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猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)纤突蛋白S携带主要的B淋巴细胞抗原表位,是诱导机体产生中和抗体和提供免疫保护作用的主要结构蛋白,本试验通过PCR扩增,获得TGEV S蛋白上约1 218bp的保护性抗原基因S1,将其克隆到pMD18-T载体并进行核酸序列测定。通过双酶切连接成功获得重组质粒pNZ8149-S1,电转化至乳酸乳球菌NZ3900中,经乳链菌肽诱导,SDS-PAGE和Western-Blot分析结果显示,TGEV S1基因获得了表达,表达产物具有反应原性。间接免疫荧光试验结果表明,重组乳酸菌表达的蛋白位于菌体表面。 相似文献
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本研究旨在利用乳酸乳球菌构建牛α干扰素（BoIFN-α）的分泌表达系统并分析其抗病毒活性。根据乳酸乳球菌MG1363密码子使用的偏好性，对BoIFN-α基因进行优化合成。将目的基因和乳酸乳球菌表达载体质粒pAMJ399分别进行SalⅠ和BglⅡ双酶切，将胶回收产物进行连接后，转化大肠杆菌TG1感受态细胞，提取阳性质粒电转化乳酸乳球菌感受态细胞，用SDS-PAGE和Western blotting方法对表达蛋白进行分析和鉴定，同时将重组乳酸乳球菌培养28 h后取上清用PEG20000浓缩10倍左右，进行体外抗病毒试验。结果显示，试验成功构建了重组乳酸乳球菌pAMJ399-BoIFN-α/MG1363，重组菌上清和沉淀均出现约20 ku的目的条带，表明重组蛋白以分泌的形式同时存在于培养液的上清和沉淀中。浓缩后的重组BoIFN-α（rBoIFN-α）上清与水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）同时作用，用MDBK/VSV系统以微量细胞病变抑制法测定rBoIFN-α的效价为1.02×106 U/L；通过Alamer Blue法分析可知，加入rBoIFN-α后对细胞的活性影响较小；间接免疫荧光试验可见加入rBoIFN-α后细胞无绿色荧光，说明rBoIFN-α有良好的抗病毒效果；实时荧光定量PCR结果进一步证实rBoIFN-α具有一定的抗病毒效果。本试验构建了能分泌表达rBoIFN-α的乳酸乳球菌，通过一系列的体外抗病毒试验证明rBoIFN-α具有良好的抗病毒活性，试验结果为rBoIFN-α作为抗病毒药物、免疫增强剂的开发、肽类用药及临床应用提供新途径。 相似文献
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乳链菌肽产生菌中乳链菌肽编码基因、乳链菌肽抗性基因和蔗糖发酵基因紧密连锁.根据该原理,在添加乳链菌肽、蔗糖及溴甲酚紫的M17选择培养基上,从新鲜牛奶样品中定向筛选到6株能在选择培养基上生长的菌株,通过细菌生理生化指标鉴定、16S rDNA序列测定,以及发酵产物的抑菌试验,获得了两株产乳链菌肽的乳酸乳球菌和两株只对乳链菌肽具有抗性但不产生乳链菌肽的乳酸乳球菌. 相似文献
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乳链菌肽抗性菌株的定向筛选及鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
利用乳链菌肽抗性菌株中乳链菌肽抗性和乳糖发酵紧密连锁的原因，在含有乳链菌肽、乳糖和溴甲酚紫的选择培养基上，从205个新鲜的牛奶样品中定向筛选乳链菌肽抗性菌株。对筛选到的4株菌分析鉴定结果表明：4株菌均为革兰氏阳性菌，产乳酸，过氧化氢酶试验阴性；通过质粒的抽提和电泳，发现Lactococcus Lactis subsp.lactis ZL2009,ZL2009,ZL2010,ZL2024,ZL2030分别含有1，7，5，3条质粒带，且4株菌的质粒DAN分子大小不完全相同。 相似文献
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柔嫩艾美耳球虫TA4抗原基因cDNA在乳酸乳球菌中的克隆与表达 总被引：2，自引：2，他引：2
用PCR技术特异扩增了柔嫩史美耳球虫TA4抗原基因cDNA序列，克隆至质粒pMD18-T中，获得重组质粒pMD18-T-TA4，采用KpnⅠ／SacⅠ双酶切法及PCR确认正确后，将TA4基NcDNA目的片段亚克隆到乳酸乳球菌表达载体pMG36n中，电穿孔法转化乳酸乳球菌LM0230，获得重组质粒pMG36n-TA4，采用KpnⅠ／SacⅠ双酶切法及DNA测序证明cDNA序列完全正确。获得TA4乳酸乳球菌表达株，经SDS—PAGE电泳分析，结果表明表达产物与预期大小的TA4蛋白分子量一致。 相似文献
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对“胃宝”发酵液的微生物分析结果表明,“胃宝”发酵液中的微生物主要有酵母菌、乳酸菌、醋酸菌。以醋酸菌为主体,酵母菌和乳酸菌为辅形成了“胃宝”共生复合体。 相似文献
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重组植物甜蛋白马宾灵的食品级乳酸乳球菌诱导表达系统的构建 总被引：1，自引：1，他引：0
为了将马宾灵(MabinlinⅡ)直接应用于功能性食品中,通过对MabinlinⅡ基因进行有目的的剪切重组,将重组MabinlinⅡ基因插入到食品级表达载体中,经电击转化和乳糖筛选获得重组的食品级乳酸乳球菌,构建了重组植物甜蛋白马宾灵(MBL-ABH)的食品级乳酸乳球菌诱导表达系统。结果表明,该食品级诱导表达系统经乳酸链球菌素(Nisin)诱导后所表达的目的蛋白的含量较低,Western-blot检测表明MBL-ABH成功的在食品级乳酸乳球菌中表达。本研究扩展了植物甜蛋白马宾灵在食品方面的应用,有望开发出能够避免添加食糖类物质的功能性食品。 相似文献
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【目的】通过检测促炎细胞因子APRIL和抗炎细胞因子IL-10的分泌水平来观察屎肠球菌和乳酸乳球菌对肠上皮细胞先天性免疫应答的调节作用。【方法】Caco-2细胞分别和PBS（CT组,阴性对照组）、Escherichia coli K88（EC组,阳性对照组）,Enterococcus faecium（EF组）或Lactococcus lactis（LL组）共孵育2 h,以及先分别和Enterococcus faecium或Lactococcus lactis共孵育1 h,再和Escherichia coli K88共孵育2 h（EF-EC组和LL-EC组）。试验结束时,用ELISA方法检测细胞培养上清中APRIL和IL-10的含量。【结果】结果表明,2株乳酸菌都促进正常状态下的肠上皮细胞分泌促炎细胞因子APRIL和抗炎细胞因子IL-10,抑制Escherichia coli K88对APRIL分泌的诱导作用,促进Escherichia coli K88感染的肠上皮细胞分泌IL-10。【结论】体外试验条件下,屎肠球菌和乳酸乳球菌能够诱导肠上皮细胞产生先天免疫应答,分泌APRIL和IL-10,抑制大肠杆菌K88引起的促炎反应,表现出抗炎作用。 相似文献