嗜水气单胞菌气溶素和溶血素基因的克隆与结构预测     

刘明智  叶星  田园园  邓国成  马冬梅  白俊杰 《江西农业大学学报》2010,32(2)

从患出血病草鱼体上分离出1个菌株,传统分类学及16SrRNA基因鉴定其为嗜水气单胞菌,人工感染实验显示该分离菌株为强毒株。克隆该菌株的气溶素(aerolysin,aerA)基因和溶血素(hemolysin,hlyA)基因,序列分析显示这2个基因只有46.7%的同源性。Blast分析显示,hlyA基因与GenBank上已登录的hlyA序列具有较高的同源性,而aerA基因与已登录的aerA基因以及一些hlyA序列也具有较高的同源性。对与aerA基因同源性较高的这些hlyA序列进行结构域预测,发现它们均具有APT结构域和气溶素结构域,说明它们实际上应是aerA基因,只是命名上与hlyA基因混淆。用DNAstar软件预测aerA和hlyA的抗原区,显示它们均具有很好的抗原性。用特异性引物检测菌株的aerA基因和hlyA基因,结果显示2株毒力株均有特异条带,而无毒株则未扩增到特异条带,说明aerA和hlyA有可能作为鉴定嗜水气单胞菌毒力菌株的标记。  相似文献   

罗非鱼β-肌动蛋白基因启动子的分离及其启动子活性的初步检测     

郁二蒙  叶星  王海英  白俊杰  夏仕玲  劳海华  卢迈新 《农业生物技术学报》2008,16(2):242-247

采用高保真PCR技术从尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）基因组中分离了β-肌动蛋白（β-actin）基因片段（GenBank登录号：EF026001）。序列分析显示该片段包括长为1643bpβ-actin基因5＇端侧翼区的启动调控区和90bp的部分转录区序列。启动调控区包括一段长为108bpβ-actin基因上游调控序列、β-actin基因不翻译的第1个外显子和第1个内含子。上游调控序列中含有与转录活性密切相关的作用元件：CAAT box,TATA box和CArG box,分别位于转录起始位点上游的-92、-29和-62处。将尼罗罗非鱼β-actin基因的启动调控区定向克隆到不含启动子的红色荧光表达载体pDsRed2-1中,构建了重组荧光表达载体。重组载体经EcoRⅠ线性化后,采用显微注射技术将其注射到唐鱼（Tanichthys albonubes）的受精卵中,利用荧光显微镜观察外源基因增强型红色荧光蛋白基因（DsRed2）在唐鱼中的表达。结果表明,在荧光显微镜下以及普通解剖镜下均可观察到红色荧光,说明本实验分离到的罗非鱼β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能。  相似文献   

广东鲂精子主要生物学特性的研究   总被引：17，自引：2，他引：15  

潘德博  许淑英  叶星  谢刚  庞世勋  祁宝伦  苏植逢 《中国水产科学》1999,6(4):111-113

广东鲂是珠江水系和海南水域特有名贵鱼类。有关广东鲂精子的主要生物学特性的研究在国内尚为空白,本文对此进行了较深入的研究。收稿日期：１９９８－１１－０７１　材料和方法１．１　材料实验鱼取于本所性成熟雄鱼,抹干鱼体生殖孔处的水分,后用干洁注射器吸取刚挤出的新鲜精液少量。观察精子活力的样品即取即用,供电镜观察精子构造的样品按电镜常规固定法和制片法进行,用ＪＥＭ－Ｔ３００扫描电镜和ＪＥＭ－１００ＣＸⅡ透射观察和拍照。１．２　方法１．２．１　精子活力的观察　用干净注射器针头挑取微量精液于载玻片上,滴加实验…  相似文献   

