小鼠胞内氯离子通道5基因启动子核心功能区域鉴定及转录调控分析     

巨婷婷  吕文涛  于渤洋  刘洋  姜美华  许玲  赵泽平  尹靖东 《中国农业大学学报》2012,17(5):137-143

为研究胞内氯离子通道5基因(Chloride intracellular channel 5,CLIC5)广泛参与调节细胞内的各项生理活动与生化反应,并探讨该基因自身的表达调控机制,以小鼠基因组序列为模板,利用PCR技术扩增小鼠CLIC5基因5′上游调控序列,将其插入荧光素酶报告基因表达载体(pGL3-Basic)中,同时采用5′侧翼区缺失的方法构建了7个缺失不同DNA片段的荧光素酶表达载体。重组质粒与海肾荧光素酶载体(phRL-TK)共同瞬时转染HEK-293细胞,经双荧光素酶报告基因活性分析后,确定CLIC5基因的核心启动子区。利用生物信息学方法预测其中转录因子结合位点及启动子区甲基化状况。结果表明,CLIC5基因启动子缺乏TATA盒,但含有典型的GC盒及其他潜在转录因子结合位点;双荧光素酶报告基因活性分析表明,CLIC5基因-329～+1、-624～+1、-917～+1和-2 230～+1区域的启动子活性较高,其中-624～+1区域的启动子活性最强。进一步分析表明,启动子区-624～-329存在负性调控元件,预测存在转录因子结合位点RXR heterodimer binding sites与GC-Box factorsSp1/GC,-420～-283范围内存在CpG岛位点。  相似文献   

香蕉凝集素基因启动子5′远端的分离分析及鉴定     

张建斌  金志强  王纪  刘菊华  贾彩红  徐碧玉 《现代农业科技》2012,(21):96-98,100

在已知香蕉果实特异表达凝集素(BanLec)启动子670 bp序列的基础上,利用染色体步移方法,克隆获得该段序列5′端上游远端序列330 bp,从而得到该启动子1 000 bp序列。通过Promoter predictions、Plant CARE软件分析表明,新获得的BanLec启动子5′端330 bp序列中具有更多组织特异性表达调控元件。构建总长度为1 000 bp的BanLec启动子表达载体,以35 S启动子和原有670 bp长度BanLec启动子表达载体为对照,利用基因枪转化香蕉根、叶和果实,测量GUS基因和GFP基因瞬时表达,结果证明长度为1 000 bp BanLec启动子为果实特异表达启动子,启动活性高于原有的670 bp BanLec启动子和35S启动子。  相似文献   

水稻启动子OsN1p的克隆与功能分析     

吴智丹  王光  郭玲  李林  刘凤权  邵敏 《南京农业大学学报》2012,35(2):10-14

将OsN1基因上游881 bp启动子(OsN1p)序列取代pBI121中gus基因上游的35S启动子,构建植物表达载体pBIN1p,经农杆菌介导转化水稻品种‘日本晴’,获得转基因植株。GUS组织化学染色结果表明,由该启动子驱动的gus基因能在愈伤组织中较低水平地表达;稻瘟病菌接种转基因植株24 h后,GUS活性为未接种前的4.2倍;5 mmol.L-1水杨酸(SA)和0.5 mmol.L-1茉莉酸甲酯(MeJA)分别喷施转基因植株叶面6 h后,GUS活性分别为处理前的5.9和2.4倍。表明,OsN1p启动子具有启动活性,同时明显具有受稻瘟病菌、SA和MeJA诱导表达的特性。  相似文献   

鸡肝脏型脂肪酸结合蛋白基因启动子活性分析     

高广亮  冷丽  张会丰  贺綦  李辉  王启贵 《兽医大学学报》2012,(9):1344-1348

PCR扩增鸡L-FABP基因5′侧翼区约2kb的DNA片段,进行克隆并测序,构建了鸡L-FABP基因报告基因系列缺失载体,瞬时转染进入人肝癌细胞系,利用双荧光素酶报告基因系统测定了荧光素酶活性。在线分析软件发现鸡L-FABP基因启动子区存在HNF-1、SREBP-1、AP-1、C/EBP、Oct-1、TATA、CCAAT、GATA-1等调控元件,没有发现CpG岛。报告基因结果表明鸡L-FABP基因启动子-2 076bp/-20bp区域具有最强的启动子活性,-522bp/-20bp区域启动子活性最弱;C/EBPα可以显著的抑制鸡L-FABP基因的表达,这些结果为深入研究鸡L-FABP的表达调控机制奠定了基础。  相似文献   

发酵促进型青贮添加剂的研究进展及其应用现状   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭盼  单贵莲  薛世明  杨国荣 《草业与畜牧》2012,(7)

青贮添加剂是提高青贮饲料品质的重要措施之一。近几十年来,人们对于添加剂在牧草青贮技术中的应用进行了大量的研究,而且取得了重要进展,并成为目前青贮技术发展的重点,其中发酵促进型添加剂是近年来研究的热点。本文对乳酸茵、纤维素酶、绿汁发酵液和糖类等发酵促进型牧草青贮添加剂的研究进行了综述,阐述了研究的现状,指出了存在的问题,并对未来的趋势进行了展望。  相似文献   

