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1.
以BALB/c小鼠为实验动物模型,对actA基因和plcB基因双缺失的产单核细胞李氏杆菌（LM）yzuLM1-2菌株进行感染动力学研究。分别用减毒突变株yzuLM1-2和野生型菌株yzuLM4给BALB/c小鼠静脉注射或灌服,并对脏器中LM的分布动态进行测定。结果显示,在显著高于野生型菌株感染剂量的条件下注射或灌服接种后,减毒突变株组小鼠肝和脾中的LM数量迅速下降,被清除的速度显著快于野生型菌株组。溶血素（LLO）抗体的测定结果显示,减毒突变株菌能和野生型菌同样激发较高水平的抗体。小鼠免疫保护试验结果显示,减毒突变株免疫组对同种血清型LM的攻击具有较好的免疫保护力,可达100%。结果表明,yzuLM1-2突变株侵袭力下降,致病力降低,能激发较高水平的抗体产生,可以作为预防动物李氏杆菌病的候选疫苗菌株,并为用作运送外源保护性抗原的载体提供了材料。 相似文献
2.
单抗竞争ELISA检测猪沙门氏菌感染方法的建立与应用 总被引：5，自引：0，他引：5
以猪霍乱沙门氏菌作为包被抗原 ,利用沙门氏菌O7单克隆抗体酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪霍乱沙门氏菌抗体。经过研究确定抗原包被浓度为 2×1 0 8CFU/ml,血清检测稀释度为 1∶1 6,酶标抗体浓度为 1∶70 0 ,包被液为碳酸盐缓冲液 ( 0 .0 5MpH9.6)。应用单抗竞争ELISA和平板凝集试验 (PAT)同时对 5 0 6份血清进行猪霍乱抗体检测 ,PAT的检出率为 3 .60 % ,ELISA检出率为 5 .75 % ,两者符合率达 96.4%。试验结果表明 ,ELISA方法敏感性高 ,特异性强 ,稳定性和重复性好 ,操作简便。本方法的建立在猪群沙门氏菌感染的检疫、实验室诊断的标准化及流行病学调查方面具有应用价值。 相似文献
3.
用Trizol提取4—6周龄白莱航鸡、伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡胸腺组织的总RNA，再用Oligo～dT纤维素富集mRNA后，用RT-PCR扩增出鸡CD3γδ基因CDNA。PCIk产物切胶回收后连入T载体，序列分析发现伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡的CD318cDNA比白菜航鸡多一个氨基酸，且在胞外区的一个区域有4个氨基酸的差异。将白莱航鸡的CD318从T载体上切下连入pcDNA3．1（＋），再将重组质粒pcDNA3．1-CD3转染COS-7细胞，用已知的抗鸡CD3的单克隆抗体测得转染细胞中CD3γδ分子的表达，这说明构建的真核表达质粒正确，为下一步用DNA免疫的手段研制抗鸡CD3的单克隆抗体以及研究鸡CD3分子的结构和功能打下了基础。 相似文献
4.
应用PCR快速检测单核细胞增生症李斯特菌的研究 总被引：2，自引：4，他引：2
用聚合酶链式反应(PCR)扩增hly基因,检测单核细胞增生症李斯特菌的纯培养物及其模拟污染的生猪肉、水和牛奶。41株单核细胞增生症李斯特菌的PCR结果呈阳性,而其他李斯特菌,包括英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌、西尔李斯特菌、威儿李斯特菌和格氏李斯特菌以及非李斯特菌均未出现特异性片段。这表明所扩增的hly基因3′末段850bp的DNA片段对单核细胞增生症李斯特菌具有较高的特异性。PCR对单核细胞增生症李斯特菌纯培养物的检测低限达10~5cfu·mL~(-1),对16hLEB增菌培养的模拟污染生猪肉、水和牛奶的增菌培养液用PCR捡测,结果检测生猪肉低限达400cfu·kg~(-1)、水和牛奶为400cfu·L~(-1)。整个检测过程只需24h。这表明PCR法对单核细胞增生症李斯特菌的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点。 相似文献
5.
