首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
文章检索
  按 检索   检索词:      
出版年份:   被引次数:   他引次数: 提示:输入*表示无穷大
  收费全文   5445篇
  免费   272篇
  国内免费   799篇
林业   222篇
农学   372篇
基础科学   756篇
  608篇
综合类   1918篇
农作物   209篇
水产渔业   239篇
畜牧兽医   1350篇
园艺   153篇
植物保护   689篇
  2024年   62篇
  2023年   245篇
  2022年   320篇
  2021年   367篇
  2020年   251篇
  2019年   298篇
  2018年   150篇
  2017年   258篇
  2016年   376篇
  2015年   278篇
  2014年   329篇
  2013年   286篇
  2012年   470篇
  2011年   468篇
  2010年   362篇
  2009年   329篇
  2008年   256篇
  2007年   304篇
  2006年   253篇
  2005年   200篇
  2004年   134篇
  2003年   114篇
  2002年   84篇
  2001年   48篇
  2000年   47篇
  1999年   35篇
  1998年   28篇
  1997年   32篇
  1996年   22篇
  1995年   17篇
  1994年   13篇
  1993年   13篇
  1992年   9篇
  1991年   13篇
  1990年   7篇
  1989年   9篇
  1988年   7篇
  1987年   8篇
  1986年   3篇
  1984年   1篇
  1982年   1篇
  1981年   3篇
  1976年   1篇
  1956年   4篇
  1955年   1篇
排序方式: 共有6516条查询结果,搜索用时 625 毫秒
991.
形态学双梯度算子在木材腐朽图像边缘检测中的应用   总被引:2,自引:2,他引:0  
根据数学形态学的思想和木材图像的特性,选取适当的结构元素,通过腐蚀、膨胀、开与闭运算的加权组合,构造出形态学双梯度算法,并将它应用于木材腐朽图像的边缘检测。通过与经典边缘检测算法对比,该方法提取的图像边缘更加的准确、完整和连续;显现出更好的抗噪声能力和边缘检测能力,实验结果验证了该方法的可行性与有效性。  相似文献   
992.
猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用   总被引:1,自引:1,他引:0  
以纯化的原核表达的猪圆环病毒2型(PCV-2)重组结构蛋白(rCap蛋白)为包被抗原,建立PCV-2间接ELISA诊断方法;对抗原最适包被浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等条件进行了优化;对优化后的ELISA检测方法进行特异性试验、临床应用试验;组装试剂盒并进行试剂盒保存期试验。优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2.815 μg/mL,抗原最佳包被条件为37 ℃ 2 h;血清最适稀释度为1∶40,酶标抗体最适稀释度为1∶500,最佳封闭液为1% BSA;阴阳性临界值判定标准为D450 nm≥0.33,判为阳性,D450 nm<0.33,判为阴性。特异性试验结果表明,只有PCV-2阳性血清反应后的D450 nm>0.33,包括抗PCV-1阳性血清在内的其他5种抗血清反应后的D450 nm<0.33,说明所建立的ELISA方法具有良好的特异性。经对临床疑似PCV-2感染的100份血清样品进行检测,阳性检出率为69%。组装试剂盒在4 ℃条件下至少可保存12个月以上,说明所建立的诊断方法可以在生产中大量推广应用。本研究成功建立了能特异性检测抗PCV-2血清抗体的ELISA检测方法。  相似文献   
993.
Specific and sensitive TaqMan real-time PCR assays were developed targeting chromosomal DNA of Erwinia amylovora ( ams C gene and ITS region). These assays increased the reliability of detection of E. amylovora strains, regardless of their plasmid profile, and have the ability to differentiate between Erwinia spp. strains from Hokkaido, Erwinia pyrifoliae and Erwinia spp. isolated from necrotic pear blossoms in Spain. The assays were used for testing the efficiency of three different extraction methods to remove plant-based PCR inhibitors. Combined with an automated DNA-extraction method based on magnetic beads (QuickPick™), the real-time PCR assays reliably detected at least 103 cells mL−l ( c. four cells per reaction) of the pathogen from blighted woody plant material. In testing of symptomless samples, absolute quantification of E. amylovora before and after enrichment in liquid media provided proof of E. amylovora viability and its ability to multiply, including in cases when subsequent isolation in pure culture was unsuccessful.  相似文献   
994.
995.
