猪胸膜肺炎放线杆菌分离鉴定与毒力测定   总被引：1，自引：0，他引：1  

雷连成  华芳  王丽哲  李耿  冯新  韩文瑜 《中国兽医学报》2008,28(4):359-362

从长春地区疑似猪传染性胸膜肺炎发病猪采集病料,经形态学检查、生化实验、卫星生长现象、溶血试验、PCR鉴定等,分离到7株猪胸膜肺炎放线杆菌;血清定型试验表明,其中血清7型3株,血清5型2株,血清3型1株,血清1型1株.将分离菌株在37℃ BHI液体培养基中培养6～8 h,无菌条件下离心收集菌体,用灭菌生理盐水洗涤菌体3次,腹腔接种健康昆明小鼠,每只小鼠1.0×108 CFU/0.2 mL,结果5型和7型对小鼠的平均致死率最高,分别为100%和66.5%.  相似文献   

新牛蛙抗肿瘤肽RGD-T-La(FS)嵌合体的设计及其抗肿瘤作用   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘梦月  刘珊珊  付超  赵瑞利  胡烨  马吉飞  韩文瑜  朱琳  张秋利 《中国兽医学报》2018,(1):39-50

为了研究新牛蛙抗肿瘤肽RGD-嵌合体的抗肿瘤作用及其对肿瘤细胞的作用机制。本研究以新牛蛙抗菌肽Temporin-La(T-La)为基序,通过生物信息学分析,改变特定氨基酸残基设计合成新的抗肿瘤肽Temporin-La(S)(TLa(S))和Temporin-La(FS)(T-La(FS)),氨基端偶联RGD肽成RGD-T-La、RGD-T-La(S)和RGD-T-La(FS)抗肿瘤肽,通过圆二色谱检测多肽二级结构,MTT法体外筛选抗肿瘤细胞活性多肽。使用流式细胞仪测定不同肿瘤细胞对不同多肽的吸收量,筛选对抗肿瘤肽敏感的肿瘤细胞。利用激光共聚焦显微镜实时观察抗肿瘤活性强的抗肿瘤肽对敏感肿瘤细胞的杀伤作用,并用扫描电镜观察抗肿瘤肽及其RGD嵌合体肽对肿瘤细胞的作用机制。在新牛蛙抗菌肽Temporin-La基序上设计T-La(S)和T-La(FS)2种抗肿瘤活性肽,圆二色谱仪测定其二级结构均呈α螺旋型,MTT结果显示黑色素瘤细胞(B16)对几种多肽的敏感性最强,10 mg/L质量浓度时,RGD-T-La(FS)对B16的毒性作用最强,细胞存活率为24.65%。激光共聚焦显微镜实时观察到,RGD-La(FS)和RGD-La(S)对肿瘤细胞都有较强的杀伤作用。扫描电镜结果显示,RGD嵌合体多肽对肿瘤细胞的杀伤作用具有位点靶向性。流式细胞仪检测HepG2对FITC-RGD-T-La(FS)的吸收量最大,检测到荧光强度为800 950.70。经改造的多肽T-La(FS)可以增加其对肿瘤细胞的杀伤作用,且偶联RGD的嵌合体RGD-T-La(FS)对肿瘤细胞的杀伤作用更具有靶向专一性,为抗肿瘤肽作为抗肿瘤药物的临床应用提供科学依据。  相似文献   

耐喹诺酮类药物嗜水气单胞菌的分离鉴定及电镜观察   总被引：2，自引：0，他引：2  

郑伟  卢强  韩文瑜  张雅斌  刘艳辉 《水产科学》2004,23(4):20-23

本研究对吉林省内12个水域采集和送检的66尾病鱼进行细菌分离鉴定,共检出46株嗜水气单胞菌疑似株,通过生化试验和PCR扩增气溶素基因aer鉴定法,确定其中22株为嗜水气单胞菌。进一步采用纸片扩散法和双倍稀释法测定嗜水气单胞菌分离株对多种抗生素的耐药性,其中部分菌株存在不同程度的耐药性,22株嗜水气单胞菌中有4株对喹诺酮类药物耐药,并且为交叉耐药。其对喹诺酮类药物的抑菌圈均小于19mm。嗜水气单胞菌耐喹诺酮类药物的检出率为18 2%。将病料中分离的8株嗜水气单胞菌在电镜下观察发现,2株耐药菌表面发现均匀分布的球形结构,而6株敏感菌表面未见此结构。  相似文献   

气单胞菌对氟喹诺酮类药物耐药性研究进展     

郑伟  韩文瑜  卢强 《河北渔业》2001,(5):5-9

氟喹诺酮类药物因其抗菌谱广、杀菌力强、价格低廉、副作用小而被广泛应用于人、畜、水生动物感染性疾病的治疗与预防。但是,随着该药的广泛应用,很快形成了对该药的耐药性,且增长速度很快,该类药物半数以上无效,足见问题的严重性。本文将重点阐述致病性气单胞菌对喹诺酮类药物耐药性的研究进展。  相似文献   

