禽流感病毒感染与疫苗免疫鉴别诊断试纸条的研制及应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

胡思顺  郑兴华  蔡开妹  彭伏虎  张文泽  李自力  肖运才  刘梅  毕丁仁 《中国农业科学》2009,42(2):694-700

 【目的】结合胶体金免疫层析技术建立一种适合养鸡业基层生产人员使用的便捷的快速诊断禽流感病毒感染鸡群的方法。【方法】将含禽流感病毒非结构基因ns1的表达载体KG-NS1转化入BL21（DE3）感受态细胞,筛选阳性克隆进行诱导表达,表达产物用GST亲和层析柱进行纯化和Western-blot分析;以NS1重组蛋白为诊断抗原,抗鸡IgFc的单抗标记的胶体金为示踪物,结合免疫层析技术,组装禽流感病毒NS1抗体的免疫胶体金鉴别诊断试纸条,评价其灵敏度和特异性,并对试验感染和临床采集的血样进行检测。【结果】NS1重组蛋白分子量约为52 kD,具有免疫学活性。在25 min内用肉眼观察到禽流感病毒感染鸡血清和NS1蛋白免疫鸡血清在试纸条的检测线处出现明显的棕红色,呈明显的阳性反应,而其它病原的血清在试纸条的检测线处不出现任何颜色,呈阴性反应。而且感染鸡群的NS1抗体在感染后3 d即可检测到,感染后1～2周为高峰期,维持时间约1周,检测阳性率为80%左右。临床样品的阳性率为9.1%。【结论】试纸条使用方便,操作简单,25 min内可以用肉眼判断结果,可区分禽流感疫苗免疫和野毒感染家禽,具有很大的推广应用价值。  相似文献   

免疫胶体金试纸条检测肉鸡感染H9N2-AIV后NS1抗体消长规律     

张文泽  崔卫涛  彭伏虎  肖运才  刘梅  王喜亮  胡思顺  毕丁仁 《中国兽医学报》2010,30(3)

禽流感病毒非结构蛋白(AIV-NS1)抗体检测可作为禽流感病毒感染的诊断标签。在禽流感NS1抗体鉴别诊断试纸条研制成功的基础上,本试验采用人工感染的方法,探讨了H9亚型禽流感病毒感染肉鸡体内NS1特异性抗体的消长规律。结果表明,肉鸡感染后3d开始检测出NS1抗体,至11d阳性率达89%,然后快速下降,21d检出率下降至10%,26d后完全消失,NS1抗体阳性率高低与感染鸡发病及死亡率高低明显一致。而对照组和疫苗免疫组在整个试验过程中NS1抗体检测均呈阴性。感染组血凝抑制抗体出现早于疫苗免疫组,但二者效价持续上升的结果类似。通过肉鸡人工感染试验,揭示了禽流感病毒感染后肉鸡体内NS1抗体消长情况,同时也证实本研究室研制的AIV-NS1抗体检测试纸条,不仅可以从患有呼吸道感染的病鸡中快速诊断出禽流感病毒感染,而且也可以鉴别禽流感疫苗免疫与病毒感染的鸡群。  相似文献   

禽流感病毒夹心ELISA诊断试剂盒的研制及应用   总被引：7，自引：2，他引：5  

肖运才  毕丁仁  李自力  胡思顺  许青荣  石德时  李永安  吴仁蔚 《中国兽医学报》2005,25(6):570-572

将成熟的禽流感病毒（AIV）夹心ELISA快速检测方法组装成诊断试剂盒。试剂盒由1～11号试剂、一块酶标板和一份说明书组成。对试剂盒内各组份进行了特异性、敏感性、重复性及保存期的测定。结果表明．在-10℃下能保存6个月．而且特异性强、敏感性高、重复性好，操作简单．方便．能快速、准确地检测出样品中是否带有AIV抗原。先后制备了8个批次的诊断试剂盒．于湖北、安徽及河南等地的养禽场、兽医站、农科院、农业院校等化验室应用．取得了良好的效果。  相似文献   

禽流感灭活疫苗对商品肉鸭免疫效果的评价     

胡思顺  郭锐  刘梅  肖运才  李自力  许青荣  李东  毕丁仁 《湖北农业科学》2007,46(6):963-965

为了了解和掌握商品肉鸭高致病性禽流感疫苗的免疫效果,对不同日龄的商品肉鸭进行了免疫试验.结果表明,3～10日龄时(H组)免疫,可以有效地刺激肉鸭产生禽流感HI抗体,并一直持续到40日龄;但由于母源抗体的干扰,在20日龄前后5～7 d,是一段易感染的免疫空白期.建议每年禽流感的免疫预防须提前到10月中上旬进行,以使侯鸟南飞迁徙时,所有家养水禽有充足的时间产生免疫力.  相似文献   

胶体金免疫层析试纸条法与血凝抑制试验、琼脂扩散法检测禽流感病毒抗体的比较     

彭大鹏  胡思顺  华艳  肖运才  李自力  毕丁仁 《中国兽医学报》2007,27(4):445-447

用本实验室建立的胶体金免疫层析试纸条法检测了鸡血清中的禽流感病毒抗体，并与传统的血凝抑制试验、琼脂扩散法检测结果进行了比较。结果表明，胶体金免疫层析试纸条具有特异性强、灵敏度高、方法简便、快速等优点，适合于鸡禽流感病毒抗体的现场快速检测。  相似文献   

