利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株     

檀克勤  马现永  崔艺燕  田志梅  邓盾 《中国畜牧兽医》2020,47(3):666-675

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）K88的热不稳定性肠毒素（heat-labile toxin，LT）基因进行无痕敲除并获得K88 LT^-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列，并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段；将供体片段转化至ETEC K88，同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统，对LT基因进行敲除；通过PCR验证获得了K88 LT^-缺陷菌株，并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示，λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段，CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除，最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明，K88 LT^-缺陷菌株的溶血能力丧失，并且生长速度比野生型菌株减缓，LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT^-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。  相似文献   

基于碱/尿素溶解体系的自黏结颗粒活性炭的制备     

杨旋  何晨露  熊永志  林冠烽  陈燕丹  黄彪 《林产化学与工业》2020,40(3):130-134

  相似文献   

反转录病毒载体介导的EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤纽胞中的表达     

丛艳昭  任大勇  李昌  李林溪  杜寿文  王卓越  王婧  胡博  金宁一 《黑龙江畜牧兽医》2011,(3):40-42

为了构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的反转录病毒载体,并观察EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达情况.试验将增强型绿色免疫荧光基因片段定向插入反转录病毒载体pFB-neo,获得重组反转录病毒质粒pFB-NE,利用三质粒共转染系统,将含有目的基因的重组反转录病毒质粒pFB-NE以及含有辅助病毒...  相似文献   

基于XML的科研管理信息系统研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

余少云 《江西农业学报》2011,23(2)

该文在分析农业科研单位科研管理现状的基础上,提出了一种基于XML技术的科研管理信息系统,并进一步介绍了系统采用的B/C/S结构模型,阐述了系统的功能模块和系统实现的部分关键技术。得出该系统能降低对客户端的要求,减少系统的通讯量,使得数据的呈现、交互更加容易,从而提高了科研管理工作的效率。  相似文献   

茶树咖啡碱合成酶CRISPR/Cas9基因组编辑载体的构建   总被引：3，自引：0，他引：3  

唐雨薇  刘丽萍  王若娴  陈宇宏  刘仲华  刘硕谦 《茶叶科学》2016,(4):414-426

CRISPR/Cas9技术是一门新兴的基因组定点编辑技术,具有操作简单、高效的优点,可轻松实现对目标基因的敲除、替换和定点突变等操作。该技术刚诞生,就受到了全球生命科学领域研究者的关注,不到3年的时间就已经成功应用于多种动、植物当中。然而CRISPR/Cas9技术在茶树中的应用面临载体构建问题,本文以茶树咖啡碱合成酶为例,联合采用常规PCR、Overlapping PCR和Golden Gate Cloning技术,构建了包含茶树咖啡碱合成酶双靶点的CRISPR/Cas9基因编辑载体,为CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术在茶树中的应用奠定了坚实基础。  相似文献   

小麦面粉中赭曲霉毒素A的CdSe/ZnS荧光量子点免疫探针检测     

齐佳  张文刚  赵静静  史茂敏  李忠宏 《西北农业学报》2015,24(4):56-51

构建一种基于荧光量子点免疫探针的小麦面粉中赭曲霉毒素A(OTA)的检测方法。以EDC为活化剂将CdSe/ZnS半导体荧光量子点与OTA单克隆抗体偶联,制备OTA检测探针并评价其检测性能。结果表明:制备的检测探针在3d保存期内具有良好的稳定性。当OTA质量浓度为0.1~0.9μg/L时,检测探针的荧光强度与OTA质量浓度呈线性关系,其相关系数为0.996 3,检出限为0.017 7μg/L。与国标法对照的结果说明,此方法具有可行性。小麦面粉中的加标回收试验结果显示,OTA的回收率为96.0%~102.7%,相对标准偏差不超过4.1%,说明准确性良好。可见,OTA的CdSe/ZnS荧光量子点免疫探针检测方法操作简单、准确度高、结果稳定,有望应用于小麦面粉中OTA的检测。  相似文献   

超高效液相色谱-质谱/质谱法同时测定蔬菜中7种磺胺的残留量     

黄志波  王纪阳  程雪梅  梁志刚  何健安 《热带作物学报》2016,36(6):76-80

为建立超高效液相色谱-质谱/质谱法(UPLC-MS/MS)同时测定蔬菜中7种磺胺残留量的方法。样品用1%乙酸乙腈提取，以C18色谱柱分离待测物，采用多反应监测(MRM)离子扫描模式，外标法进行定量，线性良好，相关系数均大于0.999。结果显示：7种磺胺的检出限为0.000 4～0.000 6 mg/kg，样品添加回收率为67.5%～94.1%，相对标准偏差均少于5.3%(n＝6)。该方法简单快捷、定量准确，可满足多种蔬菜中7种磺胺的残留检测要求。  相似文献   

基于DO-178的机载软件结构覆盖分析     

《科技视界》2016,(15)

随着民用飞机机载软件的应用越来越广泛,软件复杂程度越来越高,按照DO-178设计保证指南进行机载软件开发逐渐成为行业规范。机载软件测试是验证过程的关键,对测试结果的覆盖分析中的结构覆盖,DO-178仅提出了相关目标的抽象要求,在工程实际验证软件过程中不便理解和实现。本文结合适机载软件工程实践,浅析对测试覆盖分析过程的理解。  相似文献   

2012年春季塔克拉玛干沙漠腹地沙尘颗粒的组成研究     

张延伟  唐湘玲  陆辉  葛全胜  王雯雯  魏文寿 《干旱区资源与环境》2017,31(11):94-99

为研究塔克拉玛干沙漠腹地沙尘颗粒的微观形貌及其矿物、元素组成,应用扫描电镜能谱技术(SEM/EDX)对塔克拉玛干沙漠腹地塔中观测站2012年5月采集的PM10样品进行了识别和分析。统计622个单颗粒高分辨电镜图像及能谱的结果表明:塔克拉玛干沙漠大气PM10主要来源于地壳矿物。其中,矿物组成主要是石英、粘土矿物、方解石、岩盐,特别是岩盐含量高达14.5%,石英、方解石、石膏、岩盐单体矿物相对含量较高,但大部分都以矿物集合体的形式存在,与其它人为源颗粒物的混合主要是外混合。不同天气类型下,其矿物组成差异明显,重矿物(岩盐等)主要来源于强风就地扬起或携带的较粗颗粒。  相似文献   

瓜菜类病原细菌耐药外排泵RND研究进展     

《中国瓜菜》2016,(7):1-8

近年来,瓜菜类作物病原细菌的耐药性日益增强,增加了瓜菜相关病害防治的难度。存在于瓜菜作物病原细菌中的外排泵耐药结节分化家族(RND)与细菌的耐药性及细菌/植物互作关系密切。笔者根据有关文献综述了RND外排泵的结构与功能、细菌/植物互作过程中外排泵的作用以及外排泵抑制剂(EPIS)的相关研究进展,为瓜类和蔬菜类作物病原细菌耐药性的研究提供参考。  相似文献