A型副鸡嗜血杆菌血凝素基因原核表达及间接ELISA方法的建立及应用     

张曼  韩飞 《动物医学进展》2017,38(12):18-22

原核表达A型副鸡嗜血杆菌(Haemophilus paragallinarum serotype A,Hpgserotype A)的血凝素蛋白HA,并以HA蛋白为包被抗原,建立血清间接ELISA检测方法。克隆Hpg HA基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中进行重组HA蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化,并进行Western blot鉴定;用纯化后的HA蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清间接ELISA检测方法,并进行特异性、灵敏度和重复性试验,最后对临床样品进行检测。原核表达获得大小约为37ku的重组HA蛋白;Western blot结果表明重组蛋白具有良好的特异性和抗原反应性。Hpg间接ELISA优化反应条件为:抗原包被量每孔500ng,血清以1∶200倍稀释作用1h,酶标二抗以1∶2 500倍稀释作用1h,TMB显色时间为10min。在该优化条件下,OD_(450)≥0.34为阳性,反之为阴性;特异性试验结果表明对鸡新城疫病毒、禽流感病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌阳性血清检测均为阴性;对85份阳性血清进行检测,敏感性为98.8%;重复性试验结果表明,批内和批间OD_(450)值的变异系数分别1.5%~3.7%和6.5%~8%。用本试验建立的方法对临床上215份鸡血清样品进行检测,阳性率为25.1%。说明建立的ELISA检测方法可用于Hpgserotype A抗体水平的检测。  相似文献   

RACE法扩增梅花鹿β-防御素-1(siBD-1)全长cDNA     

唐娟  金鑫  张曼  侯永跃  李军燕  田巧珍  刘骄  王云鹤  杨银凤 《中国畜牧兽医》2017,44(3):635-643

为了获得梅花鹿β-防御素-1（sika deer β-defensin-1,siBD-1）cDNA全序列,本试验以梅花鹿舌黏膜组织内提取的总RNA为模板,根据前期已获得的siBD-1 cDNA的已知部分序列设计引物,采用5'-RACE和3'-RACE技术分别扩增5'-和3'-末端序列,将此扩增产物克隆入pMD18-T载体,进行PCR、双酶切鉴定及序列测定与分析。结果表明,成功克隆出长度约为172和299 bp的siBD-1 cDNA 5'-和3'-末端序列,从而得到418 bp的siBD-1 cDNA全序列（GenBank登录号：HM588696.1）,其中包含89 bp 5'-非翻译区（UTR）、192 bp的开放阅读框（ORF）、终止密码子TAA、118 bp的3'-UTR和Poly（A）16。同源性比对结果显示,siBD-1 cDNA与水牛的肠防御素（BEBD）同源性最高,为90.6%,与牛（EBD、LAP、TAP、BNBD-4）、山羊（GBD-1、GBD-2）、驯鹿（reBD-1）、绵羊（sBD-1、sBD-2）和骆驼（caBD-1）的防御素cDNA的同源性较高,分别为83.2%、83.1%、87.3%、87.0%、87.5%、87.5%、84.4%、79.9%、77.1%和70.5%;与马（hoBD-1）和猪（pBD-1）的同源性较低,为60.3%和72.4%;而与人（hBD-2）的同源性最低,为16.0%。siBD-1成熟肽由38个氨基酸残基组成,其中包含9个带正电荷的氨基酸残基。  相似文献   