鸡传染性支气管炎病毒S1基因的真核表达及其产物的免疫原性 总被引：4，自引：0，他引：4
采用RT-PCR扩增出鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M 41株的全长S1基因,并将其片段连接到pGEM-T载体,经酶切、PCR及序列测定表明,获得的S1基因ORF全长为1 659 bp,与G enB ank上公布的IBV M 41 S1基因序列一致。将S1基因与真核表达质粒pVAX 1连接,构建重组真核表达质粒pVAX 1-S1。将重组质粒转染COS-7细胞,采用间接免疫荧光检测转染细胞S1蛋白的表达。同时以重组质粒免疫小鼠,可诱导产生特异性针对IBV S1蛋白的抗体(P<0.01)。这为鸡传染性支气管炎新型基因工程疫苗的研制奠定了基础。 相似文献
6.
耐盐基因HAL1的克隆及植物表达载体的构建 总被引：2，自引：0，他引：2
对编码调节离子转运蛋白的基因HAL1进行克隆、序列测定,并对植物表达载体进行构建。基因测序分析表明：该基因含有885个核苷酸,与GenBank上公布的HAL1基因的核苷酸同源性为99.30%,氨基酸序列同源性为99.32%。利用HindⅢ和XbaⅠ切点插入质粒pBY505的Actin启动子与PIN终止子之间,构建成适宜于直接转化法转化植物的表达载体pBHAL1。 相似文献
7.
用Trizol分别提取4～6周龄白莱航鸡、狼山鸡、大骨鸡、北京油鸡、仙居鸡、茶花鸡、固始鸡和隐性白羽鸡胸腺细胞的总RNA，再用Oligo-dT纤维索富集mRNA后，用RT-PCR分别扩增出鸡CD4和cD8α基因cDNA。将PCR产物克隆进T载体后测序。序列分析显示不同品种鸡的CD4 cDNA序列完全一致；中国地方品种鸡与国外品种的白莱航鸡、RPL7系鸡在CD8α胞外区有6～13个氨基酸的差异，仙居鸡与其他5个中国地方品种鸡在CD8α胞外区有4～5个氨基酸的差异，狼山鸡、北京油鸡和隐性白羽鸡CD8α cDNA的核苷酸序列及推导的氨基酸序列完全一致。这些结果表明，中国地方品种鸡CD4基因序列高度保守；中国地方品种鸡与国外品种鸡的CD8α cDNA序列之间具有遗传多态性，而中国地方品种鸡之间CDSα cDNA序列遗传多态性低，为进一步研究CD4分子和CD8α链的结构和功能提供了条件。 相似文献
9.
猪肺炎支原体特异性蛋白P36基因的克隆与表达 总被引：4，自引：0，他引：4
根据Genbank中猪肺炎支原体P36基因序列设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出猪肺炎支原体ZCF23株特异性蛋白P36基因序列,经测序确认后,克隆人原核表达载体pGEX 6p-1的EcoR I和Xho I位点之间,转化宿主菌BL21,将筛选出的阳性克隆用IPTC诱导,通过SDS-PAGE电泳进行鉴定,结果表明,P36蛋白基因获得了表达,这为猪肺炎支原体免疫检测与诊断提供了重要条件. 相似文献
10.
绿色木霉（Ｙ９６３０１）、米曲霉（Ｌ９６２０１）、白地霉（Ｙ９６１０１）、产朊假丝酵母（Ｐ９６４０１）的生物学特性研究表明,Ｙ９６３０１在产酶培养基上具有较高的纤维素酶（ＣＭＣａｓｅ、ＦＰａｓｅ、βＧａｓｅ）活性,其中ＣＭＣ酶活力可达到４５１１ＩＵ,ＦＰ酶活力可达到１０４９ＩＵ,纤维素降解率为２６．９％。在三七糠培养基进行混菌发酵试验表明,Ｌ９６２０１、Ｙ９６１０１、Ｐ９６４０１是Ｙ９６３０１的最佳配伍菌株。在３０℃、ｐＨ６的条件下,培养２８ｈ可使产品纯蛋白含量达到２２．１３％,纤维素降解率为３０．７％。该发酵产品经喂猪初步试用,适口性好,可部分替代动物蛋白和植物蛋白。 相似文献