含PRRS病毒ORF5的伪狂犬病病毒TK基因缺失转移载体的构建   总被引：2，自引：0，他引：2  

仇华吉  周彦君 《动物医学进展》2000,21(4):46-49

提取伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）ＢａｒｔｈａＫ６１株基因组ＤＮＡ,用限制性内切酶ＫｐｎＩ充分消化,回收５．９ｋｂ片段（Ｊ片段）,将其克隆于质粒ｐＵＣ１１９ ＫｐｎＩ位点上,获得ｐＢＫＪ。用两对针对ＰＲＶ ＴＫ基因的特异性引物对重组质粒进行ＰＣＲ鉴定,证明其中含有ＰＲＶ ＴＫ基因。然后用ＫｐｎＩ、ＰｓｔＩ和ＢａｍＨＩ等限制性内切酶对其进行酶切分析,确定了克隆片段的物理图谱。进一步研究证实ＴＫ基因位于其中的  相似文献   

马立克氏病毒及其载体的研究进展     

潘青  赵冬凤  胡雪静  刘丽  刘倩  董建伟 《中国牧业通讯》2009,(13):9-10

1 分子生物学特性 马立克氏病病毒(MDV)基因组为双股线性DNA,长度约为175 kb.MDV的DNA浮力密度为1.706 g/mL,碱基组成的G+C含量为46%.火鸡疱疹病毒(HVT)DNA浮力密度和G+C含量与MDV相似.裸露的病毒DNA对单层细胞和易感鸡都具有感染性.  相似文献   

兔病毒性出血症DNA疫苗研究进展     

付强  郭广君  程立坤  王艳 《湖北畜牧兽医》2014,(8)

兔病毒性出血症是养兔业最重要的疾病之一,其发病急,致死率高,可对养兔业造成巨大的经济损失,在疫苗研究方面,由于传统组织灭活疫苗存在诸多缺点,迫切需要研制新型疫苗。本文主要从兔病毒性出血症DNA疫苗的构建、免疫佐剂、临床免疫途径以及临床使用的效果等方面进行简要介绍。  相似文献   

鹅IGF-I基因cDNA的克隆、分析与原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

王雷  王宝维  贾晓晖  杨志刚  刘光磊 《中国畜牧杂志》2008,44(1)

从GenBank中读取鸡、鸭、鹌鹑、火鸡等的胰岛素样生长因子-I(IGF-I)基因序列进行分析并设计引物,运用RT-PCR法从五龙鹅的总RNA中克隆了IGF-I基因的完整编码区序列(GenBank登录号为DQ662932).运用生物信息学技术对序列进行分析,结果显示:五龙鹅JGF-I基因的编码区长462 bp,与鸭和鸡基因序列同源性分别为99.6%和98.1%;分子进化树进一步揭示了五龙鹅与鸭、鸡及其他动物的进化关系;同源建模分析发现该基因有3个α-螺旋组成.克隆鹅IGF-I基因表达序列,然后连接到pET-32a载体上进行原核表达.经SDS-PAGE分析发现原核表达产物约为28 ku的融合蛋白,Western杂交分析表明,重组蛋白为目的蛋白.  相似文献   

转基因动物制作技术及其基因载体研究进展     

王洪梅  武建铭  刘晓  宋玲玲  杨宏军  高运东  侯明海  仲跻峰  何洪彬 《家畜生态学报》2011,32(3):6-9

论文概述了家畜转基因动物的制作方法,初步分析了用于转基因技术的基因载体种类,深入探讨了不同载体的优缺点,并展望了基因载体的发展趋势.  相似文献   

猪白细胞介素2基因的克隆及腺病毒表达载体的构建     

周庆丰  刘忠华  龚朋飞  周美华  苏润环  何津佳  毕英佐 《动物医学进展》2009,30(1)