表达抗流感病毒基因重组慢病毒滴度测定及感染效率分析     

胡卫杰  刘晓敏 《动物医学进展》2012,(6):1-5

分别将靶向禽流感病毒(AIV)多靶点siRNA和鸡Mx基因克隆到p201慢病毒表达载体,采用鸡β-actin启动子替换p201慢病毒载体CMV启动子构建重组慢病毒载体p201-β-Mx-siRNA。并将其与辅助包装质粒共转染293T细胞,72h后收集细胞上清,实时荧光定量PCR测定重组慢病毒(rLV-MX-siR-NA)与对照组重组慢病毒(rLV-GFP)CT值,两者比较确定rLV-MX-siRNA滴度。rLV-Mx-siRNA以MOI=4感染猪胎儿成纤维细胞(PEF)并传代培养,提取后代细胞RNA检测外源基因转录以及应用间接免疫荧光试验检测鸡Mx蛋白的表达。结果表明,rLV-Mx-siRNA浓缩后滴度与已知滴度的rLV-GFP相等,为2×108 TU/mL,感染PEF效率>95%。感染rLV-Mx-siRNA的细胞传至第5代和第10代检测到外源基因转录以及鸡Mx蛋白的表达。表达鸡Mx基因和靶向AIV多靶点siRNA重组慢病毒滴度的测定与感染效率的分析,其结果为研究抗AIV转基因猪及其抗AIV的体外评价奠定了基础。  相似文献   

新牧1号苜蓿两个抗逆相关基因启动子的克隆及分析     

杨云尧  任燕萍  苏豫梅  陈全家  张博  张桦 《草业科学》2012,29(12):1887-1893

采用实时荧光定量PCR分析了新牧1号苜蓿（Medicago varia Xinmu 1）MvNHX1和MvDREB1基因在盐胁迫下的表达情况。此外,根据已获得的MvDREB1和MvNHX1基因序列设计特异引物,并以新牧1号苜蓿的基因组DNA为模板,克隆得到了这两个基因的启动子。利用生物信息学方法,分析这两个基因启动子的类型和结构,结果表明,MvNHX1和MvDREB1基因的启动子序列中均含有通用启动元件和上游调控元件,如CAAT框、TATA框、光响应元件、低温响应元件等,但部分响应元件的种类和数量不同。通过对两个基因启动子的克隆、分析及比较为进一步研究这两个基因的表达调控机制奠定了基础。  相似文献   

小麦类发芽素蛋白3启动子序列(登录号:AY864922)     

陈军营  温付喜  陈新建  程西永  许海霞 《分子植物育种》2005,3(6):901-902

In germinating wheat embryos, gl-OXO accumulation is localized in cell wall. It has been confirmed that this enzyme locally provides H2O2 to catalyze peroxide-mediated cross-linking of cell wall components in terminal cellular differentiation and plays an important role in enabling cells to retain their meristematic and organogenic capacity. Using tail-PCR and DNA sequencing techniques, we isolated Germin-like Protein 3 promoter sequence（l 654 bp）, from common wheat cultivar （yumai 18） genome. No GGGCGGG sequence exiting in promoter implies that germin-like protein 3 is not “house-keeping” protein. The presence of TGTCTC, an auxin response element and localizing at upstream -258, indicates that this promoter is auxin-inducible. The TATA box situates in upstream -27- -32 and 5＇-UTR consists of 95 bp.  相似文献   

棉花GhMADS29启动子克隆及表达分析   总被引：3，自引：2，他引：1  

张文香  范术丽  宋美珍  庞朝友  魏恒玲  喻树迅 《棉花学报》2013,25(4):309-315

以实验室克隆的GhMADS29(GeneBank登录号:JQ682642)基因的cDNA序列Blast搜索雷蒙德氏棉的基因组序列,根据Blast结果设计引物,克隆到起始密码子上游-19位开始的1316 bp的序列;利用PlantCARE启动子在线分析软件预测其含有核心启动子元件TATA-box和CAAT-box,并含有光、温、赤霉素、水杨酸、生长素等的响应元件.通过替换pBI121载体上的CaMV35S启动子构建了GhMADS29启动子与GUS基因的融合表达载体并转化拟南芥,组织化学染色分析发现其在14d幼苗的根和叶中都有表达,在萼片、花瓣、雌蕊、果瓣中也表达,而在雄蕊和种子中不表达.综上所述,我们推测GhMADS29可能与各种开花途径有关,与萼片、花瓣、雌蕊等花器官的发育有关,还可能与果实是否开裂有关.  相似文献   

以J亚型禽白血病病毒LTR为启动子的真核表达载体构建     

王蓓  陈宗艳  李传峰  孟春春  王桂军  刘光清 《中国预防兽医学报》2013,35(10)

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