重组卡介苗感染树突细胞的研究   总被引：1，自引：1，他引：1  

焦新安  Richard Lo-Man  Edith Deriaud  Nathalie Winter  Claude Leclerc  刘秀梵 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2002,23(1):1-5

在体内外试验中 ,树突细胞 (DC)均能摄取表达大肠杆菌麦芽糖结合蛋白 (MalE)的重组卡介苗 (rBCG·MalE)。应用流式细胞术测得荧光标记的rBCG·MalE在体内感染DC的水平在 1 % 2 % ,与感染巨噬细胞 (MΦ)的水平相当。体外抗原提呈试验结果显示 ,DC和MΦ能吞噬、加工rBCG·MalE并向T细胞杂交瘤FBU·B1 1提呈MalE蛋白抗原表位 ,而在体内试验中 ,从rBCG·MalE免疫小鼠脾脏中纯化的DC ,可检测到MalE表位MHCⅡ复合物 ,而纯化的MΦs却测不到。这表明DC在起始抗分枝杆菌的免疫保护中发挥关键作用。  相似文献   

鼠伤寒沙门氏菌I相鞭毛蛋白基因fliC^i的克隆,鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

蔡学忠  焦新安 《农业生物技术学报》1995,3(3):71-76

以提纯的鼠伤寒沙门氏菌８７０５染色体ＤＮＡ为材料，经ＥｃｏＲ Ｉ消化，过柱（ＳｅｐｈａｒｃｙｌＳ－４００），得到大于４００ｂｐ的酶切片段；然后随机克隆到质粒ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（－）中，转化大肠杆菌ＬＣ２ａ（ｈａｇ＾－，ｒｅｃＡ＾－）；在氨苄青霉素平板上共得到６０１３个转化子，从中筛选出１个有动力的克隆，小量制备质粒ＤＮＡ，经酶切电泳鉴定，该克隆的外源片段大小为１５．３ｋｂ，将其命名为ｐＧＩ４０１５。  相似文献   

鸡CD4和CD8α基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建   总被引：4，自引：1，他引：4  

胡青海  焦新安  徐耀辉  潘志明  黄金林 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2004,25(4):56-60

用Trizol提取6周龄白莱航鸡胸腺组织的总RNA．再用Oligo—dT纤维素富集mRNA后，用RT—PCR分别扩增出鸡CD4和CD8α基因cDNA。PCR产物切胶回收后连入T载体，测序正确后再连入pcDNA3．1( )。将重组质粒pcDNA3．1-CD4和pcDNA3．1一CD8分别转染COS-7细胞，用已知的抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体检测到转染细胞中CD4和CD8α分子的表达，这说明构建的真核表达质粒正确，为下一步用DNA免疫方法研制抗鸡CD4和CD8的单克隆抗体以及研究鸡CD4和CD8分子的结构和功能打下基础。  相似文献   

鸡白痢和肠炎沙门氏菌抑制差减文库的构建与分析     

李求春  焦新安  徐耀辉  潘志明  黄金林 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2007,28(1):1-5

应用抑制差减杂交技术(SSH)对鸡白痢沙门氏菌C79-13与肠炎沙门氏菌50041进行基因组片段的差异分析,构建鸡白痢沙门氏菌的差减文库。经Dot-blot筛选,并对部分片段进行测序和同源性分析。结果表明:这些序列主要分为3类,即型分泌系统相关序列、质粒转移相关序列、未知功能序列。其中2个差减片段与编码福氏志贺菌侵入质粒抗原IpaJ蛋白基因的同源性达50%。证明所构建的差减文库可为鸡白痢沙门氏菌特异性致病基因和其致病机理的研究提供重要的依据。  相似文献   

弯曲菌多重PCR检测方法的建立及其初步应用   总被引：12，自引：0，他引：12  

何蕊  黄金林  许海燕  苏洁  潘志明  焦新安 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2007,28(1):5-8

以16S rRNA、mapA和ceuE为靶基因,建立检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR方法。特异性试验能分别扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他参考菌株均未扩增出条带;敏感性试验表明,基于增菌培养和选择性培养的多重PCR方法对弯曲菌检测限为10 mL或10 g模拟污染样品,最低可检测0.925 pg.μL-1空肠弯曲菌DNA和1.050 pg.μL-1结肠弯曲菌DNA。以国家标准为参照,应用该方法对180份生鲜鸡肉样品进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可克服传统生化鉴定和血清学方法的不足,为弯曲菌检测提供新的技术。  相似文献   

鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的PCR-RFLP分子鉴别   总被引：10，自引：1，他引：9  

徐耀辉  焦新安  胡青海  焦凤超  曾显营  潘志明  黄金林 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2005,26(1):1-4,29

根据鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌fliC基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约600bp的产物,用Hin6I对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌的生物型。利用该技术对6株鸡白痢沙门氏菌标准株及2株鸡伤寒沙门氏菌标准株进行分子鉴别,得到的结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行。在此基础上对我国不同地区、不同年代的191株鸡沙门氏菌进行分子鉴别,191株中有185株分离株符合鸡白痢沙门氏菌的RFLP模式,6株分离株符合鸡伤寒沙门氏菌的RFLP模式,其中有176株PCR—RFLP鉴定结果与生化特性符合率达100％,另有15株根据生化特性不能鉴别。  相似文献   

扬州市流浪犬肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌耐药性分析及PMQR基因检测     

孟楠  洪佳欣  戴宇琪  王泽承  王晶  孙林  焦新安 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2023,(1):68-74

为了解扬州市流浪犬相关肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药情况及质粒介导的喹诺酮类耐药(plasmid-mediated quinolone resistant, PMQR)基因的流行性与多样性,从扬州市犬只留检所采集156份样品进行肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的分离、纯化与鉴定;采用琼脂稀释法测定分离株对15种抗菌药物的最小抑菌浓度,PCR检测喹诺酮类耐药菌株PMQR基因的携带情况。结果表明：共分离到82株肺炎克雷伯菌和119株大肠埃希菌,其中肺炎克雷伯菌对氨苄西林的耐药率最高(97.56%),其次是磷霉素(75.61%),有7株菌对6种以上的药物耐药;119株大肠埃希菌中有79株菌至少对1种药物耐药,对四环素、氨苄西林、萘啶酸、复方新诺明和环丙沙星的耐药率分别为48.74%、37.82%、26.05%、29.41%和10.08%, 12株菌耐6种以上药物。共分离到40株喹诺酮耐药菌株,PMQR基因qnrS、oqxAB、qnrD和aac(6′)-Ib-cr的检出率分别为22.50%、17.50%、7.50%和7.50%,且有1株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌同时携带aac(6′)-Ib-cr、q...  相似文献   

单核细胞增生李斯特菌快速检测技术的建立及应用     

赵梦迪  张琴  徐尧  姚浩  王泽港  孟闯  焦新安  殷月兰 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2023,(3):59-64

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)是一种重要的食源性人兽共患病原菌,可通过食物链感染人类,严重危害人体健康。因此快速检测食物样品中Lm对于李斯特菌病的防控尤为必要。细胞壁表面蛋白ActA是Lm重要的毒力因子,在前期制备的ActA单克隆抗体的基础上,将其与磁珠进行偶联,并结合李斯特菌显色培养基快速检测Lm。结果表明：抗体最适偶联量为100μg,最佳偶联时间为4 h,细菌最佳富集时间为15 min。在此基础上建立了免疫磁珠快速检测技术,具有特异性强、灵敏度高等优点。综上,该技术可高效检测出食品中的Lm,对预防和控制李斯特菌病的发生具有重要意义。  相似文献   

检测牛IL-4双抗体夹心ELISA方法的建立     

朱月姝  文志发  孔文君  徐正中  焦新安  陈祥 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2023,(3):65-71

为利用牛白细胞介素-4 (BoIL-4)的特异性单克隆抗体(MAb)建立检测BoIL-4的双抗体夹心ELISA方法,以多种ELISA方法对7株抗BoIL-4的单抗进一步筛选,得到反应最佳的2株单抗8B7和4A10,以A9表达的重组BoIL-4为阻断剂的阻断ELISA试验中,表明这2株单抗也可识别所构建的细胞系A9表达的重组BoIL-4。以单抗8B7作为包被抗体,以标记了HRP的单抗4A10作为检测抗体建立的双抗体夹心ELISA方法可检测大肠埃希菌、毕赤酵母和Flp-In-293细胞系3种表达系统表达的重组BoIL-4,最低检测限分别为0.25、8和2 ng·mL^-1,且对A9细胞系上清中表达的BoIL-4检测效果和特异性良好。该研究建立的BoIL-4双抗体夹心ELISA方法为深入研究BoIL-4、开发BoIL-4 ELISA检测试剂盒奠定了基础。  相似文献   

呼吸道微生物区系与牛呼吸道疾病综合征发生的关系     

曹兆立  徐正中  陈祥  焦新安 《动物医学进展》2022,43(7):113-118

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