根据GenBank中收录的猪白细胞介素2(pIL-2)基因序列,设计1对特异性引物.运用RT-PCR技术从刀豆素(Con A)诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到pIL-2基因,并将其克隆至pGEM-T Easy栽体上.核苷酸测序结果显示,获得的基因序列全长493 bp,含465 bp的开放阅读框,编码154个氨基酸,与已知pIL-2核苷酸序列和氨基酸序列的同源性都高达100%.将克隆的pIL-2基因编码阅读框亚克隆至腺病毒穿梭栽体pShuttle-CMV,电转化含腺病毒基因组(pAdEasy-1)的大肠埃希茵细胞BJ5183-AD-1,成功获得了重组腺病毒DNA,将纯化后的重组腺病毒DNA转染AD-293细胞,经过病毒基因组的PCR鉴定和转录水平的RT-PCR鉴定,初步表明,获得了表达pIL-2的重组腺病毒.  相似文献   

猪流行性腹泻病毒在微载体培养Vero细胞上的增殖试验     

《畜牧与兽医》2015,(8):89-92

为了探索猪流行性腹泻病毒(PEDV)在微载体培养Vero细胞上的增殖效果,采用2 L生物反应器进行微载体培养Vero细胞和PEDV繁殖,并摸索细胞生长和病毒繁殖的最佳条件,检测病毒滴度,与方瓶培养的病毒滴度进行比较。结果显示:当微载体为5 g,种子细胞数约3.05×107个,采用灌注式培养,Vero细胞经72 h长满单层,细胞数约为3.02×109个,此时用滴度为104.45TCID50/m L的PEDV 1 m L感染Vero细胞,培养96 h,微载体上80%细胞脱落时收毒,培养的PEDV具有较高的病毒滴度。相同病毒在微载体系统与方瓶上进行同步传代,经检测病毒滴度均有提高,但在微载体系统上培养的PEDV最高滴度可达到106.05TCID50/m L,明显高于方瓶培养。本试验为研究PEDV能更好适应Vero细胞,提高PEDV产量提供技术支持。  相似文献   

H9N2亚型禽流感病毒NS1基因真核表达载体的构建及其在293细胞瞬时表达     

董永军  ;王丽荣  ;贺会利 《兽医大学学报》2014,(8):1235-1238

在293细胞中瞬时表达A/Chicken/Henan/1001/2010（H9N2）NS1基因蛋白,并对表达蛋白活性进行测定。试验利用PCR技术从NS1-T载体质粒上扩增NS1基因,将其克隆至pCAGGS载体,构建重组质粒NS1-pCAGGS;经酶切和测序鉴定正确后,重组质粒NS1-pCAGGS与脂质体按照一定比例混合后转染293细胞,用间接免疫荧光方法对瞬时表达细胞进行荧光信号反应。结果显示,禽流感NS1基因可以很好地在293细胞中瞬时表达,具有良好的反应原性。  相似文献   

猪MII期卵母细胞的玻璃化冷冻的初步研究     

陶志云  陶勇  章孝荣  陈华  朱必龙 《黑龙江动物繁殖》2007,15(5):1-3

试验采用3种冷冻载体(麦管、开放式拉长麦管和半麦管)对猪卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力的影响进行研究,以探讨采用自制半麦管作为载体对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力的影响.结果发现,采用半麦管法、OPS法玻璃化冷冻的猪卵母细胞的形态完整率、存活率、卵裂率分别为90.85%、60.07%、20.43%和84.15%、55.71%、14.71%,无显著差异(P＞0.05),但采用半麦管法的结果好于OPS法;与麦管法的形态完整率、存活率和卵裂率(分别为60.06%,39.64%和0)均有显著性差异(＜0.05).结论为采用半麦管法玻璃化冷冻猪卵母细胞可以稍微提高其冻后发育能力.  相似文献   

禽痘病毒用作疫苗载体     

张道凌译  刘亚菲校 《国外畜牧学(猪与禽)》2012,(4):41-42

最近,CEVA载体疫苗研讨会在美国圣地亚哥召开,会上出现了各种有意思的观点。我们已经考察了火鸡疱疹病毒载体疫苗的使用情况,本文将讨论以禽痘病毒为载体来生产疫苗的可行性。  相似文献