Soybean, caused by the rust fungus Phakopsora pachyrhizi, is the most important foliar pathogen infecting soybean. Historically, the disease was important only in the Eastern Hemisphere, but since 1994 the disease has been reported in many countries in Africa and the Americas. In the U.S.A., soybean rust has been perceived as a threat to soybean production and monitoring of the disease occurs throughout the country where soybean is grown. The objectives of this study were to show conclusive evidence that soybean rust spores can be transported by non-conventional means such as clothing. The implication may affect how researchers approach monitoring this disease in research and sentinel plots.  相似文献   
996.
进境苹果果实中梨火疫病菌的套式PCR检测   总被引:1,自引:0,他引:1  
 针对进境商用苹果果实携带梨火疫病菌Erwinia amylovora数量有限的特点,选取源于病菌pEA29质粒的2对引物P29A/P29B和PEANT1/PEANT2配对组合成套式PCR,其检测灵敏度可达0.15 pg菌体DNA,检测灵敏度高于EPPO推荐的单管套式PCR方法和常规PCR方法。分别利用这3种PCR检测方法对美国、新西兰、日本和智利等国进境的166批苹果样品进行检测,3种检测方法的样品阳性率分别为53.6%、38.0%和8.4%,试验结果表明此套式PCR检测方法可用于进境商用苹果的梨火疫病菌快速检测。进境样品的检测结果证实了进境商用苹果果实中存在梨火疫病菌的可能性。  相似文献   
997.
 The nucleotide sequence of small coat protein (CPS) gene of Broad bean stain virus (BBSV) was determined and compared with other comoviruses. The CPS gene of BBSV consisted of 687 nucleotides and encodes a putative protein of 228 amino acid residues. The CPS sequence of BBSV and those of other comoviruses shared identities of 36.5%-58.9% and 35.2%-70.3% at the nucleotide and amino acid levels, respectively. The RT-PCR method specific for BBSV detection was developed based on the determined CPS sequence. The RT-PCR assay presented here allows, for the first time, rapid and specific detection of BBSV.  相似文献   
998.
【目的】建立荷斯坦奶牛瓜氨酸血症的PCR-SSCP检测方法。【方法】根据GenBank公布的荷斯坦奶牛精氨酸琥珀酸合成酶基因(Ass)第5外显子核苷酸序列(登录号:M2619),设计并合成1对特异性引物,应用PCR-SSCP方法检测北京市周边牛场173头荷斯坦奶牛瓜氨酸血症的隐性基因,并利用PCR-RFLP和DNA序列测定验证检测结果的准确性。【结果】PCR-SSCP检测的173头奶牛中有1头是瓜氨酸血症携带者,与PCR-RFLP和DNA序列测定结果一致,携带率为0.58%。【结论】建立了荷斯坦奶牛瓜氨酸血症的PCR-SSCP检测方法,该方法简单快捷、准确性高、成本低廉,适合荷斯坦奶牛的大规模检测。  相似文献   
999.
甘蔗线虫病抗性基因的PCR检测研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
吴杨  周会  潘大仁 《作物学报》2006,32(6):939-942
以38份未经线虫病常规鉴定的甘蔗种质资源为供试材料,根据番茄抗根结线虫病基因和甜菜抗胞囊线虫病基因的保守序列区域,分别设计了2条上游引物、2条下游引物,对设计的引物进行组合后,应用PCR特异扩增从中分别筛选出各1对特异引物。用抗根结线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约460 bp大小的特异片段;用抗胞囊线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约690 bp大小的特异片段,进一步进行了PCR-Southern杂交,确认了该2条特异引物的真实性。  相似文献   
1000.
A polyclonal antiserum (As163) specific to grapevine leafroll associated closterovirus-3 (GLRaV-3) was developed using a recombinant coat protein expressed in E. coli from a cDNA clone identified after immunoscreening of a cDNA library. Specificity of the antiserum to GLRaV-3 was shown by Western blot and immunosorbent electron microscopy. With this antiserum, an effective double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (DAS-ELISA) was developed for GLRaV-3 detection. To evaluate the sensitivity of the antiserum in DAS-ELISA for virus detection, different combinations of antibodies were compared. Although best results were obtained when As163 was used for coating and a monoclonal antibody (MabNY1.1) was used as an enzyme conjugate, good results were also obtained when As163 was used both for coating and as an enzyme conjugate. Using this As163–Mab system in DAS-ELISA, we confirmed the presence of GLRaV-3 in a diverse collection of leafroll infected vines.  相似文献   
设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号