马链球菌兽疫亚种烯醇化酶对小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响   总被引：1，自引：1，他引：0  

陈楷文  华承薇  袁宸  潘飞  蔺辉星  范红结  马喆 《畜牧兽医学报》2020,51(10):2576-2583

旨在研究马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi ssp.zooepidemicus，SEZ）烯醇化酶（enolase，Eno）对小鼠肺泡巨噬细胞（RAW264.7）吞噬能力的影响。通过构建原核表达质粒获得重组烯醇化酶（rEno），采用台盼蓝活细胞计数法，判定在不同处理浓度和时间下rEno蛋白对RAW264.7细胞的细胞毒性。将rEno蛋白与RAW264.7细胞共孵育后，用SEZ作用于细胞并检测细胞吞菌数量，判断RAW264.7细胞对SEZ的吞噬活性。进一步通过活细胞稳定同位素标记技术（SILAC）和蛋白质谱分析技术（LC-MS/MS），筛选到RAW264.7细胞中可能与SEZ Eno存在相互作用的候选蛋白。结果发现，10 μg·mL^-1 rEno蛋白处理对RAW264.7细胞有明显的细胞毒性，且10 μg·mL^-1 rEno蛋白处理RAW264.7细胞2和4 h可显著抑制其对SEZ的吞噬作用（P<0.01、P<0.05）。初步筛选到RAW264.7细胞中动力蛋白激活蛋白亚单位蛋白（dynactin subunit protein 2，Dctn）、整合素α-M蛋白（integrin alpha-M）等17种可能与Eno发生互作的蛋白。本研究获得了rEno重组表达蛋白，发现rEno可减少RAW264.7细胞对SEZ的吞噬，互作蛋白的初步筛选也为进一步揭示Eno在SEZ抗吞噬中的作用机制奠定了基础。  相似文献   

1株抗猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定     

殷一凡  季霖  马千惠  范红结  蔺辉星 《畜牧与兽医》2022,(5):98-104

为鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳(N)蛋白的抗原表位,本研究通过原核表达N蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合和亚克隆技术,筛选出1株稳定分泌抗PEDV N蛋白抗体的杂交瘤细胞9B4。经鉴定单克隆抗体9B4的亚型为IgG1型,轻链为Kappa链。腹水抗体ELISA效价为10~6以上。ELISA、Western blot和免疫荧光鉴定结果显示该单克隆抗体反应原性和特异性良好。利用噬菌体展示技术对单克隆抗体9B4进行抗原表位鉴定,获得4个N蛋白的模拟抗原表位(C11、C12、C14和C26)。随后分别以噬菌体阳性克隆为模拟抗原,对临床PEDV血清样品进行检测,发现其均能与猪PEDV阳性血清发生特异性结合,而与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性血清、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)阳性血清不反应,说明本研究获得的N蛋白模拟表位可用于PEDV抗体的检测,有助于PED流行病学调查和PEDV疫苗免疫效果的评价。  相似文献   

副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5对豚鼠树突状细胞成熟及功能影响     

佘志成  范红结  李春玲  王贵平  贾爱卿  杨冬霞 《畜牧兽医学报》2011,42(7)

为研究副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)外膜蛋白P5对豚鼠骨髓来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)刺激淋巴细胞增殖功能及细胞因子分泌的影响,以GM-CSF、IL-4联合诱导骨髓细胞生成未成熟DC,加入不同剂量副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5,观察DC形态,检测混合淋巴细胞反应,ELISA法测IL-6、IL-12p70、TNF-α分泌情况.结果显示:经副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5刺激后,可获得具有典型树突状突起形态的DC;经5μg·mL-1P5刺激的DC较对照IL-6、TNF-α分泌量极显著增加(P＜0.01),IL-12的分泌量有所增加(P＞0.05);50 μg·mL-1P5刺激的DC较对照IL-6分泌量极显著增加(P＜0.01),IL-12p70和TNF-α分泌量均极显著下降(P＜0.01).诱导后的DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力极显著增强(P＜0.01).本研究证明P5能影响骨髓细胞来源的DC的分化、成熟及功能的发挥,且不同剂量的P5对DC的成熟程度影响有差异.  相似文献   

金华地区猪圆环病毒病病原流行病学调查   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴瑗  范红结  李君荣 《中国兽医杂志》2011,47(4)

