利用正交设计优化牡丹SRAP-PCR反应体系   总被引：13，自引：2，他引：11  

王燕青  季孔庶 《分子植物育种》2009,7(1)

利用正交设计L16(45对牡丹SRAP-PCR反应体系的五因素(Taq,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在四个水平上进行优化试验,得出如下结论:各因素水平变化对PCR反应的影响从大到小依次为:Tap,引物,dNTPs,Mg2+,模板DNA;筛选出各反应因素的最佳水平,建立牡丹SRAP-PCR反应的最佳体系(25μL)为:Taq酶0.5 U,Mg2+2.0 mmol/L,模板DNA 50 ng,dNTF 0.2 mmol/L,引物0.30 μmol/L.这一优化系统的建立为今后利用SRAP标记技术对牡丹进行相关研究提供了帮助.  相似文献   

园林树木网络查询系统的初步实现   总被引：1，自引：0，他引：1  

夏繁茂  季孔庶 《林业科技开发》2010,24(5)

园林树木网络数据库系统采用三层结构设计,即程序逻辑结构分为用户界面层、业务逻辑处理层和数据存储层.三层在实际的物理结构上也是独立的.业务逻辑处理层负责与数据库的连接,它包含与数据库连接的JavaBean,分别为植物学查询Bean、生物学特性及观赏特性查询Bean.所有的数据库操作均由用户界面层调用相应的JavaBean来完成,提高了系统的安全性和可移植性.用户界面层负责返回用户查询所得的结果.查询中采用输入关键词→粗略查询→详细查询和图片查询的逻辑进程,大大提高了查询的速度和效率.  相似文献   

珍珠黄杨ITS-PCR体系的建立与优化     

刘娜娜  季孔庶 《广西农业生物科学》2009,(5):975-980

本研究利用改良CTAB法从珍珠黄杨叶片中提取基因组DNA作为模板,在TaqDNA聚合酶量不变的基础上,利用正交设计L9（34）对4个因素（模板DNA、Mg2＋、dNTP和引物）在3个水平上对珍珠黄杨ITS-PCR反应体系进行优化。实验结果表明,在总体积50μL的反应体系中,建立了最佳ITS-PCR扩增条件：Mg2＋浓度2.0mmol/L、引物浓度0.3μmol/L、dNTP浓度0.3mmol/L、DNA模板浓度240ng/50μL、TaqDNA聚合酶的用量1.75U/50μL和退火温度56℃,该优化体系保证了珍珠黄杨ITS-PCR产物的纯度和质量要求。珍珠黄杨ITS片段克隆测序后获得的序列长度为642bp,其系统学信息将为珍珠黄杨的起源进化提供有力的分子水平证据。  相似文献   

马尾松纤维素合成酶基因PmCesA2的克隆及其植物表达载体的构建     

阮维程  郭天玮  苏江  季孔庶 《林业科技开发》2015,29(3):11-16

为了探究马尾松木材形成的分子机制,以马尾松嫩枝的总RNA反转录得到的cDNA为模板,利用反转录PCR和RACE技术克隆得到马尾松CesA2基因的全长cDNA序列(命名为PmCesA2),序列长度为3 500 bp,包含一个长为3 174 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码1 057个氨基酸.序列分析表明:PmCesA2序列与已报道的火炬松CesA2基因(AY789651.1)的相似性达98％.将全长基因克隆到载体pBI121质粒的SnaBI,Sacl双酶切位点之间,构建正义表达栽体pBI121-PmCesA2.  相似文献   

马尾松PmCOMT基因的克隆及实时定量表达分析     

吴晓刚  陈佩珍  韦蔷  武星  季孔庶 《分子植物育种》2019,17(3):789-795

  相似文献   

杂交马褂木大苗培育与管护技术   总被引：1，自引：0，他引：1  

王济成  吕晓雪  张志成  周海涛  王程  季孔庶 《林业科技开发》2005,19(3):55-57

杂交马褂木具肉质根系，喜湿润，忌水渍。移植2a生苗木，栽后加强管理。4a生时平均树高457cm，平均胸径5．4cm，杂种优势非常明显。总结杂交马褂木大苗培育的管护技术经验为浅栽，根部多培土，防倒伏，控水，勤施薄肥等。  相似文献   

