鸡毒霉形体pMGA基因中TGA的同义突变及其原核表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

胡思顺  肖运才  李自力  毕丁仁 《中国兽医学报》2007,27(2):188-191

为了进一步研究鸡毒霉形体黏附素蛋白(pMGA)基因的生物学特性,利用PCR对该基因进行分段扩增,同时同义突变编码色氨酸的TGA及另外2个氨基酸的编码子以便形成酶切位点.将扩增片段连入pMD18-T载体获得含不同长度片段的质粒pMD-Ⅰ,pMD-Ⅱ,pMD-Ⅲ和pMD-Ⅳ,利用限制性内切酶消化pMD-Ⅰ和pMD-Ⅱ及pMD-Ⅲ和pMD-Ⅳ后回收相应的片段并进行连接获得pMD-Ⅴ(Ⅰ Ⅱ)和pMD-Ⅵ(Ⅲ Ⅳ).再用限制性内切酶消化pMD-Ⅴ和pMD-Ⅵ,回收Ⅴ和Ⅵ,并将其插入表达载体pGEX-KG中构建了含突变基因的GST融合表达载体.同时分别构建了片段Ⅲ及Ⅵ的GST融合表达载体.在IPTG诱导下,构建的表达载体在BL21(DE3)中获得了高效表达.表达产物相对分子质量大小分别为92000、39000、60000,经Western blotting分析证明均具有免疫原性.  相似文献   

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立   总被引：9，自引：3，他引：9  

吴仁蔚  胡思顺  肖运才  李自力  石德时  毕丁仁 《畜牧兽医学报》2006,37(10):1067-1072

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。  相似文献   

湖北省牛羊衣原体抗体流行病学调查     

周文  彭伏虎  胡思顺  张海燕  肖宏德  刘洋洋  李自力  毕丁仁 《湖北农业科学》2018,(18)

为了解湖北省牛羊衣原体病流行情况,采集了湖北省内多个地区近40个不同养殖规模的牛羊养殖场(18个牛场、20个羊场),共380份血清进行血清学检测。结果表明,380份血清中检出阳性血清168份,总阳性率为44.21%,湖北省各地区均存在衣原体抗体检测呈阳性的养殖场,牛的感染率相对较高,个别地区养殖场的衣原体抗体检测阳性率达100%。调查表明湖北省牛羊衣原体感染比较普遍,同时存在一定的地域性。  相似文献   

H9亚型禽流感病毒免疫磁珠分离方法初步建立     

彭伏虎  张水平  周舟  李自力  刘梅  肖运才  毕丁仁  胡思顺 《湖北农业科学》2016,(10):2603-2606

禽流感病毒(AIV)严重危害世界养禽业,是举世瞩目的重大人畜共患病原,环境中微量病原是潜在的重要传染源,很难进行监测。为了提高畜禽环境中微量病原的监测效率,样品的必要预处理非常重要。制备了粒径约30~100 nm的Fe_3O_4纳米粒子,并利用戊二醛二步法偶联H9-HA单抗和磁珠,偶联效率约为130 mg/g;200μL免疫磁珠(5.6 mg/m L)可分离纯化100μL血凝价为28的AIV-H9。制备的免疫磁珠可以为纯化和富集畜禽生活环境中的微量病原提供便利,结合其他病原检测手段将有助于提高环境中病原的监测效率。  相似文献   

猪冷藏精液中污染菌的分离鉴定及药敏试验     

李永安  宋文登  李自力  肖运才  胡思顺  许青荣  郭锐  毕丁仁 《中国兽医杂志》2007,43(8):74-75

为了扩大种公猪的商品利用价值,克服种公猪不宜长途运输及本交容易造成疾病传播的缺点,在猪的繁育过程中常常采用人工授精的方法,从而达到快速大量培育良种猪群的目的.  相似文献   

禽流感病毒HA1蛋白的原核表达及其免疫原性的初步研究     

吴仁蔚  张万坡  胡思顺  肖运财  毕丁仁 《动物医学进展》2007,28(8):5-9

从H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,RT-PCR克隆全长血凝素(Hemagglutinin,HA)基因,并进一步克隆HA的主要抗原区HA1基因.将HA1克隆到原核表达载体pGEXKG,与谷胱苷肽(GST)融合表达,表达的融合蛋白GST-HA1以包涵体形式存在.包涵体经变性、复性处理,Western blot分析表明,表达蛋白具有良好的免疫学活性.ELISA检测发现,GST-HA1只能与H9亚型禽流感病毒抗体发生反应,而与H5和H7亚型禽流感病毒抗体无交叉反应.进一步将纯化的融合蛋白与佐剂混合后免疫Balb/c小鼠,免疫小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体.制备的HA1蛋白特异性强,具有良好的免疫原性,为禽流感病毒的鉴别诊断和禽流感疫苗开发奠定了基础.  相似文献   

