应用聚合酶链反应检测伪狂犬病病毒DNA   总被引：1，自引：0，他引：1  

冉多良  王正党 《中国兽医学报》1994,14(4):366-368

选用标准的伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）闽Ａ株，经ＢＨＫ２１细胞培养，提取ＰＲＶＤＮＡ作为摸板；合成１对２０－ｍｅｒ寡核苷酸作为引物；选择扩增序列由２６２个碱基对组成的位于编码多糖蛋白ｇｐ５０基因，用耐热的Ｔａｑ－ＤＮＡ聚合酶经３０个循环以后，扩增的产物直接用凝胶电泳检测，并用标准分子量确定。结果表明：以ＰＲＶＤＮＡ作为模板进行扩增，有扩增产物生成，以同科的疱疹病毒ＤＮＡ作为模板在相同的条件下进行ＰＣＲ扩增，无扩增产物生成，说明ＰＲＶＰＣＲ扩增是特异的。ＰＣＲ技术检测ＰＲＶＤＮＡ敏感度为２８．５ｐｇ．ＰＲＶＰＣＲ技术的建立，为伪狂犬病诊断和流行病学研究提供了更敏感、可靠的手段。  相似文献   

不同启动子对重组痘苗病毒表达狂犬病病毒糖蛋白基因的影响   总被引：2，自引：1，他引：1  

佟明华  金宁一 《中国兽医学报》1997,17(4):331-335

以血凝素（ＨＡ）基因为侧翼，将狂犬病病毒糖蛋白基因ｃＤＮＡ置于不同类型的痘苗病毒复合启动子下游，构建了４种表达质粒。重组表达质粒转染已感染ＷＲ株痘苗病毒的ＢＨＫ２１细胞，并通过鸡红细胞吸附试验，筛选、纯化出与表达质粒对应的４组ＨＡ－重组痘苗病毒：ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ，ｖＲＪ１－１０ＲＶｇｐ，ｖＲＪ２－１０ＲＶｇｐ。经间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）鉴定，从４组重组病毒中每组各鉴定出１株阳性重组病毒。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示，重组病毒感染的ＢＨＫ２１细胞裂解物上清中有１种蛋白与抗ＲＶＧＰ的ＭｃＡｂ发生特异反应，分子量为６９０００。在重组病毒感染早期，ＲＶＧＰ的表达量以ｖＳＦＪ１－１０ＲＶｇｐ最高；而在感染晚期，则以ｖＳＦＪ２－１６ＲＶｇｐ最高。４株重组病毒免疫小鼠，均能够不同程度地诱导小鼠产生抗ＲＶＧＰ特异性抗体。  相似文献   

应用PCR/RFLP技术对广西禽白血病病毒的检测与分型研究   总被引：5，自引：0，他引：5  

张爱玲  韦平  李斌  李康然  王桂军 《中国预防兽医学报》2004,26(2):152-154

对2000～2003年间从广西的南宁、玉林、桂林、钦州、柳州、梧州等地采集的有肿瘤/可疑肿瘤的250份鸡病例进行肿瘤病的检测.结果发现,外源性禽白血病阳性的有32份,阳性率为12.8%.其中,同时为马立克氏病阳性的有30份,两者共感染率高达93.75%(30/32);根据禽白血病病毒囊膜糖蛋白gp85基因的限制性片段长度多态性分析,对其中20份外源性禽白血病病毒进行分型鉴定,结果证实全部属于A亚群.  相似文献   

Construction of short hairpin RNA lentiviral vector targeting MAG gene and its silencing effect on MAG gene     

CHEN Shu  LUO Ming  CAI Wang-qing  LI Fang-cheng  HE Zhi-wei  LIU An-min 《园艺学报》2013,29(9):1725-1728

AIM：To construct lentiviral vector-based short hairpin RNA (shRNA) targeting myelin-associated glycoprotein (MAG) gene and to evaluate its inhibitory effect on the expression of MAG gene. METHODS：Three shRNA fragments targeting MAG gene (shRNA1, shRNA2 and shRNA3) were designed and cloned into lentiviral vector pWPI. The three recombinant plasmids were identified by enzyme digestion and sequencing. Positive plasmids were co-transfected with pCDNA3-MAG-FLAG into 293T cells, and the most effective shRNA for knockdown of MAG gene was screened by Western blotting. Cells transfected with empty pWPI served as a control. Oligodendrocytes were infected with recombinant lentivirus that was produced by 293T packaging cells co-transfected with the most effective shRNA, pAX2 and pMD2G. After 48 h, the expression of MAG protein was measured by Western blotting. RESULTS：The MAG shRNA lentiviral vectors were confirmed by double enzyme digestion and sequencing, and shRNA2 showed the highest inhibitory efficacy among the three shRNA fragments. Recombinant lentivirus carrying shRNA-2 markedly decreased the expression of MAG protein in oligodendrocytes. CONCLUSION：Lentiviral vector-based shRNA targeting MAG gene specifically knocks down the gene expression, which provides a useful tool for investigating the role of MAG-specific shRNA in regulating myelination of central nerve system.  相似文献   

