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【目的】构建新疆多浪羊IL-1β基因编码区的原核表达载体,在大肠杆菌中进行诱导表达,为进一步研究IL-1β蛋白的结构功能奠定基础。【方法】从含质粒pMD-18T-IL-1β的大肠杆菌DH5α中获取IL-1β基因,与pET-28b质粒DNA连接,构建原核表达载体pET-28b-IL-1β。先将其转化到克隆载体E.coli DH5α感受态细胞中大量拷贝,经菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定后,提取pET-28b-IL-1β质粒转化到表达载体E.coli BL21(DE3)中,再次进行菌液PCR和EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切鉴定。将阳性单克隆接种于LB液体培养基,以终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导,用SDS-PAGE电泳检测IL-1β蛋白的表达及存在形式,通过Western blotting验证表达产物是否为目的蛋白。【结果】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β,该载体经诱导后表达出融合蛋白,分子质量为32.4ku,主要以包涵体的形式表达;经Western blotting检测,带有6×His标签的融合蛋白有很好的反应原性。【结论】成功构建了新疆多浪羊IL-1β基因的原核表达载体pET-28b-IL-1β,其在大肠杆菌BL21(DE3)中经诱导后表达出分子质量约为32.4ku的IL-1β融合蛋白。 相似文献
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旋毛虫新生幼虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ基因家族的筛选和分析 总被引：2，自引：1，他引：1
利用旋毛虫新生幼虫期特异性基因N5cDNA作为探针,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行筛选,并将阳性克隆全部送测序公司测序.对测序结果进行序列分析后,根据信号肽不同分为15种基因.NCBI BLAST 检索表明,其中有13种基因均为旋毛虫未知基因序列,并且氨基酸序列最前面均包含有1个信号肽,属于分泌性蛋白.InterProSean检索表明,15种氨基酸序列均编码脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNaseⅡ),均含有DNase Ⅱ的保守序列.通过互联网将编码蛋白序列输入CLUSTAL W数据库,检索结果表明,这些编码的脱氧核糖核酸酶Ⅱ蛋白质同源性高达85%～98%. 相似文献
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为获得多浪羊IFN-γ地高辛探针,并对其标记效率进行检测。将多浪羊pMD-18T-IFN-γ克隆菌进行PCR扩增,经切胶回收及目的基因浓缩后获得目的基因IFN-γ,然后用地高辛标记和检测试剂盒对IFN-γ基因进行标记,获得IFN-γ地高辛探针。IFN-γ的PCR扩增产物经8g/L琼脂糖电泳分离后转移至Hybond N+膜,膜上显影后进行敏感性检测并计算探针质量浓度,结果显示,IFN-γ地高辛探针在杂交液中的质量浓度为30μg/L。Southern杂交显示,Hybond N+膜上有IFN-γ基因的双链DNA,且浓缩后的DNA(2.5μg)标记的特异性探针质量浓度较高,可以在Hybond N+膜上呈现出清晰的杂交条带,证明获得的探针质量浓度符合要求。 相似文献