镉处理对水稻镉安全材料的镉积累及转移特性的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

张曼  张锡洲  李廷轩  余海英  张路  黄富  张翼 《农业环境科学学报》2017,36(2):223-229

采用土培试验,以前期筛选出的水稻Cd安全材料D62B为试验材料,普通材料Luhui17为对照材料,研究水稻Cd安全材料对Cd的转移特性以及不同叶位对Cd的积累差异。结果表明:在不同Cd处理浓度下,D62B生长受到了一定程度的抑制,且各器官生物量均随Cd处理浓度的增加而显著降低。在分蘖期、抽穗期和成熟期,当Cd处理浓度为8 mg·kg~(-1)时,D62B生物量分别较1mg·kg~(-1)Cd处理降低了43.74%、45.72%和40.24%。D62B地上部各器官Cd含量在不同生育期均显著低于Luhui17,且成熟期穗部Cd含量仅为Luhui17的44.52%~54.59%;D62B根系对Cd的滞留率在不同生育期均大于Luhui17,茎叶-穗的转移系数显著低于Luhui17。抽穗期,D62B上部3片功能叶(简称3片功能叶)的Cd含量在不同Cd处理下均显著低于普通材料Luhui17,其积累量则在4 mg·kg~(-1)和8 mg·kg~(-1)Cd处理浓度下显著低于Luhui17,分别为Luhui17的72.10%和78.00%,且倒2叶Cd积累量差异最大。据此认为,D62B根系对Cd较强的固持作用以及抽穗期3片功能叶低Cd积累量是其籽粒Cd含量较低的主要因素之一,这为后期水稻Cd低积累品种的培育及推广应用提供理论依据。  相似文献   

卵黄离心及精液透析预处理对猪精子冷冻效果的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

韩飞  刘小林  张曼  池鸣 《西北农业学报》2010,19(5):20-23

从卵黄离心处理和精液透析两方面对现有猪精子冷冻方法进行优化。分别采用两种离心方案除去卵黄中大颗粒物质,研究卵黄离心处理对猪精子冷冻效果的影响;在精液冷冻预处理的第一阶段降温平衡中,将包含精浆的猪精液在大体积稀释液中进行透析,研究透析方法对猪精子冷冻效果的影响。结果发现,对卵黄进行离心以及对包含精浆的精液采用透析处理均能明显改善猪精子冷冻效果(P0.05)。  相似文献   

桂蜜12号厚皮甜瓜砧木筛选试验   总被引：1，自引：0，他引：1  

高忠奎  刘文君  何忠  张曼  程亮  汤丹峰  吴志雄  陈庆芳 《广西农业科学》2013,(4):649-652

【目的】研究不同白籽南瓜砧木对桂蜜12号厚皮甜瓜抗病性、生长势、产量和果实品质的影响,筛选出桂蜜12号厚皮甜瓜的适宜嫁接砧木。【方法】以日本南瓜、扎合木、光典2号和雪中甲4种白籽南瓜为嫁接砧木,在砧木一叶一心、接穗子叶展平时采用斜顶插接法嫁接,坐果后测量植株节长、茎粗、叶片大小等生理指标,收获时测定果实单果重及可溶性固形物含量。【结果】各嫁接组合与对照,以及嫁接组合间对枯萎病的抗性无显著差异,其中以扎合木和雪中甲为砧木时嫁接苗未受枯萎病菌侵染;嫁接后显著降低了嫁接苗第1～10节的长度、第17叶叶长、平均单果重和果实中心可溶性固形物含量,但对摹粗的影响不显著。【结论】雪中甲较官作为梓密12号厚皮甜瓜的嫁接砧木。  相似文献   

瓜类与宿根甘蔗套种对产量品质的效应     

盘丰平  肖琳  张曼  颜晓  叶燕萍 《广西农学报》2013,28(3):8-13

研究瓜类与宿根甘蔗不同的套作模式对瓜类、甘蔗产量品质的影响,为瓜类合理套作甘蔗提供科学依据。方法:以广西农科院蔬菜所育成的桂蜜2号薄皮甜瓜、丰成2号蜜本南瓜与桂糖21号宿根蔗进行套种,研究适合的瓜类与宿根甘蔗套种模式。结果:甘蔗行距为1.1m的常规行距套种甜瓜,甘蔗的产量最高,为5470.39kg/667m2,甘蔗蔗糖、锤度、重力纯度、蔗汁蔗糖分等甘蔗品质指标最优分别为11.84%、14.72、86.14%和14.15%,同时提高甜瓜的品质。甘蔗常规行距套种瓜类的产量品质比套种在宽窄行距的瓜类产量品质要高,套种在1.1m常规行距的南瓜和甜瓜比套种在宽窄行距的产量分别高13.10%、18.14%,可溶性固形物的含量分别高14.59%、19.24%,南瓜的维生素C含量高24.54%和1.08%,β—胡萝卜素含量则高7.5%。与新植蔗套种瓜类有相同的趋势。建议生产上采用1.1m的常规行距种植甘蔗与甜瓜套种。  相似文献   

