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为了解天津地区猪链球菌病的发病情况及流行血清型,试验从天津地区某猪场发病猪脑与肺脏中分离病原菌,并对分离菌株进行革兰氏染色镜检、生化试验、不同毒力基因型PCR检测、药敏试验和小鼠致病性试验。结果表明:从脑与肺脏中分离出2株链球菌;革兰氏染色为阳性球菌;生化试验符合链球菌生长特性; PCR检测2株链球菌的毒力血清型,从脑中分离出的链球菌为cps7h型,并携带溶菌酶释放蛋白(mrp)和溶血素(sly)毒力基因,从肺脏中分离出的细菌未测出血清型;从脑中分离出的链球菌对青霉素高度敏感,对头孢呋辛、新霉素等耐药;致病性试验显示,昆明系小鼠不表现明显的临床症状,仅表现组织水平的变化。 相似文献
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牛蛙(Rana catesbeiana)蛙皮抗菌肽基因的克隆、测序及其表达 总被引:2,自引:3,他引:2
利用RT—PCR的方法从牛蛙皮肤组织中克隆到大小为270bp的片段RCABP,将其克隆到pGEM—T载体,测序获得1个新的碱基序列。将此基因克隆到原核表达载体pQE一80L,获得融合表达质粒pQE一80L/DHFR/ABP,在1%IPTG诱导下进行表达。SDS—PAGE检测表明,重组蛙皮抗菌肽蛋白的表达量占菌体总蛋白的24%,以包涵体形式存在。体外抑菌试验表明,所构建的质粒能在大肠杆菌中表达具有体外抑菌活性的蛙皮抗菌肽,该融合蛋白具有良好的应用前景。 相似文献
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从天津地区某猪场病猪肺脏脓肿中分离到一株具有β溶血特性的细菌,经形态学与生化特性分析,初步确定为化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogenes),并命名为TJjh1913.利用PCR扩增16S rRNA基因,经Blast序列分析,其序列与GenBank数据库中猪源化脓隐秘杆菌的核苷酸序列同源性高达99.... 相似文献
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以牛蛙皮肤组织为材料获得总RNA,用偶联Oligo(dT)的磁珠纯化mRNA后,利用含Sfi Ⅰ酶切位点的CDSⅢ引物在逆转录酶的作用下合成cDNA的第1链,以含Sfi Ⅰ酶切位点的CDSⅢ引物和SMART引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经Sfi Ⅰ酶切,通过T4DNA连接酶连接到经过相同酶切的λTripIEx2载体,体外包装后转染E.coli XLI-Blue 宿主菌,进行滴度测试和文库扩增.结果构建的牛蛙皮肤cDNA 文库原始库容量为1.42×106 PFU/mL,插入片段长度在0.5~1.5 kb,重组率为89.5%,扩增后的文库滴度为1.35×109 PFU/mL,构建的文库质量符合要求,可用于大规模的功能基因分析. 相似文献
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试验旨在构建pET28a-DCpep-GSE原核表达载体,并制备猪链球菌(Streptococcus suis)重组表位蛋白。应用生物信息学方法预测猪链球菌保护性抗原三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、烯醇化酶(Enolase)、DNA核酸酶(SsnA)的跨膜区结构、信号肽、B细胞表位、辅助T细胞(Th细胞)表位及蛋白的二级结构;设计重组蛋白(DCpep-GSE蛋白)的氨基酸序列并分析其理论等电点、亲疏水性等理化性质;构建重组原核表达载体pET28a-DCpep-GSE,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,优化诱导表达条件,His镍柱纯化并检测目的蛋白的细胞毒性和溶血性。结果显示,SsnA蛋白第1-50及1 036-1 059位氨基酸为胞内或跨膜片段,第1-56位氨基酸为信号肽片段,GAPDH和Enolase无跨膜区及信号肽;B细胞和Th细胞表位处于二级结构中的无规则卷曲与β-转角区域,表位抗原性良好;DCpep-GSE蛋白共373个氨基酸,分子质量为45.3 ku,理论等电点(pI)为4.57,平均亲水性(GRAVY)为-0.677,属于酸性亲水性蛋白;质粒双酶切得到5 369 bp的载体条带和1 131 bp的目的条带,PCR扩增产物测序结果与设计序列一致,载体构建正确;以1 mmol/L IPTG于37 ℃诱导6 h蛋白表达量最高,超声破碎后得到可溶性蛋白;试验组蛋白浓度为500 μg/mL时,RAW264.7、PK15和MARC145细胞的相对增殖率分别达到92.3%、99.5%和99.7%,细胞形态与对照组一致,生长旺盛;各样品组的溶血率均<5%。本研究设计了重组蛋白DCpep-GSE,成功地表达和纯化了DCpep-GSE蛋白,并验证了其安全性,为后续猪链球菌病亚单位疫苗的研制奠定了基础。 相似文献