自贡大公古盐井中嗜盐菌的Na~+/H~+离子逆转运蛋白基因筛选     

梁华忠  刘森  李可  张大凤  车振明  向文良 《安徽农业科学》2012,(7):3912-3915,3918

[目的]筛选四川自贡大公古盐井中嗜盐微生物的Na+/H+离子逆转运蛋白基因,并对其结构和编码蛋白进行分析。[方法]构建自贡大公古盐井中嗜盐微生物的Na+/H+离子逆转运蛋白宏基因组文库,通过与Na+/H+离子逆转运蛋白基因缺陷宿主菌株E.coliKNabc的功能互补筛选Na+/H+离子逆转运蛋白基因。并通过生物信息学方法对该基因的起始密码子、终止子、ORF、-35区、-10区和SD序列以及编码蛋白的分子量、等电点、疏水区域、跨膜区域、系统进化和耐盐特性进行分析。[结果]筛选到1个新的Na+/H+离子逆转运蛋白基因m-nha,该基因能够赋予E.coli KNabc在盐和碱性条件下良好生长的能力。[结论]由于m-nha编码蛋白在氨基酸序列和结构上不同于以往报道的Na+/H+离子逆转运蛋白,故鉴定该基因为1个新的Na+/H+离子逆转运蛋白基因。该研究结果对于理解古盐井中嗜盐微生物的嗜盐机制,开发利用古盐井中的基因资源及寻找新的耐盐基因具有重要的意义。  相似文献   

水稻cDNA酵母表达文库的构建及重金属镉胁迫相关基因的初步筛选     

王晶  高燕  李静  杨松光  吴克强  张美 《广东农业科学》2012,39(13):143-145,148

提取经重金属胁迫处理的水稻幼苗总RNA并纯化mRNA,采用SMART技术反转录成cDNA,利用Gateway技术将cDNA构建到入门载体pDONR222后,再经LR反应重组到酵母表达载体pYES2-DEST52上,获得水稻cDNA表达文库。检测表明,所构建的cDNA文库能达到后续试验要求。使用重金属镉敏感酵母突变株ycf1Δ进行水稻中重金属镉耐受相关基因筛选,获得多个可以恢复表型的酵母单克隆。提取质粒并测序分析后可知涉及到水通道蛋白、蛋白酶抑制剂以及金属硫蛋白等不同基因,筛选所得基因即为水稻应答重金属镉胁迫的候选基因。  相似文献   

小麦cDNA文库构建方法的改进及优化     

许延芳  潘丽娜  刘晓颖  王振英 《天津农业科学》2012,18(3):22-25

基于SMART法,优化cDNA文库构建方法。将常规SMART法中的限制性内切酶SfiI替换成BsaI,在引物两侧分别加入BsaI-XhoI和BsaI-BamHI酶切位点,仅使用BsaI单酶切即可获得两不同的粘性末端,可用于连接任意载体。应用此方法构建了小麦cDNA文库,获得2.7×104个独立克隆,文库平均长度500bp。  相似文献   

烟草叶片全长cDNA文库构建及EST序列分析     

龚达平  解敏敏  孙玉合 《中国农业科学》2012,45(9):1696-1702

【目的】构建烟草叶片全长cDNA文库并测序,发掘与烟叶发育、代谢和抗逆相关的基因,为进一步研究功能基因奠定基础。【方法】以烟草苗期叶片为试验材料,利用改进的Cap-trapper法构建烟草叶片全长cDNA文库。利用测序技术获得大量的EST序列,采用生物信息分析手段,对所测EST进行拼接和功能注释。【结果】构建了烟草叶片的全长cDNA文库,该文库滴度为1.2×106 pfu•mL-1,平均插入片段在1.4 kb左右。利用该文库测序了5 280个克隆,获得5 233条高质量表达序列标签（EST）,序列拼接出3 922个单一基因;同源比对分析表明,89.7%的基因与已知功能基因具有较高的同源性,这些基因涉及细胞生长、信号转导、翻译合成、抗逆反应和能量代谢等功能;并详细鉴定了部分与烟碱合成和抗病相关的基因。【结论】通过Cap-trapper法成功构建了高质量的烟草幼苗叶片全长cDNA文库;大规模EST测序分析挖掘到大量与烟草幼苗叶片发育、抗逆、抗病、烟碱代谢相关的侯选基因。  相似文献   