马尾松PmTIR1基因的克隆及编码蛋白质的结构预测     

苏江  郭天玮  季孔庶 《分子植物育种》2015,(6)

TIR1(transport inhibitor response 1)基因在生长素信号转导途径中发挥重要作用。本研究采用PCR技术和RACE技术,利用Primer Premier5进行引物设计,从马尾松中克隆出TIR1基因的全长c DNA序列,命名为Pm TIR1。此c DNA全长2 446 bp,包括1 725 bp完整的ORF,能够编码含有574个氨基酸的蛋白,此蛋白相对分子质量为64 240.3 u,等电点为6.76。利用Clustal X、ANTHEPROT和DNAMAN等软件分析Pm TIR1序列及其编码的氨基酸序列,结果表明:马尾松Pm TIR1蛋白氨基酸序列与火距松TIR1蛋白同源性高达99%,Pm TIR1蛋白含有F-box结构域和多个LRR结构域;Pm TIR1蛋白的F-box结构域可能与SCFTIR1中SKP1结合,它符合F-box家族的特点。利用实时定量技术得知Pm TIR1在马尾松嫩根、嫩茎、嫩叶中都有表达,在嫩叶中表达量最高、嫩根中次之、嫩茎中最低。本研究可为生长素调控马尾松生长发育相关机理提供理论依据。  相似文献   

干旱胁迫对杂交鹅掌楸无性系光合特性的影响     

孙志勇  季孔庶 《北方园艺》2010,(2):86-89

以5个杂交鹅掌楸无性系(NE04、NE22、NE23、NE25、NE78)1a生扦插苗为试材,研究了干旱胁迫对各无性系叶片净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、胞间CO2浓度(Ci)和气孔导度(Gs)等光合特性的影响。结果表明:各无性系随胁迫程度加剧,Pn、Tr和Gs逐渐下降,而Ci则呈先降后升的趋势,但各指标变化幅度因无性系不同而异。Pn下降是气孔因素与非气孔因素双重作用的结果,轻度干旱胁迫下主要是由气孔限制引起的,而严重干旱胁迫下非气孔限制是Pn下降的主要原因。采用隶属函数法对上述指标进行综合分析,可得出其抗旱能力从大到小依次为:NE25NE78NE22NE04NE23。  相似文献   

珍珠黄杨叶片的蛋白质提取方法探讨     

王明娟  季孔庶 《广西农业生物科学》2009,(1):105-108

蛋白质样品制备是双向电泳的核心。为了找到一种适合提取珍珠黄杨叶片蛋白质的方法,本文以该树种扦插苗的叶片为材料,用TCA_丙酮沉淀法、Tris-饱和酚法和2-D Clean-Up Kit提取蛋白质,并进行双向凝胶电泳,采用银染法进行检测。结果表明,TCA-丙酮沉淀法得到的样品图谱背景模糊、拖尾;Tris-饱和酚法得到的样品图谱清晰,蛋白点饱满,无纵向或横向拖尾,但有蛋白点丢失;2-DClean-Up Kit提取的蛋白质样品得到了较好双向电泳图谱。  相似文献   

基于松树EST序列的马尾松SSR引物开发   总被引：5，自引：0，他引：5  

刘公秉  季孔庶 《分子植物育种》2009,7(4):833-838

本文用生物信息学方法对松树359 521条EST进行处理,得到无冗余EST序列56 776条,其中有2 315个SSR分布于2 057条EST中,出现频率是4.08%,平均距离是22.06 kb.检测到二、三碱基重复SSR总数为1 631个,四碱基至六碱基重复SSR共117个.在所得二碱基以上重复SSR中,多态潜能高的有488个,占27.92%;多态潜能次高的有1 260个,占72.08%.选择整体长度不小于24个碱基的SSR位点用于开发马尾松SSR引物,设计出135对备选引物,最终有51对引物在马尾松中得到扩增,有效扩增率为37.78%;其中39对有多态性,多态率为28.89%.在51对可扩增引物所对应的SSR类型中,P型占74.51%,I型占3.92%,C型占21.57%.  相似文献