家蚕核型多角体病毒(BmNPV)lef-11基因在病毒感染宿主细胞中的表达特征     

董战旗  胡楠  陈婷婷  董非凡  蒋亚明  鲁成  潘敏慧 《蚕业科学》2016,42(2)

杆状病毒晚期表达因子(late expression factor,LEF)是参与病毒基因组DNA复制和病毒基因转录调控的一个重要家族,该家族成员LEF-11为13 k D的小分子蛋白质。通过比对目前已经测序的63种杆状病毒基因组序列,发现LEF-11的编码基因lef-11在除宿主为双翅目昆虫的Cuni NPV外的所有杆状病毒基因组中都存在,暗示lef-11基因可能在包括家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)在内的杆状病毒复制过程中行使重要功能。通过RT-PCR检测和Western blotting分析lef-11基因及其编码蛋白质在Bm NPV侵染的家蚕卵巢培养细胞Bm N中的转录与表达时相,其转录本从侵染后6h开始持续表达,蛋白质从侵染后12 h开始持续表达。当利用DNA聚合酶特异抑制剂阿非迪霉素(aphidicolin)阻断Bm NPV病毒基因组DNA复制之后检测LEF-11的表达受到抑制,暗示LEF-11的表达起始于病毒DNA复制之后。以上结果表明:BmNPV lef-11基因在杆状病毒中非常保守,是一个晚期表达基因,可能不直接参与病毒的起始复制,而是参与病毒的大规模复制过程。  相似文献   

利用深度测序技术鉴定疑似桑花叶卷叶病感病桑树叶片中的相关病毒     

苏秀  陈莎  朱诚棋  周湘  马良进 《蚕业科学》2016,42(4)

植物通过小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰机制来防御外来病毒感染,通过对感病植物材料小RNA(sRNA)的深度测序,获得这一过程中产生的与病毒序列高度一致的siRNA序列信息,可以快速地鉴定侵染植物的病毒组成。以采集自浙江省桐乡市桑园疑似感染桑花叶卷叶病(原称桑花叶型萎缩病)的桑树叶片为材料提取总RNA,构建sRNA文库并进行深度测序,对测序得到的总sRNA进行组装后,比对鉴定出桑花叶卷叶病相关病毒(mulberry mosaic leaf roll-associated virus,MMLRa V),并分别得到占MMLRa V 2个组分全基因组14.19%和21.86%的核酸序列。进一步以感病桑叶组织的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得部分MMLRa V基因组序列,经Sanger测序确定采集的感病桑树叶片中只存在MMLRa V。通过生物信息学方法分析表明,MMLRa V来源siRNA在基因组中的长度分布、5'端碱基偏好性及热点区分布等具有明显特点。研究结果显示,利用siRNA深度测序技术鉴定桑树病毒是非常高效的手段。  相似文献   

浙江金华地区越冬意蜂群大量死亡原因调查与分析     

《中国蜂业》2016,(4):20-24

2014年冬,浙江多地意蜂群出现大量死亡。为了探究这一突发事件的原因,我们实地察看了现场、发放了调查问卷,并取样进行了病毒和微孢子虫的检测分析。结果表明,本次突发事件的主要原因可以排除急性农药中毒和急性污染物中毒的可能性。在病毒感染率上,患病蜂群DWV的感染率显著高于健康蜂群,但健康蜂群BQCV的感染率却显著高于患病蜂群。在病毒多重感染水平和病毒滴度上,患病蜂群显著高于健康蜂群;同时,患病蜂群N.ceranae的感染率和感染水平都要显著高于健康蜂群。本研究提示多重病毒感染、DWV和IAPV的高病毒滴度及N.ceranae的感染和这次蜜蜂死亡事件密切相关。鉴于狄斯瓦螨在促进病毒病方面的作用,蜂螨也有可能是蜂群死亡的间接原因之一。此外,本研究同时表明,几乎所有的表面健康蜂群同时感染多种病原,健康情况堪忧。为避免类似死亡事件的发生,一方面需力求降低病原体的感染水平,另一方面可以调整饲养管理方式促进蜜蜂的健康水平,同时减少外界不良因素的刺激。  相似文献   

PEDV疫苗株与野毒株RT-PCR鉴别诊断方法的建立及临床应用     

《中国兽医杂志》2016,(10)

根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗株和野毒株在ORF3基因上的差异,我们设计了一对引物用于建立PEDV疫苗株和野毒株的RT-PCR鉴别诊断方法,其中疫苗株PCR扩增产物长度为213 bp,野毒株为262 bp。特异性试验结果表明,该引物对猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒的扩增均为阴性。2014年3月至2015年4月期间利用该方法对河南省51家猪场的581份腹泻样本进行检测,结果发现,PEDV总阳性率为54.9%(391/581),其中野毒株阳性率84.9%(332/391),疫苗株阳性率为15.1%(59/391),说明当前腹泻样本中的PEDV检出率依然较高,且在这些PEDV阳性病料中以野毒感染为主。  相似文献   

闽西地区猪伪狂犬病病毒变异株gC基因克隆与序列分析     

《中国兽医杂志》2016,(1)