A/J小鼠感染猪链球菌2型后脾脏消减cDNA文库的构建及相关差异基因表达分析     

谢正露  沈学怀  殷复建  刘琳  马海田  范红结 《南京农业大学学报》2012,35(3):94-100

为了分离与猪链球菌2型感染密切相关的基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建了8周龄A/J小鼠感染猪链球菌2型后的脾脏消减cDNA文库,并对其中169个阳性克隆进行测序,去除冗余的cDNA序列载体并聚类拼接后共获得110条差异表达序列标签(EST)。利用GenBank的BLAST软件分析比较核酸和蛋白质同源性,发现共有36个基因与这些EST具有高度的同源性,它们分别参与细胞成分、免疫、信号转导、凋亡、转录等重要功能。这些差异表达基因主要有ATP/GTP结合蛋白1(Agtpbp1)、天冬氨酸-谷氨酸-丙氨酸-天冬氨酸盒多肽5、核蛋白p68、ATP-依赖RNA解旋酶、真核生物转录因子2亚基(Eif2s2)、Na+/K+-ATP酶转运β3多肽、溶菌酶1、溶菌酶2等基因。结论:这些差异表达基因在猪链球菌2型感染过程中可能发挥重要功能。  相似文献   

3种养殖模式水体中细菌多样性研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

李革雷  陈昌福  高宇  刘振兴  谭晶晶 《华中农业大学学报》2012,31(3):381-390

采用16SrDNA克隆文库技术,对位于武汉市少潭河水库养殖基地3种养殖模式[根据放养鱼所占比例,草鱼75%、鲢15%、鳙6%、异育银鲫4%,为模式1(MSH1);草鱼75%、鲢15%、鳙3%、匙吻鲟3%、异育银鲫4%,为模式2(MSH2);草鱼75%、鲢15%、匙吻鲟6%、异育银鲫4%,为模式3(MSH3)]水体中细菌多样性进行研究。系统发育分析结果表明:3种养殖模式中细菌的16SrDNA克隆文库的序列总共分布于10个门,分别是变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、蓝藻细菌门(Cyanobacteria)、浮霉菌门(Planctomycetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)、放线菌门(Actinobacteria)、酸杆菌门(Acidobacteria)、绿弯菌门(Chloroflexi)、梭杆菌门(Fusobacteria)和OP10。对3种养殖模式中细菌的16SrDNA克隆文库的序列多样性分析结果表明,MSH2中细菌克隆文库的多样性指数优于MSH1和MSH3,而MSH3优于MSH1。  相似文献   

专家文库     

《猪业科学》2012,29(2):4-4

刘娣,1963年生,汉族。1985年毕业于东北师范大学生物系获学士学位,1994、1998年毕业于东北农业人学动物遗传繁育专业获硕士和博士学位,2001年于东北林业大学野生动物资源博士后流动站出站,  相似文献   

专家文库——来砺     

《猪业科学》2012,29(12)

朱砺,男,1975年生,动物遗传育种与繁殖学博士,教授,博士生导师,国家生猪产业技术体系后备人才,四川省学术和技术带头人后备人选。现任四川省畜牧兽医学会养猪学分会副理事长和四川省乐山市国家畜牧科技园博士工作站站长、中国畜牧兽医学会会员、美国动物遗传育种学会（ASAS）会员。2001至今在四川农业大学动物科技学院任教,2010年破格晋升教授。2012年遴选为博士生导师。主要从事养猪生产和猪的遗传育种方面的教学和科研工作。主讲（（养猪学》、  相似文献   

专家文库     

《猪业科学》2012,29(8):8

<正>田克恭,男,汉族,1964年4月生,山西省万荣县人,博士,研究员。1988年毕业于北京农业大学兽医学院,获传染病与预防兽医学硕士学位、1988年—2000年供职于军事医学科学院实验动物中心,1995年—1998年在中国农业大学动物医学院在职攻读并获得博士学,2000年—2006年供职于农业部全国畜牧兽医总站,2006年4月至今先后任中国动物疫病预防控制中心兽医诊断室(农业部兽医诊断中心)常务副主  相似文献   

专家文库     

《猪业科学》2012,29(5):4

<正>鲁绍雄,男,1972年4月出生,云南镇雄人,博士,教授,博士生导师,云南省现代农业生猪产业技术体系首席科学家。现任云南农业大学动物科学技术学院副院长,兼任中国畜牧兽医学会动物遗传育种学分会、畜禽遗传标记学分会和信息技术分会理事。1991—1995年在云南农业大学畜牧专业学习,获学士学位;1995—1998年在云南农业大学动物遗传育种专业学习,获硕士学位;1998—2001年在中国农业大学动物遗传育种与繁殖专业学习,获博士学位。  相似文献