抗福美双假单胞菌株的NTG化学诱变及分子探针鉴定     

陈荣基  唐东阶 《广西农业生物科学》1996,15(1):53-58

利用微生物的抗药性筛选抗福美双的假单胞菌株Ｔ４６，然后通过亚硝基胍（ＮＴＧ）化学诱变获得了对福美双敏感的三株突变株Ｔ４６Ｎ１０、Ｔ４６Ｎ７和Ｔ４６Ｎ１７。利用这三个突变株作受体，通过基因克隆的方法筛选到了可使三个突变株恢复抗性的克隆，抗性基因分别被定位在７ｋｂ、２．５ｋｂ和２０ｋｂ的ＥｃｏＲＩ片段上。将这三个克隆分别用＾３２Ｐ标记后制成分子探针，然后分别与三个突变菌株的总ＤＮＡ进行ＤＮＡ－ＤＮＡ分  相似文献   

分子生物学方法在瘤胃微生物研究中的应用   总被引：3，自引：0，他引：3  

王海荣  侯先志 《河北农业大学学报》2006,29(4):92-97,117

文章综述了以16S rRNA序列分析技术为主的分子生物学技术在反刍动物瘤胃微生态研究中的应用现状,主要包括:序列分析技术、DGGE指纹技术、寡核苷酸探针杂交分析法以及定量PCR等分子生物学方法和技术。今后的发展趋势是加强这些方法间及其与传统方法的有机结合,并发展新的方法,促进瘤胃微生态研究的深入开展。  相似文献   

地高辛标记质粒探针监测卡那霉素耐药性的研究   总被引：6，自引：0，他引：6  

杨汉春  赵静  刘金华  查振林  陈艳红 《中国农业科学》2001,34(1):77-80

 用 Eco R 单酶切卡那霉素抗性质粒 ,经 DNA纯化回收 4.34 1kb的目的基因片段。以随机引物法 ,用地高辛进行标记 ,制备成探针 ,成功建立了斑点杂交法和菌落原位杂交法用于检测猪源大肠杆菌对卡那霉素的耐药性 ,结果表明与药敏试验阳性的符合率为 10 0 % ,说明建立的探针技术可以用于猪源大肠杆菌对卡那霉素的耐药性监测。  相似文献   

地高辛(DIG)和碱性磷酸酶标记cDNA探针检测PRSV     

姜玲  张红艳  张明涛  刘小梅  伏卉 《农业生物技术学报》2007,15(3):496-502

根据GenBank发表的PRSV(番木瓜环斑病毒)中国Sm株系的外壳蛋白基因序列,设计特异引物,以美中红(Caricapapaya L.cv.Meizhonghong)带病样品的RNA为模板进行RT-PCR扩增,将其目的cDNA片段克隆到pGEM-Teasy质粒载体上。以重组质粒作模板,用PCR-DIG标记方法制备cDNA探针,另一种非放射性探针是经凝胶电泳分离、纯化cDNA片段,用碱性磷酸酶直接进行标记。利用地高辛(DIG)标记和碱性磷酸酶直接标记的cDNA探针核酸分子杂交及RT-PCR方法对PRSV进行了检测。结果表明,(1)测序结果表明美中红No.2序列与中国优势株系Sm的同源性为94.7%;(2)DIG标记的3种cDNA探针(861,455和215bp)对样品的总RNA检测结果一致,且861bp的探针杂交斑点最为清晰,上述核酸杂交结果与RT-PCR检测结果相符,核酸分子杂交检测的灵敏度和特异性能满足常规检测的需要;(3)碱性磷酸酶直接标记861bp的cDNA探针可进行PRSV的斑点杂交检测,可获得有效的杂交结果;(4)DIG标记探针对叶脉进行了印迹杂交检测,结果与RT-PCR检测结果相符。  相似文献   

