鸡免疫球蛋白AFc(IgAFc)重链的分离纯化及其抗血清的制备     

李庆章  刘忠贵 《中国兽医学报》1989,(2)

经硫酸铰盐析、柱色谱分离得到纯化的鸡胆汁免疫球蛋白A(IgA)。然后用木瓜蛋白酶水解IgA,再经DEAE_(52)—纤维素柱色谱纯化得到IgAFc重链。用IgAFc重链免疫家兔制得兔抗鸡IgAFc重链抗血清。  相似文献   

马流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立     

姬媛媛  郭巍  王晓钧  王征  卢刚  赵立平  李红梅  相文华 《畜牧兽医学报》2011,42(5)

为建立一种快速、有效的检测马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)的方法,以EIV中国分离株A/马/新疆/07(H3N8)制备的多克隆抗体为捕获抗体,原核表达的核蛋白(NP)制备的单克隆抗体为检测抗体,在国内首次建立了检测EIV的双抗体夹心ELISA方法.用该检测方法分别检测EIV、马动脉炎病毒、马疱疹病毒1型、马疱疹病毒4型和马乙型脑炎病毒阳性样品.结果表明,该ELISA方法具有良好的特异性;与常规检测EIV的血凝试验相比,其敏感性是后者的2.5～10倍;同时与H7N7亚型EIV有交叉反应.攻毒试验结果表明该方法可有效检测鼻腔分泌物中的EIV.该方法的建立为EIV的检测及早期防控提供了有效工具.  相似文献   

甲型H1N1流感病毒NS1蛋白核仁定位的研究     

赵宗正  涂加钢  张文婷  胡勇  周红波  金梅林 《中国动物传染病学报》2012,20(3):12-16

为研究2009年甲型H1N1流感病毒的NS1蛋白的核仁定位情况,采用RT-PCR对其NS1基因进行了扩增,将其克隆至PEGX-KG载体,构建重组质粒KG-NS1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达重组蛋白.然后采用GST柱亲和层析方法纯化NS1重组蛋白,免疫家兔来制备多抗,Western blot检测抗体.通过间接免疫荧光对表达不同长度NS1 (NS1-219、NS1-230、NS1-237)的3种重组流感病毒进行了核仁定位的研究,3种重组毒的NS1蛋白存在于细胞核和细胞质,但都不能定位于核仁,说明NS1蛋白的截短与否并不影响其核仁定位,其生物学意义有待于进一步研究.  相似文献   

猪腺病毒3型Hexon蛋白多克隆抗体制备与免疫活性鉴定     

汪镇南  唐青海  颜爱  刘云福 《中国畜牧兽医》2015,42(1):1-8

本研究旨在制备猪腺病毒3型(PADV-3)Hexon蛋白多克隆抗体.试验构建重组原核表达载体pET28a-Hexon,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行Western blotting鉴定,目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原,免疫家兔制备Hexon蛋白多克隆抗体.采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体的免疫活性与抗体滴度.结果显示,Hexon蛋白原核表达以包涵体形式存在,分子质量约为105 ku;真核细胞表达的Hexon蛋白均定位于HEK293细胞质内,细胞核内无分布;IPMA测定所制备的多克隆抗体滴度为1:1 600,该抗体与体外培养的PADV-3及稳定表达Hexon蛋白的细胞均呈特异性反应.结果表明本试验制备的PADV-3型Hexon蛋白多克隆抗体免疫活性和特异性良好.  相似文献   

牛乳中α-酪蛋白完全抗原的合成及多克隆抗体的制备     

褚晓红  周玉  李岩松 《中国畜牧兽医》2014,41(2):75-78

In order to gain polyclonal antibody against α-casein, the commercial α-casein were linked with carrier protein BSA and OVA, respectively， as immunogen (α-casein-BSA) and coating antigen (α-casein-OVA). The reaction products were identified by nondenaturing PAGE and SDS-PAGE. New Zealand White rabbits were immunized with the immunogen (α-casein- BSA) to produce polyclonal antibody. The results showed that the titer of the antibody was 1∶256000 and had high cross reactivity with κ-casein. It could be used to detect the total amount of α-casein and κ-casein in milk.  相似文献   

恶性疟原虫裂殖子新型蛋白质(PF3D7_0811600)的表达纯化及其多克隆抗体的制备     

周健华  魏晓燕  常志广  姜宁  陆慧君  陈启军 《吉林农业大学学报》2016,(2):218-222

利用大肠杆菌原核表达并纯化恶性疟原虫3D7株裂殖子新型蛋白质PF3D7_0811600,免疫家兔制备特异性多克隆抗体,通过对虫体天然蛋白的识别,分析PF3D7_0811600在虫体内的表达。采用PCR技术从恶性疟原虫3D7株总DNA中获得PF3D7_0811600基因的目的片段,连接到p MD18-T克隆载体,得到的克隆质粒经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,构建重组原核表达质粒p ET-PF3D7_0811600和p GEX-PF3D7_0811600,通过优化表达条件,分别在大肠杆菌中得到高效表达,并用亲和层析柱纯化目的蛋白质。用纯化的His标签重组蛋白质免疫家兔,用Western Blot方法检测制备的特异性多克隆抗体。结果表明:成功纯化并获得重组蛋白质,用间接ELISA方法检测多抗效价达到1∶16 000,用Western Blot检测结果表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性,能够识别虫体天然蛋白。恶性疟原虫3D7株裂殖子新型蛋白质PF3D7_0811600在虫体晚期表达,说明该蛋白在虫体发育的晚期发挥重要作用,猜测其可能与裂殖子入侵宿主红细胞有关。  相似文献   

