猪圆环病毒3型SYBR greenⅠ荧光定量PCR方法建立及初步应用     

《中国兽医学报》2019,(7):1250-1255

为建立一种快速、特异、敏感的SYBR greenⅠ实时定量PCR方法,检测猪圆环病毒3型(PCV3)在感染猪体内的分布情况和病毒含量,本研究根据PCV3的cap基因序列设计1对引物,对反应条件、反应体系进行优化,建立了检测PCV3 cap基因的SYBR greenⅠ实时定量PCR方法,并对动物回归试验后剖检的病料组织进行了检测。结果,该方法比传统PCR方法灵敏度高100倍,可达3.04×10~2拷贝/μL,且具有良好的特异性和重复性。在不同病料组织中均可检测到PCV3,但不同感染猪、不同组织病毒检出及含量有差异,其中肝脏、肺脏、颌下淋巴结中病毒含量显著高于心脏、心包肌、肾脏等;肝中病毒拷贝数最高,达1.16×10~6拷贝/μL,表明PCV3具有一定的组织嗜性。该方法可用于PCV3的病原学监测、流行病学调查及定量研究。  相似文献   

采用RT-PCR方法诊断猪繁殖与呼吸综合征     

吕娜娜 《山东畜牧兽医》2019,(1):30-31

山东某猪场发生以猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)为主要特征的疾病。笔者对送检的病料进行了实验室诊断:剖检主要发现肺水肿,出血;组织病理学检测主要发现肺间质明显增宽,肾小管上皮肿胀;采用RT-PCR检测方法检测猪肺脏组织,结果被验样品在400bp扩增带为PRRSV阳性,阴性对照无扩增带出现。诊断结果表明:该猪场发生的病例为猪繁殖呼吸障碍综合征。  相似文献   

多浪羊双肌臀基因Callipyge序列分析     

方翟  范文斌  高庆华 《湖北畜牧兽医》2019,40(7):5-7

绵羊的双肌臀(Callipyge)基因表现型为后臀肌肉增大近30%,由位于绵羊第18号常染色体上基因上游存在一个N→C的单核苷酸多态性(SNP)标记(命名为SNPCLPG)产生的,该SNP标记的存在与Callipyge表现完全吻合。为此,根据已知多态性,选择设计合成了1对引物,以多浪羊为研究对象,对PCR扩增产物直接测序,进行了SNPCLPG位点的检测。获得303bp的扩增片断,测序后进行序列分析,发现在38bp处碱基产生A到G的突变,在80、92、149、219bp处碱基产生T到C的突变。  相似文献   

猪德尔塔冠状病毒纳米PCR检测方法的建立     

董志珍  张霞  柴铭骏  陈小金  贾赟  肇慧君  帅江冰 《中国动物检疫》2019,36(8):91-95

根据Gen Bank登录的猪德尔塔冠状病毒(PDCo V)毒株M基因设计特异性引物,建立了PDCo V纳米PCR检测方法并进行了临床样品检测。结果显示:该方法对标准品检测的最低浓度可达102 copies/μL,与其他几种常见猪病病毒无交叉反应;用该方法检测国内猪场62份腹泻粪便样品,相比常规PCR方法,该纳米PCR方法的检出率更高,而两种方法对268份进境活猪粪拭子样品检测均为阴性。结果表明,本研究所建立的纳米PCR检测方法适用于国内猪场的PDCo V检测和进境活猪的监控检测,可作为PDCo V实验室检测的有力技术手段。  相似文献   

新疆某猪场母猪繁殖障碍病病原学检测和毒株鉴定     

范士龙  刘丹丹  韦丽婷  巴音查汗  张伟 《中国动物检疫》2019,36(9):83-87

2018年4月,新疆某规模化繁育猪场出现大量母猪流产,产死胎、木乃伊胎等繁育障碍症状。为确诊病因,采集胎儿组织和母猪流产分泌物,通过普通PCR、RT-PCR、real-timePCR技术,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、弓形虫4种病原进行检测。结果显示,PRRSV检测呈阳性,PRV、PPV和弓形虫检测呈阴性。通过PRRSV特异性引物NSP2进行PRRSV毒株鉴定,确定该猪场存在PRRSV类NADC30毒株。结果表明,类NADC30毒株是导致该猪场出现母猪繁殖障碍的重要病原,说明该新型毒株已经蔓延到新疆地区,并开始对该地生猪养殖业造成危害。本试验为新疆地区猪场母猪繁殖障碍的病因调查提供了依据。  相似文献   

牛支原体和牛病毒性腹泻病毒二重二温式PCR检测方法的建立     

谢志勤  范晴  谢芝勋  张民秀  谢丽基  黄娇玲  张艳芳  曾婷婷  王盛  罗思思  邓显文  李孟  李丹  刘加波 《中国动物检疫》2019,36(1):70-75

