建鲤组织蛋白酶L 的原核表达、纯化鉴定及多克隆抗体的制备     

李树红  陈志光  李冉  李新  李松  陈秀华  蒋然然  李美良  马璐阳 《中国水产科学》2015,22(5):849-857

对原核表达的重组建鲤组织蛋白酶L(Cathepsin L,CAT L)蛋白进行尿素洗涤和Ni-NTA亲和层析纯化,该目的蛋白经300 mmol/L咪唑洗脱为单一峰,SDS-PAGE结合TSK-GEL G2000SWxl凝胶过滤高效液相色谱分析表明重组CAT L获得了高度纯化,分子量约28 k D,纯度超过95%。Z-Phe-Arg-MCA底物测活法显示该重组CAT L表现为半胱氨酸蛋白酶活性,能与其内源抑制因子Cystatin以1︰1的摩尔比结合,具有生物学活性。以纯化的重组CAT L蛋白免疫Balb/C小鼠获得抗血清,经ELISA法检测获得的CAT L抗血清效价高于1︰512000;Western blotting鉴定结果表明该抗体具有良好的特异性,能够识别原核表达的重组CAT L蛋白。免疫组织化学分析结果表明,该抗体还能识别建鲤小肠、肝胰脏、脾、背肌和心肌组织表达的内源性CAT L蛋白。因此可利用该抗体从蛋白水平检测CAT L在鱼类不同组织中的表达和分布情况。  相似文献   

人凝血酶原复合物提取及纯化工艺的研究     

何淑琴  张丽铃  黄璠 《安徽农业科学》2013,(17):7420-7422

[目的]确定血浆中人凝血酶原复合物提取及纯化的最佳工艺条件。[方法]以人血浆为原料,凝血酶原复合物的吸附率和回收率为评价指标,采用单因素试验及正交试验对提取和纯化条件进行优选。[结果]最佳工艺为:选用pH值为7.0的DEAE-Sephadex A50凝胶从人血浆中提取人凝血酶原复合物,吸附50 min时,凝胶对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的吸附率可达84.0%、86.5%、85.7%和78.0%;采用NaCl浓度为0.1 mol/L、pH值为7.2的洗涤液洗涤吸附后的凝胶5次,然后用NaCl浓度为2.0 mol/L的洗脱液洗脱3次,对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的回收率可达84.9%、76.4%、82.8%和78.7%。[结论]该工艺合理、可行,适合人凝血酶原复合物的工业化生产。  相似文献   

关于耐湿园林植物处理城市污水的探讨     

赵妍  胡增军 《吉林农业科技学院学报》2010,(1)

近年来,我国的水污染现象越来越严重,而对植物处理城市污水方面的研究国内外只局限于芦苇(Phragmites australis)、香蒲(Typha orientalis Presl.)等水生植物,虽对污水净化效率较高,但植物种类单一且观赏价值不高。针对这些不足,探讨了在植物选择上应扩展到耐湿园林植物,在注重污水净化效果的同时又体现植物的美学功能,为现代城市营造出一处生态功能景观。  相似文献   

Characterization of a pothos (Scindapsus aureus) virus with unusual properties     

S. Sabanadzovic  D. Boscia  P. Saldarelli  G. P. Martelli  R. Lafortezza  R. Koenig 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》1995,101(2):171-182

A virus for which the name of pothos latent virus (PoLV) is proposed, was isolated by inoculation of sap from symptomless plants ofScindapsus aureus. PoLV had isometric particlesc. 30 nm in diameter, a monopartite genome consisting of a non polyadenylated, single-stranded RNA moleculec. 4,300 nucleotides in length, constitutingc. 17% of the particle weight, and a single type of coat protein subunit with aM _r ofc. 40,000 Daltons. The biological properties (host range reactions) of PoLV resembled those ofTombusviridae for it infected most of the artificial hosts locally, inducing symptoms recalling those elicited by several species of the above family. Like tombus- and carmoviruses, PoLV had two subgenomic RNAs which, however, differed in size from those of both genera. The dsRNA pattern was also distinctly different. Cytopathological features recalled those of tombusviruses except for the lack of multivesicular inclusion bodies. PoLV was serologically related to, but distinct from twoCarmovirus (i.e., galinsoga mosaic and Ahlum waterborne viruses) and threeTombusvirus species (i.e. eggplant mottled crinkle, Sikte waterborne and Lato river viruses). Thus, PoLV had properties somewhat intermediate between those ofTombusvirus andCarmovirus genera but bridged the two taxa through the serological relationship with some of their species. The taxonomic position of PoLV is still undetermined. It must await the results of molecular investigations now underway.  相似文献   

