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为了更加精确地对鲤春病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)进行定量检测,试验以Taq Man探针法为基础,提取鲤春病毒总RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增,得到目的条带并回收,将目的片段与pMD18-T载体连接导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒并进行实时荧光定量RT-PCR测定,利用反应得到的Ct值与各浓度梯度质粒模板拷贝数的对数值绘制标准曲线。结果表明:以鲤春病毒cDNA为模板进行PCR扩增,获得清晰的目的条带,与预期相同;对鲤春病毒G蛋白重组质粒进行实时荧光定量RT-PCR扩增,所得扩增曲线有较好的重复性,各浓度梯度扩增曲线有明显的规律性,低浓度质粒模板扩增明显;获得的标准曲线有明显的线性关系,曲线回归系数为0.992。说明实时荧光定量RT-PCR方法敏感性较高、稳定性好、可靠精确,可以作为鲤春病毒检测的定量方法。 相似文献
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布鲁菌利用效应蛋白等成分控制布氏小体(Brucella-containing vacuole,BCV)的胞内转运、抵御细胞杀伤,使得细菌最终能够得以增殖和扩散。本试验通过生物信息学分析,选择亚细胞定位于周质、外膜和胞外的蛋白,基因扩增后与pZL1790载体连接后,电击转化羊种布鲁菌Brucella menlitensis 16M,构建过表达菌株。最后,利用TEM-1报告系统鉴定出2个效应蛋白,分别是BMEII0580和BMEII0607。BMEII0580功能注释是"probable blue-copper protein YacK precursor",BMEII0607是"ferric anguibaction-binding protein"。本试验结果增加了目前布鲁菌效应蛋白的数量,为进一步研究效应蛋白的功能提供了重要的参考。 相似文献
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研究分别测定了维氏气单胞菌CY0806在液体LB中的生长曲线,培养温度、pH值、渗透压对其生长的影响,在不同培养基的生长状况,对小鼠和几种不同的养殖鱼类的致病力情况,以及毒力因子检测。结果显示:菌株CY0806在液体LB培养基中存在二次生长现象;其可以在营养琼脂、RS培养基、TSA培养基、麦康凯培养基、营养肉汤中生长良好;该菌株有较强的耐受性,可以在pH值3～11、培养温度20℃～40℃、氯化钠含量在0%～5%中生长;可以引发小鼠、鲢、团头鲂死亡,引起鲫、乌鳢发病;该菌株具有多种毒力基因:溶血素、气溶素、细胞毒性肠毒素、鞭毛、磷脂酶、丝氨酸蛋白酶、LuxS等。 相似文献
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以框镜鲤Cyprinus carpio维氏气单胞菌Aeromonas veronii CY0806株细菌基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得flaA基因,将其克隆并测序,测序结果与气单胞菌属的不同菌株进行相似性分析,并对flaA基因编码蛋白质进行生物信息学分析.结果显示:获得框镜鲤维氏气单胞菌鞭毛flaA基因,长915 bp,编码304个氨基酸,系统进化树分析,其与其他维氏气单胞菌flaA基因处于同一分支,相关生物信息学分析显示,flaA基因编码的蛋白质相对分子质量32 098.66,等电点5.57,半衰期30 h,不稳定系数为32.31,脂肪系数81.05,不存在信号肽和跨膜区,二级结构预测:flaA基因以α螺旋和β折叠为主,同时,以同源建模法预测了flaA基因编码蛋白的三维立体结构. 相似文献
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