为建立一种牛支原体(Mycoplasma bovis,MB)和牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的快速鉴别诊断方法,针对MB的uvr C基因和BVDV的5'端非编码区(5'-UTR)保守基因序列,分别设计两对特异引物,并将三温式PCR扩增程序简化为二个温度梯度,建立了鉴别MB和BVDV的二重二温式PCR方法。该方法能同时扩增MB和BVDV,扩增产物大小分别为412和170 bp。特异性试验结果显示,该方法对参试的所有毒株只扩增MB和BVDV基因组,对其它牛病原体无扩增;敏感性试验结果显示,该方法最低能同时检测到104拷贝的两种目的核酸;干扰性试验结果显示,该方法能同时检测两个模板不同浓度的组合,试验结果不受模板影响。综上,本研究所建立的二重二温式PCR方法特异、敏感、快速、简便,可应用于MB和BVDV临床鉴别诊断和流行病学调查。  相似文献   

袋鼠疱疹病毒1型实时荧光PCR方法的建立     

王建华  王玉玲  柴铭骏  张俊哲  赵丹  王乃福  陈本龙 《中国动物检疫》2019,36(1):76-79

为实现袋鼠临床样本中疱疹病毒1型(Macropodid herpesvirus 1,MaHV-1)的出入境快速检测,基于MaHV-1的gB基因序列设计特异引物和TaqMan探针,建立了一种MaHV-1荧光PCR检测方法。试验结果显示,该方法只对MaHV-1 gB基因呈现特异性扩增,与禽传染性喉气管炎病毒、伪狂犬病毒和牛传染性鼻气管炎病毒不发生交叉反应,对阳性标准质粒对照(pCR-MaHV-1-gB)的最低检测限为8个拷贝数/反应。该方法的组内和组间试验的Ct值变异系数介于0.17%～0.96%之间,具有良好的重现性。试验结果表明,本研究建立的实时荧光PCR方法可用于袋鼠MaHV-1的病原学检测。  相似文献   

江苏省扬泰地区犬细小病毒分子流行病学调查     

王海燕  谢静  王涛  刘静  管远红  张斌  徐亚亚  曹明凤  崔乐遥  刘宗平 《中国动物检疫》2019,36(10):27-31

犬细小病毒（CPV）自1978年被首次分离到以来,已由CPV-2演化出CPV-2a、CPV-2b和CPV-2c 3种新抗原型。为了解江苏省扬泰地区的CPV分子特征和基因型,2015年5月至2016年12月在扬州和泰州地区宠物医院,根据患病犬临床症状以及CPV快速检测试纸条初步诊断结果,收集可疑病例的肛门棉拭子或粪便作为检测样品,扩增样本中CPV的VP2基因片段并对扩增产物进行测序和分析。结果显示：在48份样品中,4份被鉴定为CPV-2型,24份被鉴定为CPV-2a型,20份被鉴定为CPV-2b型,并未发现CPV-2c型。结果表明,该期间CPV-2a 型与CPV-2b型成为扬泰州地区的优势基因型,需开展这些新基因型的深入研究和防控。  相似文献   

山羊痘病毒与小反刍兽疫病毒双重PCR检测方法的建立     

王璐瑶  宫英阑  郝雪飘  王建昌  张若曦  袁万哲 《中国动物检疫》2019,36(11):72-76

为建立一种灵敏、准确、快速的山羊痘病毒(GTPV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)双重PCR检测方法,根据GenBank上登录的GTPV、PPRV两种病毒的基因序列设计检测引物,在常规PCR基础上,对反应条件及反应体系进行优化,建立了这两种病毒的双重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性检验。结果显示:仅GTPV和PPRV核酸样品扩增出与预期目标相符的目的片段,而其他病原对照均未出现目的条带;GTPV的最低检出量为0.283 ng/μL,PPRV的最低检出量为6.459 ng/μL。结果表明,本研究建立的双重PCR检测方法可一次性同时完成PPRV、GTPV两种病原的检测,且具有较高的特异性和敏感性。本方法的建立为山羊痘和小反刍兽疫的临床诊断、流行病学研究、疫情监测提供了技术支持。  相似文献   

羊梭菌病快速鉴别PCR方法的建立及初步应用     

李田美  吴正双  许大伟  姜艳芬 《动物医学进展》2019,(7):20-25

根据GenBank已公布的产气荚膜梭菌和腐败梭菌的α毒素基因序列,分别设计并合成针对2种α毒素基因的特异性引物,通过扩增条件的优化,建立快速鉴别产气荚膜梭菌和腐败梭菌的双重PCR方法。特异性试验显示,产气荚膜梭菌和腐败梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期目的条带,而大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和链球菌则均未能扩增出相应条带。灵敏度试验结果显示,产气荚膜梭菌和腐败梭菌基因组DNA最低检测量分别为17.95pg/μL和1.261pg/μL。应用该方法对样品进行检测,其中5份为产气荚膜梭菌阳性。成功建立了特异性强、敏感性高的双重PCR方法,可以有效进行产气荚膜梭菌和腐败梭菌的快速鉴别,对羊梭菌病病原快速鉴定及流行病学调查具有重要意义。  相似文献