2个旋毛虫新生幼虫期特异性相似cDNA的克隆及序列分析     

刘明远  吴秀萍  付宝权  卢强  姚春雨  李莲瑞  P.Boireau 《中国兽医学报》2004,24(6):561-564

利用旋毛虫新生幼虫期特异性 c DNA探针 ,从新生幼虫 c DNA文库中筛选出 2个相似的旋毛虫新生幼虫期特异性 c DNA克隆 ,分别命名为 N5和 N10 ,N5长度为 12 5 0 bp,N10长度为 12 33bp。 NCBI Blast检索表明 ,2个c DNA全长序列均为旋毛虫新基因序列。DNASIS分析表明 ,N5与 N10的开放阅读框架分别为 10 14、10 17bp,编码338、339个氨基酸 ,推导的成熟蛋白氨基酸序列均为 32 1个氨基酸残基 ,相对分子质量推导值分别为 35 30 0和 354 0 0。 2个氨基酸序列中 N端均包含有一信号肽序列 ,可能为分泌性蛋白。NCBI Blast及 Inter Proscan检索表明 ,以上2个氨基酸序列均含有 型核酸酶的功能结构域 ,均编码 型核酸酶 (DNase ) ,且与已报道的旋毛虫包囊形成相关蛋白 P4 3(经鉴定也为 DNase )同源性最高。目前已有的试验结果证实 ,P4 3并未直接参与包囊的形成 ,而是一种与P4 3蛋白同源性非常高的蛋白参与了旋毛虫包囊的形成。由于 N5与 N10为旋毛虫新生幼虫期特异性表达基因 ,也就是在旋毛虫包囊形成的时期表达 ,而且与 P4 3具有较高的同源性 ,并均编码 DNase 蛋白 ,因此 N5、N10具有参与旋毛虫包囊形成的潜在可能  相似文献   

旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析     

付宝权  原丽红  张亚兰  吴秀萍  李莲瑞  卢强  刘明远  陈启军  P.Boireau 《吉林农业大学学报》2004,26(3):323-325,333

用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,从1 6×105个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆。阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体DNA同源,编码核糖体大亚基RNA;3个克隆为旋毛虫已知基因,其中克隆ML12,34与Serineproteaseinhibitor[Trichinellaspiralis](AAF63473)同源性为99%,克隆ML42与HypotheticalOFR17 20[Trichinellaspiralis](AAB48489)同源性为99%,与21kDExcretory secretoryprotein[Trichinellapseudospiralis](AAF79206)同源性为90%,这为进一步研究基因重组抗原奠定了基础。  相似文献   

鲤鱼白细胞介素-8全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

谭业平  孙晓义  卢强  李莲瑞  邓洪宽  付宝权 《中国兽医学报》2008,28(6)

用DD-RTPCR的方法获得差异显示片段A26,经地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆。序列分析表明该克隆含有1个大小为294bp编码98个氨基酸的完整开放阅读框,氨基酸序列含有Chemokine-CXC功能结构域,前体中含有22个氨基酸组成的引导肽,氨基酸序列比对显示成熟白细胞介素-8(IL-8)多肽中第12、13和14构成CXC基序,但之前无ELR基序。系统发生分析其与荷兰鲤鱼亲缘关系最近,氨基酸序列的同源性达89%。分离培养鲤鱼外周血白细胞,在不同条件下经LPS、PHA和ConA刺激后,提取总RNA,根据鲤鱼IL-8全长cDNA序列和β-ac-tin序列设计引物,利用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对鲤鱼外周血白细胞IL-8进行差异表达分析,结果显示,经有丝分裂原刺激后前期(4h)白细胞中IL-8的表达量明显增大,但随着时间推移(12、24h)并不一直比同期正常白细胞表达量大,表达量趋势成峰形图。  相似文献   

新疆卡拉库尔羊的研究现状及前景   总被引：1，自引：0，他引：1  

李莲瑞  陈根元  王晓斌  赵津子  李霞  代小芳 《中国草食动物》2008,28(2):63-64

中国卡拉库尔羊(Karakul Rams)是利用从前苏联引进的卡拉库尔羊与国内的库车羊、哈萨克羊、蒙古羊经级进杂交而育成的羔皮用绵羊品种。卡拉库尔羊所产羔皮在国际市场上称为波斯羔皮,以乌兹别克布哈拉的一个羔皮贸易中心村镇卡拉库尔得名。卡拉库尔羊原产于中亚细亚的荒漠、半荒  相似文献   

