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101.
为了构建口蹄疫与伪狂犬病二价基因工程疫苗株 ,将口蹄疫病毒 (FMDV) P1基因插入到伪狂犬病病毒 (PRV)通用载体 p Pg G- uni中 ,得到 PRV转移载体 p Pg G- P1。将转移载体与 Eco R 线性化后的 PRV弱毒疫苗株 TK- /g G- / lac Z 基因组 DNA共转染 PK- 15细胞 ,转染产物经多次空斑纯化和 PCR鉴定 ,获得了纯化的重组 PRV TK- /g G- / Pg G- P1,重组病毒基因组 DNA经酶切鉴定进一步表明 ,FMDV的 P1基因已成功地整合到 PRV弱毒疫苗株的基因组中。Western blot试验表明 ,FMDV P1基因在重组 PRV中得到表达。该研究为进一步研制口蹄疫与伪狂犬病二价基因工程疫苗奠定了坚实的基础 相似文献
102.
融合表达淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒和卵清白蛋白CD8+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建与鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
依据淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)主要保护性抗原CD8 T细胞表位VRRPQASGVYMGNLTAQ和卵清白蛋白(OVA)CD8 T细胞表位SIINFEKL,设计、合成两条编码LCMV和OVA CD8 T细胞表位的寡核苷酸片段,经退火后,克隆入绿色荧光蛋白表达质粒pYAGFP,经PCR扩增和序列测定分析,证实成功构建T细胞表位与绿色荧光蛋白融合表达的重组质粒pYAGFPL-O,将此重组质粒pYAGFPL-O转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550,获得重组沙门氏菌X4550(pYAGFPL-O).用SDS-PAGE电泳测得重组菌表达的融合蛋白约为30kD.同时,荧光显微镜下观察到X4550(pYAGFPL-O)发出黄绿色荧光.这些结果表明LCMV和OVA T细胞表位已成功表达.重组菌X4550(pYAGFPL-O)的获得为研究沙门氏菌载体携带外源抗原的T细胞应答规律及调控机理打下了重要基础. 相似文献
103.
抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验 总被引:3,自引:0,他引:3
疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病.在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件.在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护.在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体.这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播. 相似文献
104.
IMC10200株ALV-J实验诱发禽骨髓性白血病的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
对分离自肉种鸡群亚临床感染的J亚群禽白血病病毒IMC1o200株进行了实验感染诱发禽骨髓性白血病的病理学研究.IMC10200株J亚群禽白血病病毒尿囊腔接种11日龄肉鸡胚和SPF蛋鸡胚,孵出后跟踪观察.9周龄时随机抽检感染鸡,感染肉鸡特异引物PCR检测全部为阳性;组织病理学观察感染鸡无明显病变.至21周龄时感染肉鸡出现第一例典型骨髓性白血病病例;感染SPF蛋鸡未见明显J亚群禽白血病相关病变. 相似文献
105.
乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建 总被引:7,自引:0,他引:7
设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中,获得重组中间转移质粒pUSK—NS1。将pUSK—NS1与伪狂犬病毒Ea株TK/gG/LacZ^ 突变株基因组共转染真核细胞IBRS-2,通过空斑纯化得到了乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK/gG^-/NS^ 1。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白。该重组病毒可作为猪乙型脑炎和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株。 相似文献
106.
禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究 总被引:21,自引:1,他引:21
以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体,兔抗AIVIgG为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL,兔抗AIV IgG的最适工作浓度为5μg/mL;对已知的阳性样品,用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上,且能检出其它亚型的禽流感病毒;与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应,说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测,结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。 相似文献
107.
A study was carried out to demonstrate that Rice yellow mottle virus (RYMV), a virus known to be transmitted by beetles, can spread between rice plants by direct leaf contact caused by wind. Almost all healthy plants surrounding an infected plant became infected when exposed to a fan blowing for 15 min at a distance of 50 cm. Spread of RYMV by plant contact, mediated by wind, was also demonstrated in field experiments, the extent of spread depending on plant density. Infection was almost 10 times higher in plots with a density of 33 plants m−2 than in plots with 16 plants m−2 . Less spread was observed in plots protected by 1·5 m high windscreens. It is suggested that wind-mediated spread of RYMV may result from abrasive contact between leaves of plants. 相似文献
108.
N. L. Robertson 《Plant pathology》2004,53(5):569-576
A new virus named Nootka lupine vein-clearing virus (NLVCV) was isolated from Lupinus nootkatensis plants that were confined to a relatively small area in the Talkeetna mountains of south-central Alaska. Annual surveys (2000–03) consistently found leaf symptoms of pronounced vein clearing and mosaic on 3- to 4-week-old plants in late June. Spherical particles ≈30 nm in diameter were isolated from these leaves. Virions contained a single-stranded RNA of ≈4·0–4·2 kb and one species of capsid protein estimated to be ≈40 kDa. The double-stranded RNA profile from naturally infected leaves consisted of three major bands ≈4·2, 1·9 and 1·5 kbp. Protein extractions from either sap or virions of diseased plants reacted to polyclonal antiserum made against the virions in Western blot assays. A predicted PCR product ≈500 bp was synthesized from virion RNA using primers specific to the carmovirus RNA-dependent RNA polymerase (RDRP) gene. The nucleotide sequence of the amplified DNA did not match any known virus, but contained short regions of identity to several carmoviruses. Only species belonging to the Fabaceae were susceptible to NLVCV by mechanical inoculation. Based on dsRNA profile, size of virion RNA genome and capsid protein, and similarity of the RDRP gene to that of other carmoviruses, it is suggested that NLVCV is a member of the family Tombusviridae , and tentatively of the genus Carmovirus . As the host range, RDRP gene and dsRNA profile of NLVCV are different from those of known viruses, this is a newly described plant virus. 相似文献
109.
猪繁殖与呼吸综合征病毒缺失变异株的基因组特征 总被引:51,自引:1,他引:51
对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)分离株HB2(sh)/2002的全基因组序列进行了测定与分析。该毒株基因组全长为15373nt(不包括PolyA尾),与国内外美洲型PRRSV分离株全序列相似性介于88.7%~95.1%之间。序列分析表明,该毒株是1个天然存在缺失的变异毒株,其ORFla的Nsp2存在编码12个氨基酸的连续36个核苷酸的缺失,ORF、3存在编码1个氨基酸的3个核苷酸的缺失。这是国内外首次发现PRRSV存在缺失变异现象,研究结果补充和丰富了PRRSV毒株的基因组信息数据,为深入研究该毒株的遗传与变异及其与生物学特性的关系奠定了基础。 相似文献
110.