蚓激酶成熟肽的原核表达及纯化     

李清竹  赵玉军  张守峰  刘烨  寇叙  扈荣良 《现代畜牧兽医》2006,(2):43-45

应用PCR技术扩增获得蚓激酶成熟肽基因，并按相应的阅读框架克隆入表达载体pGEX-4T中谷胱甘肽S-转移酶（GST）的下游。重组质粒转化大肠杆菌Rosetta株，分别在1．0mmol／LIPTG、37℃和0．1mmol／L IPTG、28℃条件下诱导，蚓激酶成熟肽-GST融合蛋白获得了高效表达，且后者得到了可溶性蛋白。经SDS-PAGE证实所表达的融合蛋白产物相对分子量与预期的53kD相符。并且以等电点和亲和层析的方法对表达出的可溶性蛋白进行了纯化。  相似文献   

乳中黄嘌呤氧化还原酶的研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

韩立强  杨国宇  王月影  郭豫杰 《乳业科学与技术》2006,28(5):212-214

黄嘌呤氧化还原酶属于含钼脱氢酶黄素蛋白家族，是组成乳脂肪球膜的主要蛋白，通过硫酸胺分级沉淀和DEAE-Sepharose柱可从乳脂肪球膜中纯化。XOR作为乳脂肪球膜的膜结合蛋白，在脂肪滴的包裹和分泌中起到重要的结构作用，并且在肠道能够起到一定的抗菌作用。  相似文献   

牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化     

鲁俊鹏罗满林  宋延华邹潍力 《中国兽医科技》2006,36(5):366-370

从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA，扩增了MPT83基因，并克隆入pMD-18-T Simple Vector，将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a（＋）中，转化BL21（DE3）宿主菌，IPTG诱导表达，用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序，构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen-Bank中的序列一致；构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHI＋HindⅢ双酶切鉴定构建正确；经SDS-PAGE分析，在约42ku处出现新的蛋白条带，4h后表达量即达到高峰；Westernblotting分析表明，融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别；纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳，出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。  相似文献   

猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化     

裴仉福陈瑞爱  温纳相唐秀英唐满华  朱文冠李琳 程含波 《中国兽医科技》2006,36(10):842-846

以pcDNA3．1-pIL-18为模板，采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18（IL-18）的成熟蛋白基因，通过KpnⅠ＋SacⅠ双酶切及连接反应，构建了pET32c—pIL—18原核表达质粒。经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实，重组质粒中的基因片段连接正确。之后，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），于37℃、1．0mmol／L IPTG条件下诱导表达。菌体裂解产物经SDS—PAGE分析，在分子质量约为33ku处出现了预期的目的蛋白。用8mol／L脲对表达产物变性，经Ni^2＋NTA柱纯化，透析复性，得到了纯化的IL-18蛋白。Western—blot分析证实，纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性。上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础。  相似文献   

哺乳动物精清诱导排卵活性蛋白质研究     

LI Wan-kun 《家畜生态》2007,(5)

在动物的精清里包含一些与动物生殖生理活动密切相关的活性蛋白和多肽。驼科动物的双峰驼、美洲驼、羊驼和澳洲考拉等哺乳动物精清中含有类似促性腺激素释放激素(GnRH)作用的活性蛋白质,诱导排卵因子(ovulation inducing factor,OIF),它能引发外周血液中促黄体素(LH)峰浓度的出现和诱发母畜排卵。OIF被认为是一种新的生物活性蛋白质或潜在的新型激素。甚至报道在牛等自发排卵动物以及人精清中也存在类似的活性蛋白。这类因子的发现对于哺乳动物生殖生理及繁殖的深入研究具有重要的意义,有助于动物克服繁殖障碍及繁殖疾病的治疗等。  相似文献   

哺乳动物精清诱导排卵活性蛋白质研究     

李万坤  李辉  赵兴绪  才学鹏 《家畜生态学报》2007,28(5):1-5

在动物的精清里包含一些与动物生殖生理活动密切相关的活性蛋白和多肽.驼科动物的双峰驼、美洲驼、羊驼和澳洲考拉等哺乳动物精清中含有类似促性腺激素释放激素(GnRH)作用的活性蛋白质,诱导排卵因子(ovulation inducing factor,OIF),它能引发外周血液中促黄体素(LH)峰浓度的出现和诱发母畜排卵.OIF被认为是一种新的生物活性蛋白质或潜在的新型激素.甚至报道在牛等自发排卵动物以及人精清中也存在类似的活性蛋白.这类因子的发现对于哺乳动物生殖生理及繁殖的深入研究具有重要的意义,有助于动物克服繁殖障碍及繁殖疾病的治疗等.  相似文献