袋鼠源铜绿假单胞菌分离鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵耘  杜昕波  李伟杰  陈敏  康凯  陈永林 《中国预防兽医学报》2010,(2)

为确定袋鼠死亡原因,本研究采用Biolog快速鉴定系统、16SrRNA序列分析以及传统细菌鉴定方法对2株分离自北京动物园袋鼠肺脏的菌株进行形态学、培养特性、生化特性、小鼠致病性、系统发育分析等生物特性的鉴定和分析,结果表明2菌株均为铜绿假单胞菌,对昆明小鼠有强致病性。系统发育分析结果表明2株袋鼠源铜绿假单胞菌16SrRNA序列与ATCC10145模式株差异很小,同源性分别为99.9%和100%,并且位于系统发育树的同一分支。  相似文献   

猪源粪肠球菌的BIOLOG系统鉴定及其生物学特性     

薛青红刘燕  杜昕波 《中国兽医科技》2006,36(11):876-879

利用BIOLOG自动微生物分析系统和传统鉴定方法对1株猪源粪肠球菌进行了鉴定，并对其生物学特性进行了系统研究。结果显示，2种鉴定方法的结果一致，与传统的鉴定方法相比，BIOLOG自动微生物分析系统更快捷、方便、高效，可快速为临床诊断和用药提供依据。生物学试验表明，本株粪肠球菌在液体和固体培养基内均可有效抑制大肠杆菌生长，从而维持肠道平衡；另外，该菌株可使培养液的pH值降低至3．69。上述结果为该菌株的进一步开发利用提供了理论支持。  相似文献   

利用菌落多重PCR对传染性胸膜肺炎放线杆菌进行血清分型     

赵耘  杜昕波  李伟杰  陈敏  康凯 《动物医学进展》2010,31(1):9-12

参照文献报道的传染性胸膜肺炎放线杆菌的特异基因合成5对特异引物,建立传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的菌落多重PCR方法,结果为10株传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对41株传染性胸膜肺炎放线杆菌分离菌株进行血清型分型,结果所有菌株均扩增出了相应的特异片段,其中6株为1型,5株为7型,1株为5型,29株为9型。  相似文献   

产毒素多杀性巴氏杆菌菌落双重PCR检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李伟杰  赵耘  杜昕波  康凯  陈敏 《中国预防兽医学报》2010,32(4)

为建立快速特异的PCR方法以及同时检测并区分产毒素与非产毒素多杀性巴氏杆菌,本研究根据GenBank登录的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和toxA毒素基因序列,设计合成了2对特异引物。特异性试验表明产毒素多杀性巴氏杆菌C51-6扩增出了460bp和1854bp的2条目的片段,而不产毒素多杀性巴氏杆菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、支气管败血波氏杆菌、副猪嗜血杆菌和鸡白痢沙门菌的扩增均为阴性;敏感性试验表明该PCR方法能从含450CFU的菌液中扩增出相应的目的片段。同时用豚鼠皮肤坏死试验和小鼠致死试验对该PCR方法进行了验证。  相似文献   

菌落聚合酶链反应检测支气管败血波氏杆菌   总被引：1，自引：1，他引：0  

李伟杰  赵耘  杜昕波  康凯  陈敏  陈永林 《中国农学通报》2010,26(1):9-11

根据支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica) 鞭毛蛋白基因的上游序列设计1对引物Fla1和Fla2,采用菌落PCR方法扩增目的基因片段来检测支气管败血波氏杆菌。利用该方法成功的从8株支气管败血波氏杆菌中扩增出237 bp左右的特异性目的片段。特异性试验表明,该方法对大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、猪链球菌和副猪嗜血杆菌均无交叉性反应。灵敏性试验表明,将单个菌落稀释105倍利用此菌落PCR仍能扩增到相应的目的片段。结果表明建立的菌落PCR方法对支气管败血波氏杆菌的检测敏感性高、特异性强,可用于Bb感染的诊断和流行病学调查。  相似文献   

利用菌落多重PCR方法进行不同动物来源多杀性巴氏杆菌鉴定的研究     

赵耘  杜昕波  李伟杰  陈敏  康凯 《中国兽医杂志》2010,46(8)

参照文献报道的多杀性巴氏杆菌种和荚膜型的特异基因合成6对特异引物,建立多杀性巴氏杆菌鉴定的菌落多重PCR方法,结果5株多杀性巴氏杆菌荚膜型参考菌株均扩增出了相应的预期片段,而支气管败血波氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠埃希菌的扩增均为阴性。利用此多重PCR方法对48株不同动物来源的多杀性巴氏杆菌进行了鉴定和荚膜型分型,同时与间接血凝试验以及Biolog细菌快速鉴定系统进行比对,结果表明,所建立的多重PCR方法与间接血凝试验、Biolog细菌快速鉴定系统的符合率均达到100%。  相似文献   

红斑丹毒丝菌SpaA抗原基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测   总被引：1，自引：0，他引：1  

李伟杰  赵耘  康凯  岂晓鑫  杜昕波  陈敏 《中国兽医学报》2011,31(11)

参照红斑丹毒丝菌表面抗原A（SpaA）基因的核苷酸序列合成1对引物,对我国生产用红斑丹毒丝菌CVCC43005的SpaA全基因进行了PCR扩增,扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果表明,SpaA基因全长1881bp,含有1个开放性阅读框,编码626个氨基酸。与已提交的红斑丹毒丝菌血清型1a、1b、2a、2b、5、8、9、12、15、16、17、N型的氨基酸同源性为97．5％～100％,血清型4、6、11、19、21的氨基酸同源性为52．8％～55．2％。与已提交的丹毒丝菌血清型18的氨基酸同源性为57．5％～58．0％。采用ChouFasman和Karplus—Schulz方案预测蛋白质的二级结构和柔性区域;运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,按Jame—son-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性。对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N端的59～64、85～91、174～186、193～201、212～215、221～231、266～275、278～288、29l～308、314～327、329～349、356～376、403～456、508～516、528～537、568～576和607～626。  相似文献   

菌种保藏工作中的细菌鉴定     

杜昕波 《中国兽药杂志》2009,43(3):50-52

综述了在菌种保藏工作中目前行业内使用的各种细菌鉴定方法,包括传统方法、仪器的自动化鉴定以及分子生物学方法,并简述了各种方法的原理和优缺点,以期能为行业同仁更好开展菌种保藏、鉴定工作提供帮助。  相似文献   

菌落多重PCR鉴定不同荚膜血清型的多杀性巴氏杆菌     

李伟杰  赵耘  杜昕波  康凯  陈敏 《动物医学进展》2010,31(1):6-9

参照文献报道的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和荚膜生物合成位点hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJf、cbD基因的序列合成了6对特异性引物,建立了多杀性巴氏杆菌种和型的菌落多重PCR方法。结果表明,本所保藏的A、B、D、E、F各型多杀性巴氏杆菌均扩增出了相应的预期片段,PCR结果与Biolog鉴定结果和Carter氏间接血球凝集试验结果相一致;而支气管败血波氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠埃希菌、猪链球菌和粪肠球菌的扩增均为阴性。  相似文献