民族学生《兽医微生物学》综合性实验教学模式改革探索与实践     

胡建军  李莲瑞  吴静  武军元 《塔里木大学学报》2009,21(4):91-94

以培养应用型人才为目标,结合民族学生的特点,改革综合性实验教学模式,激发民族学生对兽医微生物学实验兴趣,培养民族学生独立思考、动手能力。  相似文献   

新疆沙冬青抗冻蛋白基因保守区序列的克隆及其分析     

詹彬  安沙舟  杨丽娟  李莲瑞  马春晖 《新疆农业科学》2009,46(6):1307-1310

[目的]从Genbank数据库中选择与新疆沙冬青(Ammopiptanthus nanus)亲缘关系最近的同属蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)抗冻蛋白(AFP)基因AY590122、AY843521、AY843522的mRNA序列,设计扩增新疆沙冬青AFP基因保守区引物.[方法]以新疆沙冬青为研究材料,提取其总RNA,利用RT-PCR技术克隆出新疆沙冬青AFP基因的保守区域.[结果]序列分析表明,新疆沙冬青与蒙古沙冬青的保守区域同源性达98.15;.[结论]得到新疆沙冬青的抗冻蛋白的保守区域.  相似文献   

新疆卡拉库尔羊TNF-α原核表达及多克隆抗体的制备     

潘伊微  贺艳艳  潘辉  贾山岭  李莲瑞 《新疆农业科学》2013,50(3):572

[目的]克隆卡拉库尔羊TNF-α基因,在大肠杆菌中表达、纯化,并对TNF-α蛋白的抗原性进行分析.[方法]采用PCR技术扩增TNF-α基因核酸片段,并克隆入pET-28b表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)株中表达.用电洗脱法纯化目的蛋白,并用免疫印迹法分析纯化蛋白的抗原特异性.[结果]重组质粒在BI21 (DE3)菌株中经IPTG诱导表达一个相对分子质量约为49 KD的融合重组蛋白,原核表达质粒pET-28b-TNF-α表达的目的融合蛋白是以可溶的形式存在.用纯化的pET-28b-TNF-α免疫家兔,在免疫后的第45 d,Westem-blotting和琼脂糖扩散试验分析表明,表达的pET-28b-TNF-α能被家兔的阳性血清所识别.[结论]表达蛋白pET-28b-TNF-α具有较好的反应原性和免疫原性.  相似文献   

C型肉毒梭菌肉毒毒素的提取与鉴定     

薛正坤  吴伟  张晶  李超毅  吴辉  李莲瑞 《新疆农业科学》2013,50(3):557

[目的]通过对C型肉毒梭菌肉毒毒素的提取与鉴定,为类毒素和抗毒素的制备及抗原性分析奠定基础.[方法]将分离鉴定得到的C型肉毒梭菌通过扩大培养、产毒培养后将产生的肉毒毒素采用除菌过滤、硫酸铵盐盐析、离心、透析、浓缩的方法从产毒培养基中分离提取出来.再将提取的肉毒毒素通过SDS-PAGE鉴定毒素蛋白的分子量.[结果]分离出来的毒素蛋白重链和轻链分别在98和53 KDa左右,与C型肉毒毒素的理论分子量相符.[结论]提取的肉毒毒素是C型肉毒毒素.  相似文献   

多浪羊IL-1β基因的克隆及序列分析     

曾国航  曹玉华  王娟娟  潘伊微  贾山玲  徐宏伟  李莲瑞 《新疆农业科学》2013,50(7):1347

[目的]进行多浪羊IL-1β基因的克隆及序列分析,为多浪羊IL-1β的功能研究及多浪羊免疫应答基因的筛选奠定基础.[方法]根据GenBank中NM_001009465.2的mRNA序列设计引物,以新疆多浪羊淋巴细胞的总RNA为模板,用RT-PCR扩增多浪羊IL-1β基因序列.[结果]IL-1β基因序列包含了一个862 bp的开放阅读框,成熟蛋白编码的氨基酸序列长度为286个氨基酸.通过IL-1-β核苷酸多序列比对发现,第70、163、180、269位上四个相对保守的碱基处出现了四个突变;通过IL-1-β氨基酸多序列比对,第24、36位上两个氨基酸发生突变.通过G enBank中的Blastn序列比较分析,多浪羊的IL-1β基因与普通绵羊的同源性高达99;.[结论]在进化树体系中,多浪羊与反刍动物集成一束,它们与其它哺乳动物源于共同的祖先,但分别处于进化树上不同的分支.  相似文献   

C型肉毒梭菌肉毒毒素的抗原性分析     

王娟娟  刘书东  李剑  刘志龙  陈根元  曹玉华  李莲瑞 《新疆农业科学》2012,49(8):1557-1561

[目的]通过对分离纯化的C型肉毒毒素抗原性分析,提供快速鉴定动物因C型肉毒梭菌中毒的理论基础.[方法]对分离纯化的C型肉毒梭菌的肉毒毒素灭活后通过SDS - PAGE测定浓度,确定浓度后与弗氏佐剂乳化后免疫家兔,免疫结束后采家兔血液并分离血清.[结果]将不同稀释倍数的肉毒毒素经SDS -PAGE电泳分离后,转移至HybondNC膜,家兔三免后提取的血清作为一抗,用二抗进行Western blotting检测,大约在98.0和53.0 kDa处出现特异反应带;抗原与抗体在琼脂凝胶上结合时,会形成清晰的沉淀带.[结论]分离纯化的C型肉毒毒素,经免疫后家兔可见:C型肉毒毒素具有免疫原性和反应原性,抗体的效价为1∶8.  相似文献