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991.
柑橘钙调蛋白cDNA的克隆及序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
以温州蜜柑(Citrus unshiu Marc. ) 幼果cDNA第1链为模板, 参照大麦钙调蛋白基因序列(Accession No. M27303) 合成5p端和3p端引物, 以PCR的方法扩增得到柑橘钙调蛋白cDNA, 将其克隆到PMD182T载体上并进行测序。序列分析表明, 柑橘钙调蛋白cDNA全长453 bp, 共编码148个氨基酸, 与大麦和大豆钙调蛋白基因的同源性均高达83%以上, 所编码氨基酸序列同源性达97%以上。以该cDNA作探针进行点杂交, 得到良好的杂交信号。 相似文献
992.
利用已报道果胶裂解酶基因的保守序列设计简并引物,进行RT-PCR,得到1个大约1300bp的香蕉果胶裂解酶基因cDNA片段,命名为MA-pl。DNA序列分析表明:MA-pl片段全长1277bp,包含1个882bp的开放读码框(ORF),编码294个氨基酸;其具有所有果胶裂解酶共有的保守区域:钙协调部位(Asp72,Asp74,Asp96,andAsp100)、酶活性位点(Arg152,Pro154,Arg157)及3个重要的结构域(motifI:WVDH,motifII:DGLVDAVMGSTAITVSNNYF,motifIII:LYQRMPRCRHGYFHVVWNDY);MA-pl氨基酸序列与草莓-1、葡萄、草莓-2、拟南芥、苹果、香蕉(banana-1)的相似性分别为85.8%、74.2%、79.7%、78.6%、72.4%和71.4%。 相似文献
993.
猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1a株基因组全长cDNA克隆的构建 总被引：3，自引：0，他引：3
994.
995.
996.
中国猪瘟C-株(脾淋毒)全长cDNA的分子克隆 总被引：9，自引：1，他引：8
应用RT-PCR、Nested PCR和Half-nested PCR技术从实验感染兔脾组织的总RNA中得到了覆盖猪瘟病毒(CSFV)C-株全基因组的7个cDNA重叠片段，分别克隆于pMD18—T或pGEM-T Easy载体后进行测序。运用T-A克隆和多片段一步连接法，将cDNA重叠片段F1、F2、F3、F4与F5、F6、F7分别克隆到pGEM-5Zf( )载体后，得到两个半长cDNA亚克隆重组质粒pGEM-5Zf( )／F1-4和pGEM-5Zf( )／F5-7。再将两个半长cDNA重叠片段连接并克隆到pGEM-5Zf( )载体，构建出了CSFVC-株全长cDNA重组质粒pGEM-5Zf( )／F1-7。全长cDNA的成功构建为进一步研究CSFV分子生物学提供了良好的工具。 相似文献
997.
香石竹环斑病毒的分子检测 总被引：2，自引：0，他引：2
试验具体研究了两类不同性质的ｃＤＮＡ探针对香石竹环斑病毒的检测效果。毒源由中国农业大学植物病毒室提供，繁殖于苋色藜Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍａｍａｒａｎｔｉｃｏｌｏｒ上，提纯该病毒，然后抽提其核酸ＲＮＡ，将ＲＮＡ多聚腺苷化后，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物，反转录合成ｃＤＮＡ，补平后与载体连接，转化大肠杆菌，获得阳性克隆，用３２Ｐ和光敏生物素分别标记ｃＤＮＡ制作探针，与ＣＲＳＶ及其ＲＮＡ进行点杂交，结果表明，两类不同性质的探针在检测ＲＮＡ水平上具有相同的灵敏度，其检测极限均达到１ｎｇ／ｍｌ，并对二类探针进行了比较。 相似文献
998.
Berenice L. Sanz Ressel Adriana R. Massone Claudio G. Barbeito 《Veterinary and comparative oncology》2019,17(4):522-527
Cutaneous papillomas (CP) are one of the most common skin neoplasms in dogs. Different murine models have shown that persistent activation of the phosphatidylinositol 3‐kinase/Akt/mammalian target of rapamycin (PI3K/Akt/mTOR) pathway has a central role in the development and progression of CP. The purpose of this study were to evaluate the immunohistochemical expression pattern of two key molecules involved in the PI3K/Akt/mTOR signalling pathway, pAktSer473, and pS6Ser235/236, on 36 canine specimens of CP using a tissue microarray. The results show that the PI3K/Akt/mTOR signalling pathway is persistently activated in CP of dogs, pointing to this pathway as a potential therapeutic target. 相似文献
999.
为建立运用多重PCR和基因芯片技术同时检测5种猪繁殖障碍性病毒病的方法。本研究根据GenBank中登录的猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪日本乙型脑炎病毒(JEV)及猪圆环病毒2型(PCV2)的基因序列设计特异性引物与探针,制备相应的寡核苷酸芯片,检测了5种猪繁殖障碍性疾病病毒的标准毒株,并对16份临床样品进行检测。通过多重PCR扩增出带有荧光标记的5种病毒的特异性基因片段,并与固定有特异性探针的基因芯片杂交。结果显示,本研究建立的多重PCR结合基因芯片检测方法特异性强、稳定性好,灵敏度可达10~2拷贝/μL。16份临床样品检测结果显示阳性率达87.5%(14/16)。以上结果表明该方法特异性好、灵敏度高,可高效检测以上5种病毒,为其临床诊断及流行病学调查提供了有效的检测方法。 相似文献
1000.
区分禽流感病毒亚型诊断基因芯片的构建 总被引：1，自引：0，他引：1
制备了可同时区分AIVH5、H7、H9血凝素亚型及N1、N2神经氨酸酶亚型的基因诊断芯片。试验以重组质粒为模板,进行PCR扩增,然后用异丙醇沉淀法进行纯化,制备探针及内参基因。将探针及内参基因用点样缓冲液稀释到0.3μg/μL后用芯片点样仪将其点制到醛基化基片上,样点中心间距450μm,样点直径220μm。将点好的基片在室温干燥24h以上,后经65℃再水合10s、80℃干燥、65mj紫外线交联照射25min后,再用封闭液封闭,95℃变性处理,成功构建了能区分禽流感血凝素H5,H7,H9亚型及神经氨酸酶N1,N2亚型的检测基因芯片。在PCR扩增中标记待检样品,对制备的检测芯片进行质量检验,结果表明,制备的区分禽流感病毒亚型基因芯片可区分AIV部分亚型。 相似文献