鲎抗菌肽polyphemusinⅡ基因的改造、克隆及其在大肠杆菌中的表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

张钫  郑伟  韩文瑜 《新疆农业科学》2005,42(Z1):31-34

中国鲎(Tachypleus trideutatus)血细胞产生的抗菌肽(Antibacterial peptide)—鲎素,具有广谱的杀菌、抑病毒和抗肿瘤细胞的作用。实验根据已报道的美洲鲎的抗菌肽polyphemusinⅡ氨基酸序列,设计了一对引物,并对原抗菌肽基因进行改造,在基因开放阅读框末端添加了Asn密码子,使抗菌肽羧基末端酰胺化,旨在提高其稳定性和抗菌活性。PCR扩增获得改造过的目的片段,连接于载体pMD18-T,测序后,与pEI-28c(+)连接,构建表达质粒pET28c-rr,测序鉴定正确后,转化大肠杆菌E.coli.BK21(DE3)。表达菌株经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导后以包涵体的形式表达,在体外表现出明显的抑菌活性。  相似文献   

沙门菌sopB基因缺失诱导小鼠巨噬细胞死亡的研究     

戚帅  秦晓霞  胡桂秋  张杰  于水星  陈巍  韩文瑜  杨勇军 《动物医学进展》2017,38(5)

沙门菌是一种胞内寄生菌,能够引起人和多种动物疾病,是一种世界范围内的重要疾病。为了更好理解在沙门氏菌感染过程中效应蛋白SopB对巨噬细胞存活的影响,利用鼠伤寒沙门菌SL1344和sopB基因缺失菌株分别感染小鼠骨髓来源的巨噬细胞,对2株菌在巨噬细胞内存活情况进行统计。随后用Western blot检测DNA修复酶PARP的剪切情况,通过ELISA检测培养上清中细胞因子和趋化因子的分泌情况。结果发现sopB基因缺失之后,沙门菌在巨噬细胞内的存活显著降低;培养上清中细胞因子和趋化因子分泌增强,巨噬细胞坏死增加。说明sopB基因缺失可促进巨噬细胞坏死。  相似文献   

鸡源大肠杆菌的质粒及染色体DNA分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

赵爱珍  韩文瑜  王世若  梁焕春  王兴龙  冯来坤 《中国兽医学报》1999,19(2):140-142

为研究鸡源大肠杆菌分子流行病学规律,选用４０株鸡源大肠杆菌（均含有质粒）,应用指纹法对其质粒及染色体ＤＮＡ进行了分析。对菌株的质粒图谱比较表明,来源相同的菌株,其图谱相同或相似;来源不同的菌株,其图谱一般不同。选取ＨｉｎｄⅢ对质粒ＤＮＡ进行酶切,进一步证实了质粒图谱分析的结果。对菌株质粒型（ｐｌａｓｍｉｄｔｙｐｅ,ＰＴ）进行数值聚类分析,得出ＰＴｓ间的聚类树状图,更直观地反映出菌株间的遗传关系。试验中还发现,多数鸡源大肠杆菌含有大质粒,它们可能含有毒力相关基因。选用ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＩ分别对染色体ＤＮＡ进行酶切,均能够产生较易于识别的酶切图谱,菌株的图谱与其来源也具有一致性  相似文献   

1株吉式库特菌噬菌体vb＿KgiM＿P1的生物学特性及全基因组分析     

欧红达  赵日虹  张梅梅  刘明  黄春正  顾敬敏  韩文瑜 《中国兽医学报》2023,(1):85-92

吉式库特菌在自然界普遍存在，有的作为机会致病菌可引起动物疾病。本研究发现了1株吉式库特菌(Kurthia gibsonii)噬菌体vb＿KgiM＿P1 (简称MP1),并对其生物学特性和全基因组进行研究。透射电镜观察显示MP1具有典型的二十面体结构的头部和可收缩的尾部，属于肌尾病毒科(Myoviridae)。生物学特性研究表明，MP1的最佳感染复数为1,裂解周期在50 min左右，潜伏期约为15 min,暴发期约为50 min,平均暴发量约为83 PFU/cell,表明该噬菌体有高效的杀菌活性。MP1的稳定性良好，在25～50℃之间和pH值3～11之间保持稳定的裂解活性。全基因组测序显示该噬菌体基因组全长为15 855 bp, G+C含量为32%,有20个开放阅读。系统发育分析结果表明MP1与葡萄球菌噬菌体和肠球菌噬菌体属于共同起源的不同进化分支，且相似性较低，证明MP1是1株全新的烈性噬菌体。  相似文献