西瓜核心种质遗传多样性分析及指纹图谱构建     

徐彦刚  姚协丰  李良俊  徐锦华  任润生  张曼  刘广  娄丽娜  朱凌丽  侯茜  徐建  羊杏平 《分子植物育种》2021,19(1):305-317

深入了解西瓜核心种质资源的群体结构及遗传多样性,可以准确指导亲本间杂交组合的有效配置,避免具有相似遗传背景材料的组合,以便提高育种效率。据此,本研究通过采用45对具有多态性的SSR标记对不同来源的78份西瓜核心种质进行了多元统计分析。结果表明,45个SSR标记共检测出175个位点,其中具有多态性位点数为165个,多态性比率达95.41%,且每对引物平均检测到等位基因位点3.67个,PIC大小范围在0.049~0.781之间,平均值为0.415,其有效等位基因数(Ne)、期望杂合度(He)、观测杂合度(Ho)、多样性指数(I)及Nei's基因多样性指数(H)在该群体水平上分别为2.258、0.479、0.521、0.850和0.476,同时筛选出了28对多态性高、带型稳定、易于统计的核心引物,构建了78份西瓜核心种质的SSR指纹图谱。群体结构分析表明,78份西瓜核心种质资源划分为2大类群和4个亚群,其中来自不同地域的美国材料和日本材料分别独立趋于2大类群中,而中国种质材料普遍交叉分布于2大类群中,且各亚群之间存在着明显的基因交流,分子方差分析表明种质间遗传多样性主要存在于品种间和居群间。  相似文献   

非洲菊鲜切花家庭保鲜液的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

郝福玲  吴永梅  张曼 《安徽农学通报》2007,13(6):58-59

对一些常见的生活用品在非洲菊保鲜方面的作用进行实验研究,并对结果进行科学分析.结果表明最佳组合为:12片·L-1阿司匹林+36 mL(4盖)·L-1果汁+2滴·L-1洗洁精+14.4 g(2盖)·L-1糖.  相似文献   

不同性别类型苦瓜基因组DNA提取及RAPD标记初步研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

邓俭英  王绪  方锋学  张曼  孙德利 《广西农业科学》2007,38(3):223-226

采用改良的CTAB法成功地提取了不同性别类型苦瓜品种的基因组DNA,作为PCR扩增反应模板进行RAPD分析。结果表明,从200个10bp随机寡核苷酸引物中筛选到2个引物S30和S66,其可以在全雌性品种X-黑-d-d稳定地扩增出特异性条带,为下一步克隆苦瓜性别决定基因、探索苦瓜性别决定机理提供了试验依据。至于该特异性标记是否与苦瓜雌性性别有关,还有待进一步分析验证。  相似文献   

被动调节模式环路热管型光伏光热系统性能分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

李洪  张曼  孙跃  韩志鹏 《农业工程学报》2021,37(16):205-211

针对环路热管型太阳能光伏光热系统冬、夏季运行中的不利工况,该研究提出将空调排风引导至集热/蒸发器空气夹层的被动式调节方法,以进一步提升系统的太阳能利用效率。基于质量、动量和能量守恒定律,借助ANSYS Fluent软件建立了被动式调节模式下集热/蒸发器的数学模型,模拟分析了该调节方法对热管循环启动和系统性能的影响,通过室外试验验证了模型的准确性。研究结果表明,夏季工况,采用低档风速调节更有利于维持热管运行,而高档风速则更利于光电效率的提升;与调节前的系统相比,高、中、低档风速作用下的日均光电效率分别提高了8.4%、5.7%和3.5%,日发电量增加了8.0%,5.3%和3.5%。对不同调节策略的研究表明,第一阶段采用低档风速的运行策略可最大程度提升太阳能光热利用,同时保证较优的光电效率。冬季工况下,所提调节方法可有效缩短热管循环的启动时间,日出半小时内的有效集热量增加375.7%。因此,该调节方法对2种不利工况均有一定程度改善,调节策略对系统性能影响较大,应根据用户负荷需求进行选择与优化。  相似文献