抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库的构建及鉴定     

温凯  沈建忠  孟辉  吴聪明  王战辉  张素霞 《中国农业大学学报》2011,16(2):118-124

本研究以兽药恩诺沙星为对象,构建噬菌体抗体库,为低成本、快速制备目的抗体提供新的途径。以恩诺沙星-鸡卵清蛋白(ENR-OVA)为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫,取其脾细胞提取总RNA,并分别扩增全套抗体轻、重链基因,通过重叠延伸PCR技术,以编码柔性多肽(Gly3Ser)4的基因为接头,将轻重链基因组装为完整的scFv基因,将之克隆入pCANTAB5E载体,转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13KO7对其进行超感染,构建噬菌体抗体库并进行富集、筛选和鉴定;构建了库容量约为2.2×106的抗恩诺沙星噬菌体单链抗体库,并筛选出26株阳性克隆,为表达单链抗体、建立免疫检测方法奠定基础。  相似文献   

泰拉霉素和红霉素对一氧化氮和前列腺素E2合成抑制作用的比较     

周磊  颜其贵  吴聪明 《中国农业科学》2010,43(9):1939-1947

目的以红霉素为对照,探讨泰拉霉素是否具有抗炎作用。方法利用细菌脂多糖(LPS)诱导猪外周血单核细胞(PBMC)过度表达致炎因子而构建的体外炎症模型,采用SYBR Green法实时荧光定量PCR技术,在分子水平研究了不同浓度泰拉霉素和红霉素对一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)合成的影响。结果20μg·mL-1和10μg·mL-1浓度的泰拉霉素与20、10和5μg·mL-1浓度的红霉素均能显著抑制猪PBMC细胞合成NO和PGE2,并抑制诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)基因的转录;而5μg·mL-1的泰拉霉素无明显的这种调节作用。结论泰拉霉素和红霉素能在转录和翻译水平通过调节致炎因子的合成而发挥抗炎作用。  相似文献   

高效液相色谱法研究牛乳源耐药金黄色葡萄球菌对环丙沙星的蓄积作用     

曹兴元  白如念  罗应武  吴聪明 《中国兽医杂志》2011,47(8)

近年来研究发现,金黄色葡萄球菌的NorA、NorB和NorC外排泵蛋白介导对氟喹诺酮类药物的耐药.本文采用临床分离的牛乳源环丙沙星耐药的金黄色葡萄球菌,通过建立的高效液相色谱法(HPLC-FLD),测定了临床分离的耐药、敏感菌及金黄色葡萄球菌标准菌株ATCC 29213对环丙沙星积聚量的差异,为临床检测通过外排泵介导的氟喹诺酮类药物耐药的金黄色葡萄球菌提供了方法学上的依据.  相似文献   

鸡源粪肠球菌生物膜形成能力与明胶酶E毒力基因相关性研究     

刘利强  杜娟  刘彦威  刘娜  吴聪明 《黑龙江畜牧兽医》2019,(10)

为了探讨粪肠球菌明胶酶E(gelE)基因对粪肠球菌生物膜形成能力的影响,试验取鸡源粪肠球菌50株,设计特异性引物,通过PCR扩增粪肠球菌毒力基因gelE;利用96微孔板结晶紫染色法在595 nm波长下测定其OD值,对gelE基因和生物膜进行相关性分析。结果表明:有78%(39/50)的粪肠球菌呈生物膜阳性,22%(11/50)的粪肠球菌呈生物膜阴性;82%(41/50)的粪肠球菌呈gelE基因阳性,18%(9/50)的粪肠球菌呈gelE基因阴性,粪肠球菌毒力基因gelE和生物膜具有一致性。说明粪肠球菌gelE基因能够调控生物膜的形成。  相似文献   

奶牛乳房炎分离大肠杆菌的耐药性及脉冲场凝胶电泳分型研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

余婷  安慧慧  吴聪明  王桂琴 《中国兽医杂志》2013,49(9)

为了解宁夏地区奶牛乳房炎分离大肠杆菌的耐药表型及同源性特征,本试验采用肉汤微量稀释法测定了16种抗菌药物对66株奶牛乳房炎分离大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC),同时进行了脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型研究.结果显示,66株大肠杆菌对氨苄西林、链霉素、四环素、多西环素、头孢菌素类抗生素和磺胺甲氧嘧啶的耐药率都比较高,而对阿米卡星、卡那霉素、多粘菌素、氟苯尼考及喹诺酮类药物则比较敏感.分离菌株最多耐受15种药,且主要以8耐、5耐和7耐为主.66株大肠杆菌中有54株能被PFGE分型,可分为A-a 27个型.分型结果显示,宁夏地区的奶牛场分离的菌株之间既存在垂直传播也存在水平传播,同一养殖场不同奶牛之间和不同养殖场的奶牛之间存在多重耐药大肠杆菌的克隆传播.  相似文献   

沙门氏杆菌快速检测方法研究进展     

梁德媚  张艳芳  曾于洋  王政  吴聪明  江海洋 《黑龙江畜牧兽医》2019,(9)

