志基因的表达变化,研究其对山羊MuSCs分化的作用。【结果】①TNNT3(NM_001314210.1)CDS区全序列主要含有18个外显子,其中外显子16/17相互排斥,转录后单一表达。克隆发现山羊TNNT3基因 5个新转录本(TNNT3_1—5),其外显子数分别是15、15、20、16、14。②生物信息学分析结果显示山羊TNNT3基因核苷酸序列和氨基酸序列与绵羊、牛、猪等哺乳动物具有很高的一致性,而与鱼类和爬行类动物的一致性较低,说明TNNT3基因序列在哺乳动物高度保守。③TNNT3 mRNA在背最长肌、半膜肌、心、肝、脾、肺、肾7个组织中都有表达,其中在骨骼肌中高度富集(P < 0.01),心脏及肺次之,其余组织中较低;TNNT3 mRNA在背最长肌和半膜肌中的表达始终处于一个动态变化中,胚胎期TNNT3在半膜肌的表达量高于背最长肌(P<0.05);出生后则背最长肌中高于半膜肌(P<0.05)。④山羊TNNT3基因转录本TNNT3_3重复出现保守的外显子9—11(138bp),体外翻译实验显示其可编码蛋白且蛋白大小与预期基本相符(37 kD);相较于对照组,在山羊MuSCs中过表达该转录本使肌分化标志基因Myomaker、MyoG和MyH4 mRNA极显著升高(P < 0.01)。【结论】获得了山羊TNNT3基因具有完整CDS区5个新可变剪切体,TNNT3主要在肌肉组织(背最长肌和半膜肌)中高表达,在哺乳动物中高度保守且促进成肌分化。初步表明TNNT3基因在动物肌肉生长发育中具有重要的生物学功能。 相似文献
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<正>1发病情况进入秋季以来,滦南地区的肉鸡肌胃炎发病日渐严重,最早可见3日龄发病,发病率占总放养量的80%,病死率仅占到2%~3%,但病程长、残次率高。临床症状为采食量低、生长不良、料便为主。发病初期剖检肌胃角质膜有小裂口,剥离后反面呈现白色结节,严重者肌胃糜烂,形成大的溃疡面。笔者经过总结现将该病的治疗过程介绍如下: 相似文献
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近期许多地区出现了一种以鸡采食量低,生长不良、消瘦、整齐度差,粪便过料等外观症状以及腺胃肿大如球状,腺胃黏膜溃疡、脱落,肌胃糜烂为主要特征的流行性、慢性消耗性疾病,发病病程长、死淘率高,发生率呈上升趋势。瑞普公司领导对此次病情高度重视,受领导委派,笔者到本次病情发病比较严重的辽宁八面城、开原、辽阳等地区进行实地走访调查。现将本次调查情况总结如下: 相似文献
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采用肌电测试方法以及主观评价与客观测试相结合的方式,分析了沙发椅背倾角与坐姿舒适度之间的关系,为从人体工程学的角度优化沙发椅背设计以及对沙发舒适性的评价提供依据.实验研究表明,当沙发坐垫硬度为89N,沙发椅背硬度为32N,沙发椅背高度为600mm,椅背倾角分别为100°、110°、120°时,使用倾角为110°的椅背总体舒适感最好,其次为使用倾角120°的椅背,使用倾角为100°的椅背总体舒适感最差 相似文献
99.
美国的研究人员评价了暴露在产气荚膜梭菌的环境中,日粮中的Ca、P和肌醇六磷酸酶对肉鸡生产性能的影响。1日龄科宝500肉公鸡称重后随机分成6个处理组,每个处理设9个重复,每个重复32只鸡。2种Ca水平分别为0.6%和0.9%,2种P水平分别为0.3%和0.45%,2种肌醇六磷酸酶水平分别为0和1000FTU/kg,试验采 相似文献
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前段时间本地禽病疫情在发病时间上具有一定的特点,即雏鸡在7日龄左右首免新支二联疫苗后,出现精神不佳、采食下降及轻度腹泻,连续几天后尾羽开始拉长,同时身形也开始变长,有零星死亡。解剖后,主要病变在腺胃和肌胃,腺胃体积增大,黏膜软化易破损,刮开乳头流出类似浓汁样液体;肌胃体积无变化,个别角质层有开裂、溃烂,揭开后,在角质层有病变部位的肌肉层有的出现发 相似文献