微管蛋白荧光探针的制备及其在蚕豆叶片保卫细胞中的组装   总被引：3，自引：0，他引：3  

于荣  袁明  王学臣 《农业生物技术学报》2004,12(1):48-51

从新鲜猪脑中提取微管蛋白(两个循环的解聚甘聚合超速离心)，经DEAE-Sephadex A50离子层析纯化及罗丹明荧光标记，得到浓度为10．8mg/mL和染料蛋白比0．6(Dye／Protein=0．6)的猪脑微管蛋白荧光探针。将其显微注射于蚕豆(vicia faba L.)叶片下表皮的保卫细胞中，激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscope，CLSM）下观察，发现该荧光标记微管蛋白可以顺利地组装到保卫细胞的微管骨架上，5～10min即可清楚地观察到整合于保卫细胞中的微管网络。在开放气孔保卫细胞中，周质微管(cortical microtubule)沿细胞的腹壁向背壁辐射状排布；而关闭气孔保卫细胞中周质微管则解聚为零碎小片段。以上实验结果为在活体条件下，进一步精细研究气孔运动过程中保卫细胞微管骨架的动态变化提供了可靠的实验基础。  相似文献   

用于检测副结核分枝杆菌的克隆DNA探针     

Murr.  A 欧阳红生 《国外兽医学(畜禽传染病)》1990,10(4):32-34

  相似文献   

用杂交基因探针检测埃希氏大肠杆菌分离株的肠毒素,志…     

Shin.  SJ 谢占玲 《国外兽医学(畜禽传染病)》1995,15(3):46-48

用单克隆杂交技术检测了纽约州６６６头牛及５７头猪分离的埃希氏大肠杆菌的肠毒素（ＳＴａＰ，ＳＴｂ，ＬＴ，ＳＬＴ－１及ＳＬＴ－Ⅱ）和粘着素（Ｋ８８，Ｋ９９，Ｆ４１，９８７Ｐ）。有３６７株牛源分离株（４５．２％）至少能与一个基因探针杂交，其中２２３株（３３．２％）与Ｆ４１、１１２株（１６．７％）与Ｋ９９、８２株（１２．２％）与９８７Ｐ，９６株（１４．３％）与ＳＴａＰ，７株（１．１％）与ＳＴｂ杂交。能与Ｋ  相似文献   

中国伊氏锥虫kDNA小环的克隆及kDNA探针的建立     

李祥瑞  孔繁瑶  齐顺章 《畜牧兽医学报》1996,(1)

本研究以质粒ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）为载体，对我国北方和南方疫区伊氏锥虫动基体株的ｋＤＮＡ小环进行了克隆，并以其中之ｐＴＫ０１１－Ｃ＿１为探针对不同地理区的动基体株和无动基体株的不同ＤＮＡ进行杂交，结果表明，我国北、南两大疫区动基体株的ｋＤＮＡ小环大小均约为１ｋｂ，且均属Ａ型，ｐＴＫ０１１·Ｃ＿１只与动基体株的ｋＤＮＡ及ｔＤＮＡ杂交，不与其ｎＤＮＡ杂交，也不与无动基体株的任何ＤＮＡ及黄牛白细胞ＤＮＡ杂交。说明具有特异性，可以用于诊断。ｔＤＮＡ的杂交信号与ｋＤＮＡ相当，诊断中可以代替ｋＮＤＡ作为检测对象。  相似文献   

光生物素标记的口蹄疫病毒cDNA探针的制备及其...   总被引：1，自引：1，他引：0  

吴时友  陈书琨 《畜牧兽医学报》1991,22(4):365-370

  相似文献   

植物病毒分子探针合成和基因文库构建的一般原理和方法     

陈枝楠 《植物检疫》1991,5(2):116-117

植物病毒分子探针以其专一性、灵敏性和准确快速性的优点,在现代植物检疫工作中,还是病毒种和株系鉴定上得到愈来愈广泛的应用。植物病毒虽然很小,核苷酸序列不太长(小于20kbp),但其容纳的遗传信息量却非常丰富,如外壳蛋白基因,胞间转移基因,寄主专化性基因,结构蛋白基因,媒介传毒专化性基因,内含体基因等,而且往往出现遗传密码解读错误,如超读,非成熟中止,移码翻译等。故建立病毒的基因库十分必要。  相似文献