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试验旨在为阿克苏地区牛结核的防控提供基础数据。试验在2020—2021年间于阿克苏地区某规模化奶牛场采集全血3 215份（2020年1 668份和2021年1 547份）,对采集的全血分离血清,使用牛结核抗体快速检测卡（胶体金法）对血清进行抗体阳性率检测,并对检测结果进行比对分析。结果显示,2020年共计检测1 668份不同繁殖状态样品,阳性样品23份,可疑样品3份,阳性率为1.38%;其中妊娠奶牛阳性率最高,为2.03%。2021年共计检测1 547份不同繁殖状态样品,阳性样品35份,可疑样品5份,阳性率为2.26%;其中妊娠奶牛阳性率最高,为2.26%。2020年共计检测1 577份不同月龄样品,阳性样品23份,可疑样品3份,阳性率为1.46%;其中6～10月龄奶牛阳性率最高,为1.82%。2021年共计检测1 477份不同月龄样品,阳性样品35份,可疑样品5份,阳性率为2.37%;其中6～10月龄奶牛阳性率最高,为2.84%。2020年共计检测874份不同胎次样品,阳性样品20份,可疑样品3份,阳性率为2.29%;其中7胎以上奶牛阳性率最高,为5.56%。2021年共计检测777... 相似文献
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嗜水气单胞菌aer毒素基因的克隆及核苷酸序列分析 总被引：2，自引：0，他引：2
以自行分离的嗜水单胞菌分离株AHCS02为研究对象,分析其产生的aer毒素基因结构.根据GenBank中aer毒素的基因序列（M16495）,设计扩增编码aer毒素成熟蛋白基因的引物,以AHCS02的基因组DNA为模板,PCR扩增出长度为1 332 bp的核苷酸片段,进行pMD18-T载体克隆.酶切鉴定后进行序列测定和分析,结果表明扩增的片段与M16495的同源性达92%,将测得的序列登录GenBank数据库,所得的序列编号为AY136943.分析推导其核苷酸编码的氨基酸序列显示：其编码443个氨基酸,为aer毒素成熟蛋白的基因,与M16495相比,氨基酸差异主要集中在422氨基酸残基至436氨基酸残基的位置上,在这个位置上共有8个氨基酸残基发生变化,其中在435和437氨基酸残基之间有一个氨基酸密码子丢失,氨基酸的同源性达95.5%.证明aer毒素基因的5＇端保守,3＇端变异较大. 相似文献
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水花至夏花的培育在鱼的整个养殖过程中是很重要的一环.因为水花是鱼的整个生命中最脆弱的阶段,身体纤弱,取食能力低,饵料范围狭窄,对水质要求高,对外界条件的变化和敌害生物侵袭力差.因此,必须对水花进行小水体单独培育,给予充分地“照顾”,等到长到足够大的鱼种才可以和成鱼套养.利用小水体池塘培育轮虫和枝角类进行鱼苗培育是大连水产学院李永函教授,经过多年研究总结出来的一套先进的水花培育方法.这套方法于1993年5月开始在吉林省推广使用,它具有鱼苗成活率高,放养密度大,节省饵料等优点.为探讨该项技术在新疆阿克苏阿拉尔地区应用的可能性,我们在农大渔场进行了试验,取得了较好的效果.试验从5月20日水花下塘,到6月15日夏花出塘,在26天的生长期内,鱼苗从7.2mm长到30.9mm,成活率达48.3%,效果很好,该项技术值得在本地区推广使用.1 材料与方法1.1 选塘培育鱼苗(水花)的池塘是1995年主养鲢鱼成鱼的池塘,面积0.1675公顷,阳光充足,水源丰富,池底平坦,底泥厚度为15cm,水质较好,含盐度2‰,池形整齐,排灌水方便.1.2 池塘清整 相似文献
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南疆某乳品企业生产的奶粉偶尔会出现异味、凝固、微生物检验超标等问题。为研究品质异常奶粉是否存在芽孢杆菌污染,试验将品质异常奶粉通过水浴80℃处理20 min后,接种于锰盐培养基、LB固体培养基、嗜冷培养基,分别于高温(55℃)、中温(37℃)和低温(4℃)3种培养方式进行培养。分离培养后,通过革兰染色和芽孢染色后,对镜检有芽孢的单菌落进行菌体扩增、DNA提取、16S rDNA序列PCR扩增、克隆、鉴定后送测序。序列分析结果表明:从品质异常奶粉中分离鉴定出3株短小芽孢杆菌和7株地衣芽孢杆菌。对地衣芽孢杆菌进行进化树的构建结果显示,该菌与登录号为KU986668、CP025226、MK063874、MN493780、MG97702的地衣芽孢杆菌处于同一分支,且同源性为100%。对短小芽孢杆菌进行进化树的构建结果显示,该菌株与登录号为FJ641024、MT367713、FJ641028、KU662344、DQ275671、KR780437、KF463141的短小芽孢杆菌处于同一分支,且同源性为100%。该检测结果为企业建立科学、准确、高效的微生物污染防控体系,从源头分析和控制微生物的污染途径,提高产品质量奠定基础。 相似文献