为了解闽西地区2013年以来猪伪狂犬病病毒(PRV)流行株的现状、分子生物学特征和遗传演化规律,收集了闽西不同地区的14株PRV分离株,并对其gC基因进行遗传变异分析。结果表明,14株PRV分离株与2012年以来国内不同省份分离的PRV变异株的核苷酸序列同源性为98.8%~99.7%,而与Bartha疫苗株核苷酸序列同源性为93.6%~93.8%。氨基酸多序列比对发现,14株PRV分离株和近年来国内分离的PRV毒株gC基因氨基酸序列同源性较高,有很多相同的特征性氨基酸替换,其中最有特征性的是aa52~aa61,aa63~aa69位和aa186~aa194位氨基酸的替换和插入。遗传进化树分析表明,14株PRV分离株与2012年以来国内不同省份分离的PRV株位于一个相对独立的大分支中,且形成了一个独立的亚分支,而与Bartha疫苗株存在很大差异,亲缘关系较远。抗原表位预测分析表明,PRV闽西分离株与Bartha疫苗株相比发生了抗原漂移,该差异是否预示闽西地区流行株正在向远离疫苗株的方向变异尚有待进一步研究。  相似文献   

灵山土鸡暴发传染性喉气管炎的快速诊断     

《畜牧与兽医》2016,(8):83-85

2016年3月,广西某鸡场一群10 000只115日龄的灵山土鸡群出现鸡冠发绀、抬头伸颈、呼吸极度困难等症状,至送检时已累计死亡600余只。根据病鸡临床症状,初步怀疑感染了呼吸系统病原。剖检病死鸡,见患鸡喉头内有黏液,气管严重充血、出血,气管内壁附有黄色豆腐渣样物;脾脏肿大,表面有细小灰白色坏死点等病变。无菌取病死鸡的喉头、气管、脾脏等病变组织,1/2用于提取样品总DNA进行传染性喉气管炎病毒的PCR检测,1/2用于提取样品总RNA,经RT-PCR检测传染性支气管炎病毒和新城疫病毒。结果显示:传染性喉气管炎病毒的检测呈阳性、传染性支气管炎病毒和新城疫病毒的检测呈阴性,确定该鸡群患了传染性喉气管炎。  相似文献   

猪捷申病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用     

《畜牧与兽医》2016,(6):126-129

参考Gen Bank中猪捷申病毒(PTV)基因序列,通过比对分析,设计引物和Taq Man探针,建立荧光定量RT-PCR检测方法。该方法的最低检测灵敏限度为12.6拷贝/μL,组内组间重复试验的变异系数均小于2%,具有较好的特异性,对猪常见病原如猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒和伪狂犬病病毒等均没有特异性扩增。用本研究建立的荧光定量RT-PCR方法检测来自猪场的156份猪粪便,阳性检出率为38.5%,与套式RT-PCR符合率达100%,表明本试验建立的荧光定量RT-PCR方法适用于PTV的快速批量筛检,为PTV感染的流行病学调查提供了必要的技术手段。  相似文献   

检测新城疫病毒的纳米PCR技术建立与初步应用     

《畜牧与兽医》2016,(1):104-106

根据Gen Bank登录的新城疫病毒(NDV)M基因核苷酸序列设计引物,建立了NDV纳米PCR检测方法。敏感性和特异性试验结果表明,该方法对NDV的最低核酸检出量分别为27 pg,比传统PCR敏感10倍,可扩增出297 bp的特异性核酸片段,而对禽流感病毒、传染性法氏囊病毒与传染性支气管炎病毒的检测结果均为阴性。该方法可用于新城疫病毒的临床快速检测与流行病学调查。  相似文献   

猪skMLCK基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率测定     

《畜牧与兽医》2016,(2):70-73

为了构建猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶(sk MLCK)基因有效短发夹RNA(shRNA)的慢病毒载体,筛选出最佳干扰效率的序列,采用RNAi技术,设计并合成3条siRNA干扰序列,插入到慢病毒穿梭质粒(h U6-CMV-puror-Ploy A)上,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,收集病毒上清并进行病毒滴度的测定,将其转染小鼠C2C12细胞,分别用实时定量PCR和Western blot方法检测细胞中sk MLCK基因mRNA和蛋白的表达。结果显示:PCR扩增和测序分析结果显示靶向sk MLCK RNAi慢病毒载体构建成功;转染小鼠C2C12细胞后,sk MLCK基因mRNA和蛋白均受到不同程度抑制,实时定量PCR显示,抑制率分别为(29.2±4.43)%、(76.4±7.33)%、(20.0±1.8)%;Western blot显示,抑制率分别为(29.6±5)%、(42.4±1.6)%、(34.3±1.2)%。结论:成功构建猪sk MLCK基因有效shRNA的慢病毒载体,确定干扰载体-2(sk MLCKRNAi-2)具有最佳干扰效果,证实sk MLCK基因RNAi慢病毒载体能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为进一步研究该基因与肌肉肉质性状的关系奠定了基础。  相似文献   

PRRSV变异株ORF5全基因的可溶性表达与重组蛋白的纯化     

《中国兽医杂志》2016,(4)

为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株可溶性糖基化囊膜蛋白(GP5),从p MD18-T-ORF5(V)重组质粒中PCR扩增得到PRRSV变异株LX13(1)结构蛋白ORF5全基因编码区,并克隆至原核表达载体p Cold TF DNA上,得到重组表达质粒p Cold-TF-GP5(V),转化大肠埃希菌BL21中诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western Blot鉴定分析。结果表明,目的基因插入位置和阅读框正确,成功表达的融合蛋白分子量约为75.2 ku,并以可溶性蛋白的形式存在,表达量约占菌体总蛋白含量的22.26%。该融合蛋白能与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应,说明重组蛋白具有反应原性。该可溶性重组蛋白的获得为研究PRRSV变异株GP5蛋白的抗原性奠定了基础。  相似文献