不同H9N2亚型禽流感病毒分离株致病力研究及HA抗原性变异分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈陆  刘守川  赵军  王川庆  王泽霖 《中国农业科学》2011,44(24):5100-5107

 【目的】了解近年来中国H9N2亚型禽流感病毒毒力变化和抗原性变异的特点,【方法】对分离于1998—2008年间的25株H9N2亚型禽流感病毒分离株进行了EID50、ELD50、MDT、ICPI、IVPI和8周龄SPF鸡人工感染排毒试验,测定了部分分离株与抗H9N2亚型禽流感病毒Hp参考株HA蛋白单抗2A4和F6的血凝抑制（HI）和中和反应特性,对具有不同反应特性分离株的HA基因进行了序列分析。【结果】不同分离株呈现致病力差异,具多态性特征,3#、12#和14#分离株致病力偏强,能引起部分SPF鸡发病和死亡,人工感染8周龄SPF鸡排毒时间更早,排毒期更长。3#和12#分离株与单抗2A4和F6呈现特殊的反应特性,单抗不能抑制3#和12#的血凝特性,也不能中和病毒感染CEF细胞。HA蛋白氨基酸序列分析表明,3#和12#分离株145位氨基酸发生漂变（S→N）,导致与单抗的血凝抑制反应特性丢失,说明该位点（S145）为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,是血凝抑制抗体结合位点。S145N的漂变导致在145—147位氨基酸多出一个糖基化位点NGT,可能是分离株毒力增强的原因。【结论】本研究结果表明,H9N2亚型禽流感病毒呈现变异趋势,出现了有致病力和抗原性变异流行毒株。S145为H9N2亚型禽流感病毒HA蛋白的一个抗原表位,但有该位点漂变导致的抗原变异毒株出现,并可逃避免疫作用,对该病的防控提出了新的挑战。  相似文献   

超声波法提取河蚬糖蛋白   总被引：3，自引：0，他引：3  

曾婷婷  徐明生  蒋艳 《江西农业大学学报》2008,30(1):144-148

研究了超声波辅助法提取河蚬糖蛋白的工艺,以超声功率、提取时间、料液比、NaCl溶液浓度为考察因素,并采用正交实验设计L16(45)对河蚬糖蛋白的提取工艺进行优化设计。结果表明,超声波法提取河蚬糖蛋白的最佳条件:NaCl的浓度为0.2 mol/L,料液比为1∶20,超声时间25 min,超声功率1 200 W,河蚬糖蛋白的提取率为0.446 7%。NaCl溶液浓度和料液比对提取河蚬糖蛋白的影响分别为差异极显著和差异显著。超声波辅助提取河蚬糖蛋白可以降低能耗,缩短提取时间,糖蛋白提取率较高,因此可以作为提取河蚬糖蛋白的方法。  相似文献   

鲤春病毒血症病毒Shlj1株糖蛋白空间结构及其B细胞抗原表位的预测     

纪锋  徐黎明  赵景壮  刘淼  卢彤岩  贺文斌  尹家胜 《大连海洋大学学报》2017,32(4)

为预测鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)Shlj1株糖蛋白(Glycoprotein,G)的空间结构及B细胞抗原表位,采用RT-PCR法从接种SVCV的鲤上皮细胞悬液提取的病毒总RNA中扩增糖蛋白基因,并通过序列测定获得Shlj1株糖蛋白基因的核苷酸序列及氨基酸序列,利用Phyre2对Shlj1分离株的糖蛋白空间结构进行预测,使用DNAStar软件综合分析糖蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性和抗原指数参数。结果表明:获得的SVCV Shlj1株糖蛋白核苷酸序列长1527 bp,推导出其氨基酸序列为509aa;空间结构预测显示,SVCV Shlj1株糖蛋白存在一定数量的α-螺旋、β-折叠、β-转角及大量无规则卷曲结构,空间构象较规则;抗原指数及抗原表位指数分析显示,糖蛋白中存在许多抗原指数较高的区域,该区域平均抗原指数为1.025,最大值达1.250,其中5个区域(4~26、145~157、293~302、315~327、407~491氨基酸区段)可能是B细胞抗原表位的主要分布区域。本研究结果为SVCV糖蛋白表位疫苗的设计及单克隆抗体的制备奠定了理论基础。  相似文献   