鸡胚组织膜蛋白与鸡毒霉形体黏附蛋白的结合分析     

彭秀丽  高俊伟  胡思顺  胡福利  毕丁仁 《畜牧兽医学报》2008,39(12)

利用pGEX融合蛋白表达系统,将鸡毒霉形体黏附蛋白（pMGA）与GST的编码序列在大肠杆菌BL21中进行融合表达,经GST·BindResin纯化,GST—pMGA的纯度达96％。用蛋白酶Thrombin切掉GST标签,获得纯度为96％的pMGA,经Western—blot鉴定具有良好的免疫学活性。通过差速离心法提取SPF鸡胚的气管、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、腺胃、十二指肠、法氏囊、胸腺和脾脏等组织膜蛋白,采用斑点酶联免疫吸附试验（Dot—ELISA）检测各组织膜蛋白与pMGA的结合。结果表明：除脾脏外,其余组织的膜蛋白与pMGA之间存在特异性结合,说明这些组织膜蛋白中存在pMGA的受体蛋白。经SDS-PAGE分析发现,除脾脏外,其余9种组织的膜蛋白中均含有一条相对分子质量约为30ku的主带,受体的相对分子质量可能为30ku,可为深入研究pMGA的受体蛋白提供资料。  相似文献   

一株不依赖NAD生长的副鸡禽杆菌的分离与鉴定     

马洪梅  牛家强  张海燕  刘洋洋  胡思顺  许青荣  李自力  刘梅  毕丁仁 《中国预防兽医学报》2018,(6)

为研究湖北省内鸡传染性鼻炎病原菌的特性,本研究从湖北恩施某地鸡场疑似传染性鼻炎的病鸡样品中分离获得一株疑似副鸡禽杆菌(APG)的病原菌。通过细菌的分离培养、形态观察、生化试验、革兰氏染色、动物回归试验和PCR等方法对其进行鉴定。结果显示,分离的病原菌具有APG的形态特征和生化特性;16S rRNA序列比对分析与已报道的APG相应序列同源性高于98%;另外,利用特异PCR,分别检测到p250,pA14和pYMH5等3种质粒的特异基因片段;通过培养试验,该分离株能在无NAD的TSB(含鸡血清)中生长。这是国内首次发现无需NAD且同时存在3种质粒的APG。这一的发现警示国内的APG流行情况复杂,应引起畜牧兽医工作者的注意。  相似文献   

里默杆菌属细菌的分类及新种发现与命名     

卢媞  夏瑜  彭慧子  胡思顺  周祖涛  毕丁仁  李自力 《动物医学进展》2014,(11)

在目前的细菌分类中，拟杆菌门（Bacteroidetes）黄杆菌科（Flavobacteriaceae）的里默杆菌属（Riemerella）由鸭疫里默杆菌（Riemerella anatipestifer ）和鸽里默杆菌（Riemerella columbina ）两个种组成。有研究者分离鉴定到家鸽源表型特征类似于黄杆菌科里默杆菌属成员的菌株，并被建议命名为鸽咽喉里默杆菌新种（Riemerella columbipharyngis sp．nov）。论文对里默杆菌属的分类进展及对里默杆菌属、鸭疫里默杆菌、鸽里默杆菌种的修订描述和鸽咽喉里默杆菌新种的描述等进行了综述。  相似文献   

禽流感疫苗免疫和野毒感染的鉴别诊断策略     

吴玉石  肖运才  胡思顺  李自力  石德时  毕丁仁 《动物医学进展》2007,28(2):100-102

近年来,用灭活疫苗免疫接种已成为我国控制禽流感的一种主要策略,但免疫禽类不能与自然野毒感染的禽类从血清学水平上进行鉴别,并常导致贸易障碍.为了克服禽流感灭活苗的这种局限性,提出对疫苗免疫和野毒感染禽类鉴别诊断.一是免疫群内安插未免疫过的"哨兵禽",二是采用亚单位疫苗免疫定向检测血凝素蛋白,三是接种疫苗的血凝素与野毒同源而神经氨酸酶为异源,四是检测非结构蛋白(NS1)的血清学反应.文章对上述四种鉴别诊断策略的优缺点进行了评价,为禽流感的控制策略提供一些新的思路.  相似文献   

试纸条法与琼脂扩散法检测IBDV抗体的比较(英文)     

张进良  张文通  胡思顺  毕丁仁  王喜亮  肖运才 《农业科学与技术》2012,(9):1826-1828

[目的]比较分析IBDV抗体的试纸条与琼脂糖扩散两种检测方法。[方法]用自行研制的试纸条法检测鸡血清中的鸡传染性法氏囊病毒抗体,并与传统的琼脂扩散法检测结果进行比较。[结果]试纸条较琼脂凝胶扩散试验敏感8倍,在216份临床样品测定试验中,检出率更高,同时其又具有特异性强、易保存、操作简单快速等优点,故试纸条更适合于临床抗体监测。[结论]该研究结果表明试纸条可替代现有的血清学方法,在抗体监测方面具有极大的推广应用价值。  相似文献