猪圆环病毒2型(PCV2)感染主要危害在于能使感染猪免疫功能受到损害,导致机体抵抗力下降,易遭受其他病原的并发或继发感染,使病情加重,造成巨大的经济损失.  相似文献   

非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达     

毕振威  王永山  范红结  王智群  吴晓悠  马金荣  欧阳伟  张海彬 《中国预防兽医学报》2011,33(8)

为分析当地非典型犬瘟热病毒(CDV)核衣壳蛋白(N)基因的序列特征及其表达产物的抗原性,根据已发表CDV的N基因序列设计引物,用RT-PCR方法从引起非典型症状的CDV细胞培养物中扩增N基因,进行克隆和序列分析,结果表明:该非典型CDV的N基因与已发表的12个CDV强毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在96.6%～99.2%和97.9%～99.4%之间,与已发表的4个CDV疫苗弱毒株的同源性分别在93.2%～93.6%和96.4%～97.5%之间;在N基因系统发育进化树上,非典型CDV与12个强毒株处在同一亚群,而且与9个中国分离毒株的亲缘关系近于3个国外毒株。N基因在大肠杆菌中表达的重组N蛋白的分子量为62 ku,主要以包涵体的形式存在;用western blot分析,重组N蛋白可与CDV阳性血清发生特异性反应;以纯化的重组N蛋白为抗原建立的CDV抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性。  相似文献   

猴痘研究进展     

张睿  陈国强  张敬友  朱娜  薛峰  范红结 《动物检疫》2011,(9):71-73

猴痘是一种以皮肤出疹为特征的病毒性人畜共患传染病,通过直接密切接触,由动物传染给人,并可在人与人之间传染。其主要发生于中非和西非的热带雨林,在美国也曾暴发过。虽然在我国至今尚无猴痘的报道,但未雨绸缪,做好技术储备,很有必要。  相似文献   

猪IL-1β与IL-18SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立     

何孔旺  俞正玉  倪艳秀  吕立新  周俊明  张雪寒  李彬  汪伟  温立斌  王小敏  范红结  茅爱华  郭容利 《江苏农业学报》2011,(6):1289-1294

IL-1β和IL-18是重要的促炎症细胞因子,在介导机体炎症反应中起重要作用.为了建立在体外定量检测猪细胞因子IL-1β和IL-18mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,依据GenBank中登录的猪细胞因子基因IL-1β、IL-18及管家基因β-actin核苷酸序列,设计特异性引物,经RT-PC...  相似文献   

皖北地区仔猪水肿病流行病学调查   总被引：4，自引：0，他引：4  

来景辉  范红结 《安徽农业科学》2009,37(11):5010-5011

[目的]研究皖北地区猪水肿病的发病规律。[方法]对皖北地区猪场及各乡镇发生猪水肿病（EDP）进行较详细的流行病学调查。[结果]研究发现猪水肿病在皖北地区呈零星散发,具有传染性,发病率在0.69%～2.14%,死亡率在0.21%～0.94%,病死率18.0%～46.0%。[结论]溶血性大肠杆菌是引发猪水肿病的病原,环境卫生、饲料、管理、微量元素、应激因素等是该病的主要诱发因素。  相似文献   

过量氟对动物机体的影响     

王量  范红结 《中国畜牧兽医》2014,41(4):119-122

氟是动物机体的必需微量元素,适量的氟有利于骨骼、牙齿的生长,过量的氟则会引起机体慢性全身性中毒,主要影响骨骼、牙齿的正常生长,另外对消化系统、生殖泌尿系统、神经系统、内分泌系统和免疫系统也产生中毒影响。作者从氟中毒机制的国内外研究现状和进展出发,就过量氟化物对动物机体的影响进行综述,以期为动物氟中毒病相关研究提供参考。  相似文献   

生长激素释放肽及其生物学效应     

来景辉  范红结 《中国畜牧兽医》2012,39(11):66-69

生长激素释放肽(Ghrelin)是一种在动物体内广泛存在的生长激素促分泌素受体(GHSR)的内源性配体, Ghrelin与位于下丘脑的GHSR结合后,具有促进生长激素释放、增加食欲、调节消化系统功能及能量代谢等作用。文章就Ghrelin的结构、分布、生物学效应及在畜牧业上的应用前景等方面进行综述,以期促进Ghrelin的进一步深入研究。  相似文献