作为一种重要的人畜共患病病原,沙门氏杆菌不仅会影响畜牧业的发展,还会给人类健康带来严重危害,因此对沙门氏杆菌的检测是非常必要的。传统的检测方法耗时费力,为了保障食品安全和人类健康,发展沙门氏杆菌的快速检测方法受到世界各国的日益关注。文章综述了分子生物学方法、免疫学方法、代谢技术检测法、生物传感器和仪器分析技术等几类常见快速检测方法的研究进展,为沙门氏杆菌快速检测技术的开发和应用提供参考。  相似文献   

DHPLC对环丙沙星诱导沙门菌靶基因和调控基因的突变筛选     

李琳  王玉平  沈建忠  吴永宁  吴聪明 《中国兽医学报》2009,29(10)

选择11株动物源沙门菌(包括6种血清型)进行环丙沙星耐药性体外诱导.应用变性高效液相色谱(DH-PLC)对11株诱导株不同诱导阶段的靶基因gyrA、gyrB、parC、parE的喹诺酮耐药决定区(QRDR)和mar操纵子基因marO、marR、marA、marB、soxR、soxS及外排泵acrAB的抑制基因acrR(包括启动子区)进行基因突变筛选,并对筛选出的突变基因进行测序确证.结果显示,6种血清型沙门菌在诱导过程中,GyrA突变集中在S83F和/或D87G,marR、soxR、acrR均出现新突变,提示在环丙沙星诱导压力下,因靶基因和调控基因突变使耐药性不断增加.  相似文献   

重组溶葡萄球菌酶对大鼠的毒性试验     

张继恩  史为民  吴聪明  沈建忠  黄青山 《畜牧与兽医》2009,41(4)

观察重组溶葡萄球菌酶经口给药对大鼠的急性毒性和长期毒性。急性毒性试验中,大鼠以每千克体重5 000 mg的剂量口服重组溶葡萄球菌,观察中毒症状并测定LD50。长期毒性试验中,大鼠以每天每千克体重口服72,360,1 800 mg重组溶葡萄球菌酶,连续给药180 d,观察给药后45 d、90 d、135 d和180 d时大鼠的生长发育、血液学、血液生化学、组织病理变化。结果表明,重组溶葡萄球菌酶口服对大鼠的LD50大于5 000 mg/kg,长期毒性试验未见明显毒性反应。说明重组溶葡萄球菌酶在规定剂量下使用是安全可靠的。  相似文献   

牛皮下注射爱普菌素注射剂后组织残留休药期的建立     

江海洋  丁双阳  刘金凤  赵思俊  何继红  吴聪明  李建成  沈建忠 《畜牧兽医学报》2009,40(3)

建立牛肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中爱普菌素残留的高效液相色谱荧光检测方法（HPLC-FLD）,并用统计学方法计算牛皮下注射爱普菌素后组织残留的休药期。牛组织样品经乙腈提取,过碱性SPE柱。组织样品添加浓度为2～100 ng·g^-1,平均回收率为70.5%～91.2%,变异系数为2.3%～11.5%;方法检测限和定量限分别为1和2 ng·g^-1。18头牛颈部皮下一次性注射爱普菌素注射液（1%）,注射剂量为200μg.kg-1体质量,分别在给药后第1、3、7、14、21、28天各屠宰3头取样,经HPLC-FLD分析。结果表明,皮下单次注射给药后,肌肉中药物残留量（2.1～9.3 ng·g^-1）低于美国规定的残留限量（10 ng·g^-1）;肝脏中药物残留量（29.8～625.1 ng·g^-1）低于美国、欧盟和CAC规定的残留限量（分别为4 800、1 500和2 000 ng·g^-1）;肾脏和脂肪中药物残留量（4.1～112.5ng·g^-1和2.1～96.4 ng·g^-1）都低于欧盟和CAC规定的残留限量（300和250 ng·g^-1）。采用欧盟官方推荐方法对残留浓度-时间数据统计分析,牛肌肉、肝脏、肾脏、脂肪休药期均为0 d。  相似文献   

奶牛子宫内膜炎大肠杆菌的分离血清型鉴定及其耐药性测定   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵红霞  李培锋  吴聪明  樊宏亮  娜仁高娃  沈建忠 《中国兽医杂志》2009,45(4)

子宫内膜炎是奶牛常发的一种生殖系统疾病,不仅影响机体正常的生理功能,而且会导致患牛长期不孕,有的甚至造成终生不孕[1].据调查,我国奶牛子宫内膜炎的平均发病率约为20%,在奶牛不孕症中,由子宫内膜炎所致的不孕奶牛约占60.1%～92.0%[2].奶牛子宫内膜炎主要由分娩或产后子宫感染病原微生物引起,其中以大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌等感染最为常见.临床上多使用抗菌药物治疗奶牛子宫内膜炎,随着病原菌耐药性的不断加重,用药剂量随之增加,这不仅提高了治疗成本,而且增加了乳产品中药物残留的风险.本文对内蒙古地区引起奶牛子宫内膜炎的大肠杆菌进行了分离、血清型鉴定,并测定其对24种抗菌药物的敏感性,旨在探明内蒙古地区奶牛子宫内膜炎大肠杆菌的血清型及耐药水平,为临床防治该病提供科学依据.  相似文献