分子生物学诊断技术的应用(一)     

杨峻 《湖北畜牧兽医》2010,(9):4-9

随着分子生物学技术的飞速发展,尤其是分子遗传学的进步,大大提高了动物病原的诊断水平。动物病原的实验室诊断技术已从常规的病原分离鉴定以及抗原和抗体的免疫学检测,进入到可对病原基因序列和结构直接进行测定的分子生物学水平,同时也促进了疫病快速诊断技术发展。近几年随着国家对市县级动物疫病防控设备投资逐年加大,疫病防控诊断平台建设不断加强,兽医技术人员希望普及动物分子生物学诊断技术。本刊特邀湖北省农业科学院畜牧兽医研究所杨峻研究员对分子生物学诊断技术在兽医学科领域的应用进行概述,为大家在实际应用时提供参考。主要内容包括核酸探针技术、单克隆抗体技术、核酸扩增、核酸电泳、免疫印迹技术、图谱分析、核酸序列分析、DNA芯片技术等。  相似文献   

抗堆型艾美耳球虫子孢子表膜单链抗体基因的构建     

王承民  魏刚才  秦建华  项志峰  陈桂香  杭柏林  何宏轩 《中国兽医学报》2008,28(4):383-386

应用RT-PCR技术,从稳定分泌抗堆型艾美耳球虫子孢子表膜抗原的单克隆抗体的杂交瘤细胞Easp-3G3中扩增出抗体VH和VL基因,再通过重叠延伸拼接（Splice overlap extension）PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽（Gly4Ser）3,体外构建抗堆型艾美耳球虫的单链抗体基因,并将其克隆至pMD18-T载体中进行测序。经测序,基因全长为744bp,编码248个氨基酸残基;经计算机分析,VH和VL基因均为新发现的基因序列,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。结果表明,成功构建了抗堆型艾美耳球虫子孢子表面蛋白抗体的ScFv基因。  相似文献   

猪肉发光细菌(PB-CS-01)的鉴定与生物学研究     

肖安东 《中国兽药杂志》2010,44(8):1-4

对一株从发光猪肉中分离到的发光细菌(PB-CS-01)进行了形态结构与培养特征的观察、生化特征研究以及16S rRNA基因序列分析。结果表明,该菌为革兰氏阴性球杆菌,在温度为18～22℃及盐浓度为1.5%～3.0%的培养基中生长良好,在光照好氧及厌氧条件下都能生长,发蓝绿色光。16S rRNA基因序列分析表明该菌与GenBank中Photobacterium phosphoreum的同源性水平达100%,结合菌株的形态学和生化学特性,鉴定为Photobacterium phosphoreum。该菌对小鼠无急性致病性;对链霉素、复方新诺明和头孢呋辛等多种抗菌药物敏感;新洁尔灭、戊二醛等常用消毒剂能杀死该菌。  相似文献   

体外诱导和临床分离多重耐药大肠杆菌acrA和acrB基因无突变     

尹秀玲  牛发良  薛瑞辰  邓旭明  柳巨雄 《中国兽医杂志》2008,44(3):63-64

临床分离的动物源性大肠杆菌的多重耐药株不断增多,多重耐药常与大肠杆菌外输泵有关,acrAB是最主要的外输泵.  相似文献   

一株金黄色葡萄球菌小菌落突变株全基因组测序分析     

王奇惠  时永强  祝宇  张赛飞  朱立力  曲伟杰 《动物医学进展》2017,38(5)

对金黄色葡萄球菌小菌落突变株(small colony mutant strains Staphylococcus aureus,SASCVs)和CP000253.1基因组差异进行了研究,为后续研究金葡菌分泌抗药物相关物质能力提供数据支持。对一株金葡菌小菌落突变株进行全基因组测序,并与CP000253.1参考序列进行序列比较。结果显示,金葡菌SCVs的文库插入片段为350bp,测序读长为150bp,SCVs的原始数据量为551 Mb,SCVs的碱基含量分布在处理前后有所不同,通过重测序,存在单核苷酸多态性(SNP)的数量较大。金葡菌SCVs与CP000253.1参考序列之间存在明显的序列差异,该数据为研究金葡菌感染奶牛乳房炎提供了一定的序列依据。  相似文献   

农业部调查组证实SARS病毒来自野生动物     

《饲料研究》2003,(7):43-43

我国SARS病毒起源研究工作取得突破 ,研究结果表明 ,SARS病毒来自野生动物 ,而与家畜家禽和宠物无关。这是记者从农业部动物冠状病毒疫源调查组获悉的。调查组采集了 5 9种动物共 170 0份动物样品 ,主要包括与人类有过接触或可能接触的各种家畜家禽、野生动物、水生动物和宠物。专家们从蝙蝠、猴、果子狸和蛇等数种野生动物体内检测到冠状病毒基因 ,已测出的病毒基因序列与SARS病毒基因序列完全一致。据此 ,调查组认为 ,SARS病毒或类SARS冠状病毒可能存在于部分野生动物体内。研究结果还确定 ,家畜家禽和宠物中的冠状病毒的基因组群…  相似文献   