笼养川金丝猴哺乳行为的观察   总被引：5，自引：0，他引：5  

杨晓军 《甘肃农业大学学报》1996,31(4):334-338

采用全事件抽样法对笼养的５只成年雌猴和３只幼猴进行了连续１３个月计１８３ｄ的行为观察。结果表明，川金丝猴的初次哺乳是在胎儿娩出后３．１ｈ以后；根据哺乳的行为特征，哺乳期可分为初期、中期、晚期和后期；哺乳分为３种类型，即生理性哺乳、过渡性哺乳和心理性哺乳；哺乳时同笼母猴对幼猴有阿姨行为。  相似文献   

牛支原体EF-Tu基因的克隆表达、亚细胞定位及间接ELISA方法建立     

王艳芳  周雅坪  郭婷  张新竹  吴倩  陈昕迪  郝永清 《畜牧兽医学报》2019,(1):134-142

旨在获得牛支原体延伸因子EF-Tu蛋白,分析其在牛支原体菌体内的分布情况,建立EF-Tu间接ELISA法,为进一步研究牛支原体EF-Tu的生物学功能提供理论依据,也为建立牛支原体有效的血清学诊断方法和亚单位疫苗的研制奠定基础。参照Uniprot数据库中M.bovis PG45株EF-Tu基因序列,应用Overlap PCR扩增获得EF-Tu基因并将其克隆至pMD19-T载体,测序正确后,构建pET32a-EF-Tu原核表达载体,转化大肠杆菌BL21表达菌,IPTG诱导表达,纯化后的表达产物免疫新西兰兔(New Zealand rabbit)制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定高免血清抗体效价,用Western blot和间接ELISA法初步定位EF-Tu在菌体内的分布,通过优化反应条件,建立间接ELISA检测法。结果表明:重组蛋白EF-Tu约为66ku,主要以可溶性形式表达;采用间接ELISA测定的多克隆抗体效价为1:6400;Western blot和ELISA表明该蛋白在牛支原体细胞质和细胞膜中均有表达,且含量相当。利用EF-Tu建立的ELISA法具有很好的特异性和敏感性。通过原核表达系统成功得到牛支原体延伸因子的重组蛋白,该蛋白分布于菌体细胞质和膜表面,且含量基本相当。本研究所建立的EF-Tu ELISA法适合大规模的血清学诊断检测。  相似文献   

马驽巴贝斯虫新疆伊犁株Bc48基因克隆、表达及其多克隆抗体的制备     

王盼举  艾日登才次克  许正茂  闻秀秀  党娜娜  宋晶晶  张梦圆  巴音查汗 《中国畜牧兽医》2018,45(6):1677-1682

为表达马驽巴贝斯虫新疆伊犁株Bc48基因,制备多克隆抗体,试验根据GenBank中马驽巴贝斯虫Bc48基因序列,设计合成1对特异性引物,以提取的新疆株Bc48基因组DNA为模板进行PCR扩增,将扩增产物克隆至原核表达载体pET-28a（+）中,阳性质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,经IPTG诱导后表达产物进行SDS-PAGE分析,切胶纯化蛋白后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,制备多克隆抗体;同时把该基因克隆至真核表达载体pCMV-N-flag中,将阳性质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取pCMV-N-flag-Bc48质粒转染到293T细胞中进行真核表达。结果显示,获得了大小约为15 ku的融合蛋白,与预期目的蛋白大小相一致;免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体经ELISA和Western blotting检测、验证,能特异地识别相应抗原,其抗体效价可达1：128 000,说明该多克隆抗体有较高的抗体效价和特异性;真核表达质粒在293T细胞中表达Bc48蛋白。本试验可为进一步研究马驽巴贝斯虫功能基因及建立快速的检测方法奠定基础,在虫株的分类学研究及候选疫苗的研制中有重要意义。  相似文献   

聚-γ-谷氨酸合成酶复合体A的原核表达及其多克隆抗体的制备     

刘建奎  应明杰  魏春华  余丽芸  何晓杰  孙留霞 《动物医学进展》2009,30(1)

以pgsBCA质粒为模板对已知的pgsA进行PCR扩增,得到长度为1116bp的片段.将获得的PgsA基因连接到pQE-30表达载体,转化大肠埃希茵后用IPTG诱导其表达,经SDS-PAGE和WeSternblot分析,均可见约42 ku目的蛋白带.通过Ni-NTA agarose纯化,荻得较高纯度的重组蛋白,经基因定量仪测定其浓度可达1.5 mg/mL,以其免疫新西兰兔获得免疫血清,Western blot分析证实,该重组蛋白具有良好的反应原性,用间接ELISA检测抗体效价可高达1:12800.结果表明,成功获得了pgsA的多克隆抗体.  相似文献