H9N2亚型禽流感病毒原位杂交检测方法的建立   总被引：4，自引：1，他引：4  

张万坡  程国富  谷长勤  李德学  宋念华  毕丁仁  胡薛英  胡思顺  胡智斌 《中国兽医学报》2005,25(4):371-373

根据已知禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)核蛋白(NP)基因序列，选取其中保守区域设计出1时引物。以RT-PR方法扩增出543bp的NP基因片段，采用地高辛标记制备探针。MDCK细胞人工感染H9N2亚型禽流感病毒后，不同时间取样制备细胞涂片，进行原位杂交，研究了禽流感病毒时MDCK细胞的感染。探讨了原位杂交的条件及其应用于检测AIV感染的可行性。结果显示，感染24h后，原位杂交可检测出细胞内的病毒RNA，并且杂交信号的强度与感染时间的长短有关。研究表明。原位杂交检测禽流感病毒，不但能很好地表现病毒和细胞的位置关系,而且具有较好的特异性和灵敏性，为禽流感病毒的组织原位杂交检测奠定了实验基础。  相似文献   

朗德鹅禽流感病毒的分离与鉴定   总被引：2，自引：0，他引：2  

肖运才  胡思顺  许青荣  李自力  毕丁仁 《中国兽医学报》2006,26(2):158-159

用禽流感病毒ELISA试剂盒对某朗德鹅养殖场的病鹅气管粘液进行了检测，发现5份粘液样本均呈禽流感阳性；随后取相应气管组织材料接种于9～11日龄鸡胚分离病毒．发现尿囊液能使鸡红细胞发生凝集，用禽流感病毒H5、H7、H9标准阳性血清和新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒抗血清作HI试验，结果禽流感病毒H5亚型抗血清的血凝抑制滴度达到2^7，而禽流感病毒H7、H9亚型及其他病毒抗血清无血凝抑制滴度，说明从朗德鹅分离到的病毒为H5亚型禽流感病毒。  相似文献   

6种常用抗菌药物对鸡毒支原体的药物敏感性试验   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭伟娜  毕丁仁  郭锐  李自力  胡思顺  肖运才  许青荣 《中国兽医杂志》2008,44(10)

鸡毒支原体(MG)是一种严重危害养禽业的病原体,可引起鸡的慢性呼吸道病(CRD),其特征性症状是呼吸啰音、咳嗽、气管炎、气囊炎、流眼泪等[1].  相似文献   

副鸡禽杆菌毒力质粒缺失株的构建及其致病性的研究     

刘洋洋  马洪梅  胡思顺  牛加强  李自力  周祖涛  刘梅 《中国预防兽医学报》2023,(3):232-237

为研究副鸡禽杆菌(APG)质粒与菌株致病力的关系，本研究采用42℃诱导的方法缺失APG分离株APG-Hu中的毒力质粒，经PCR鉴定质粒缺失菌株后将其命名为APG-HuΔ。分别采用分光光度计测定OD600nm值法、微量生化鉴定管法、K-B纸片法和雏鸡感染试验测定APG-HuΔ的生长曲线、生化特性、药物敏感性和对雏鸡的致病性。结果显示，在42℃诱导条件下，能够有效缺失APG-Hu中的毒力质粒p250和p A14，而质粒p YMH5未被缺失；APG-HuΔ生化特性、生长曲线及耐药性与APG-Hu相比均无明显差异。雏鸡感染试验结果显示，多数APG-HuΔ感染鸡无明显临床症状，总体发病情况明显弱于同等剂量APG-Hu感染的鸡，表明APG-HuΔ毒力显著降低。本研究结果表明，APG毒力与质粒p250和p A14相关，而质粒p YMH5可能增加APG耐受多种抗生素的风险。本研究为APG致病机理及耐药机制研究奠定基础，也为挖掘APG质粒的应用潜力提供一定参考。  相似文献