传染性造血器官坏死病病毒糖蛋白杆状病毒表达系统的构建及其抗原性分析     

谢三磊  温书香  罗琳  马志宏  李桂萍  李铁梁  姜娜  邢薇  孙惠玲 《中国畜牧兽医》2017,44(3):854-860

为研究传染性造血器官坏死病病毒（infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV）主要结构蛋白糖蛋白（G）,本研究采用RT-PCR方法从IHNV中提取RNA并进行反转录,经PCR方法扩增获得1 380 bp的G蛋白基因片段,将其克隆到pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,成功构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-G,转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,获得了重组杆粒rBacmid-G。将重组杆粒转染至Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒。间接免疫荧光（IFA）和Western blotting分析显示,重组G蛋白可与抗组氨酸单抗（Anti-His）、抗IHNV鼠血清发生特异性反应,表明本研究克隆的IHNV G蛋白在真核表达系统中得到正确表达,且该蛋白具有良好的抗原性。本试验结果为研究G蛋白的功能及开发IHNV新型疫苗奠定了基础。  相似文献   

抗牛传染性鼻气管炎病毒囊膜gD糖蛋白的单链抗体在昆虫细胞中表达及活性检测     

吴靖  许健  黄秀芬  沈俊俊  何后军  李永清 《中国畜牧兽医》2017,44(8):2475-2482

为了获得具有生物学活性的牛传染性鼻气管炎病毒（infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV） gD蛋白特异性单链抗体,试验采用PCR方法扩增杂交瘤细胞的cDNA单链抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）基因,通过重叠延伸PCR及Linker序列获得完整的单链抗体基因,将单链抗体基因克隆至杆状病毒载体pFB-LIC-Bse中,构建重组转移载体pFB-VH-VL,将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中制备重组杆粒rBacmid-VH-VL,将重组杆粒rBacmid-VH-VL转染至Sf9细胞中获得携带单链抗体基因的重组杆状病毒。该重组杆状病毒在Sf9细胞中表达了分子质量约为30 ku的单链抗体蛋白。Western blotting结果显示,重组单链抗体蛋白能被His标签抗体特异性结合,也能特异性结合gD蛋白。间接免疫荧光试验结果显示,该单链抗体蛋白能够识别感染牛肾细胞MDBK中的IBRV。本研究在昆虫细胞中成功表达了具有识别IBRV的gD蛋白特异性单链抗体,为牛传染性鼻气管炎的诊断与治疗奠定了基础。  相似文献   

Research and development of a novel subunit vaccine for the currently circulating pseudorabies virus variant in China     

Yuzhou WANG  Tongyan WANG  He YAN  Fanli YANG  Linghua GUO  Qingyuan YANG  Xule HU  Feifei TAN  Yan XIAO  Xiangdong LI  Kegong TIAN 《农业科学与工程前沿(英文版)》2015,2(3):216

Pseudorabies (PR) is a devastating viral disease which leads to fatal encephalitis and respiratory disorders in pigs. Commercial gE-deleted live pseudorabies virus (PRV) vaccine has been widely used to control this disease in China. However, the new-emerging variants of PRV compromises the protection provided by current vaccines and lead to the outbreak of PR in vaccinated pig herds. Several killed and live vaccine candidates based on current PRV variants have been reported to be effective to control the disease. A subunit vaccine based on gB protein, one major PRV glycoprotein which elicits strong humoral and cellular immune responses, however, was never evaluated for protection against the current circulating PRV variants. In this study, full-length PRV gB protein was successfully expressed in baculovirus/insect cells in the soluble format and was tested on 3-week-old piglets as a subunit vaccine. Compared with unvaccinated pigs, the gB-vaccinated pigs developed specific antibody-mediated responses and were protected from the virulent PRV HN1201 challenge. All vaccinated pigs survived without showing any PRV-specific respiratory and neurological signs, but all unvaccinated pigs died within 7 days after HN1201 challenge. Hence, this novel gB-based vaccine could be applied as an effective subunit vaccine to control PRV variant in China.  相似文献