空肠弯曲菌flaA基因的原核表达及抗原性鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

王婷  蒋原  唐泰山  张常印  祝常青 《中国兽医杂志》2010,46(4)

空肠弯曲菌是一种在世界范围广泛流行的常见的人畜共患病病原菌,大量存在于各种野生或家养动物的肠道内, 引起牛和绵羊流产,雏鸡、犊牛、仔猪的腹泻等多种疾病[1].空肠弯曲菌的抗原结构比较复杂,具有广泛的抗原多样性或差异性,目前已知有近60个血清型,且还有增加的趋势.空肠弯曲菌的菌体外膜上的抗原成分主要为蛋白质和脂多糖(O抗原)及鞭毛(H抗原)[2].  相似文献   

犬冠状病毒核酸探针的制备及其基因序列的测定与比较     

胡桂学夏咸柱  鲍志宏黄海龙 高云航 《兽医大学学报》2003,23(3):228-230

采用RT—PCR方法扩增犬冠状病毒(CCV)YSl、CI1和NL—18株5’端部分S基因序列，以随机插入DNA法对CCV YSl株纯化的PCR产物标记^32P同位素，制备核酸探针，并与3株CCV反转录产物杂交。用平端连接法将3株CCV PCR产物克隆于pUCl9 SmaI位点或pGEM—T载体中，经PCR鉴定为正确重组质粒。以双脱氧末端终止法测定了重组质粒的cDNA核苷酸序列，并用DNASIS计算机软件进行多重比较分析，绘制系统树。结果表明，所制备的核酸探针可与3株CCV反转录产物杂交，其核苷酸序列与多株CCV相应序列的同源性高达91．9％-99．1％，为CCV的保守区。由此说明，制备的酸破探针可用于犬CCV感染的分于流行病学研究。  相似文献   

105株携带耶尔森菌强毒力岛大肠杆菌的毒力基因型和部分菌株毒力因子序列研究     

吕殿红  魏文康  黄忠  温肖会 《中国预防兽医学报》2012,34(1):71-73

为了解105株携带耶尔森菌强毒力岛(HPI)的大肠杆菌(E.coli)中相关毒力因子的流行情况和基因序列,根据GenBank中参考序列设计引物,采用PCR方法对广东地区养殖场来源的105分离株HPI+E.coli的fyuA、tsh、iucD、iss 4种毒力基因进行检测,统计基因类型;并对部分分离株的5种毒力基因(irp2和fuA、tsh、iucD、iss)进行了克隆与序列分析.结果显示105株HPI+E coli中4种毒力因子携带情况不尽一致,基因fyuA、tsh、iucD和iss的阳性率分别为55.24％、17.14％、49.52％和23.81％,105株HPI+E.coli共有13种基因型;分析表明,除iss基因与参考序列的同源性在88.0 ％～90.9％外,irp2、fyuA、tsh、iucD4种基因与GenBank中参考序列的同源性高达96％以上;广东省养殖场E.coli毒力因子基因型复杂,并以基因型irp2+ fyuA+ iucD+和仅含irp2+的菌株分离率最高,分别为17.14％和28％.  相似文献   

镰形扇头蜱、亚洲璃眼蜱和血红扇头蜱Actin基因的克隆和序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

狄清  仝彩玲  郭凤 《上海畜牧兽医通讯》2010,(2)

蜱,隶属节肢动物门蛛形纲蜱螨目,寄生于动物体表,以吸食动物血液为生.蜱广泛分布于世界各地,侵袭哺乳动物、爬行动物、鸟类,乃至两栖类等多种动物.蜱和其所携带的病原微生物,如螺旋体、巴贝西虫、贝纳柯克斯体等[1],对动物和人类的健康造成严重危害.肌动蛋白(Actin)是一类进化保守,在多数物种中存在的蛋白质超家族,其基因序列高度同源[2].Actin是细胞组成的基本单位,参与多种生理过程,如细胞运动、胞内运输、细胞质流动、内吞作用等[3].Actin基因及蛋白同时也是多数实验中的首选内参,对完善实验数据、数据分析和实验过程的逻辑性起到重要作用.目前少见对镰形扇头蜱成蜱、亚洲璃眼蜱和血红扇头蜱Actin基因的报道.据此,我们克隆了三种硬蜱的Actin基因,进行了序列分析.  相似文献