草鱼成纤维细胞gcngr1基因的表达分析     

焦真真  田园园  孙成飞  董浚键  姜鹏  叶星 《南方水产科学》2017,(5):55-62

Ngr1(nogo-66 receptor)是在哺乳类上发现的一种神经元受体,可调节轴突的可塑性并抑制损伤中枢神经系统(CNS)的再生,最新研究还发现它是哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian reovirus)的神经受体。草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)可引发草鱼(Ctenopharyngodon idellus)出血病导致高死亡率,开展GCRV受体相关研究可有助于了解病毒的致病机制。该研究在草鱼吻端成纤维细胞(PSF)中克隆到草鱼ngr1 c DNA序列(下文简称为gcngr1),发现其与哺乳动物呼肠孤病毒神经受体基因Ngr1有相似的结构序列;采用q RT-PCR方法检测该基因在PSF细胞的表达情况,结果显示受草鱼呼肠孤病毒(GCRV-GD108株)感染后gcngr1 m RNA的表达量显著上升,与病毒的增殖趋势基本一致;病毒经病毒抗体孵育后再感染PSF细胞,细胞中病毒的增殖水平下降,gcngr1m RNA的表达量也显著下降。该研究结果提示gcngr1与病毒的感染相关,为进一步分析gcngr1是否为GCRV神经元受体提供依据。  相似文献   

广东罗氏沼虾育苗中幼体大量死亡原因初探   总被引：3，自引：0，他引：3  

叶星  祁宝伦  潘德博 《中国水产科学》1998,5(3):119-121

罗氏沼虾（Ｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉ）育苗已有一定历史,育苗技术也日趋完善,但近年来广东罗氏沼虾育苗过程中却常出现幼体大量死亡的情况,严重影响生产。由于罗氏沼虾的幼体发育经历复杂的变态过程和较长的时间,许多因子都可能影响其发育变态...  相似文献   

大口黑鲈3个养殖群体的遗传多样性分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙成飞  谢汶峰  胡婕  董浚键  田园园  吴灶和  叶星 《南方水产科学》2019,(2):64-71

该研究通过毛细管电泳法筛选微卫星引物,从GenBank的51对微卫星引物中共筛选出12对具有特异性和多态性的引物,并合成荧光标记引物,对广东大口黑鲈(Micropterus salmoides)主养区3个养殖群体进行STR分型,以分析其遗传多样性。结果显示所检测的12个微卫星位点中,3个位点呈现高多态性,4个具有中度多态性,其余5个位点为低多态性。3个群体的遗传多样性水平偏低,期望杂合度(He)分别为0.312 5、0.360 6和0.328 4。群体间遗传分化指数及AMOVA分析显示,群体间遗传分化属于低水平,遗传变异有85.83%是由群体内不同个体间的差异造成的。群体间遗传距离分析显示,3个养殖群体间的遗传距离和遗传相似度比较接近。遗传结构分析表明3个养殖群体来自于同一个亚群。研究结果提示现阶段中国大口黑鲈养殖群体的遗传多样性已显著下降,因此在选育种过程应高度重视提高与维持种群遗传多样性的问题。  相似文献   

大口黑鲈MyoD基因结构和单核苷酸多态性位点的筛选   总被引：6，自引：0，他引：6  

于凌云  白俊杰  叶星  李胜杰  李小慧 《水产学报》2009,33(1):1-8

本研究采用PCR技术和基因组步移技术从大口黑鲈基因组DNA中扩增得到MyoD基因及其5’调控区序列。该基因序列全长3797bp,其中5’调控区长1077bp,MyoD基因转录区由3个外显子（分别为591bp、81bp和78bp）和2个内含子（分别为1077bp和486bp）组成。5’调控区含有与肌肉特异性基因转录密切相关的转录调控元件E box、肌细胞增强因子2（MEF2）、肌肉特异性金属硫蛋白结合位点（MTBF）及一些转录反应调控元件（TATA box 、OCAAT box、OCT1、PRE、AP4、Pit1）。运用PCR-SSCP技术和直接测序法进行大口黑鲈MyoD基因SNP位点筛选,结果表明MyoD基因序列中存在7个突变点,均位于内含子上。养殖群体中这7个突变点分析结果显示突变比例范围在0.042～0.353之间。本研究结果为SNPs位点与大口黑鲈生长性能关联分析奠定了基础。  相似文献   

大口黑鲈hepcidin真核表达载体构建及表达的初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

李胜杰  白俊杰  刘碧莲  叶星  于凌云  全迎春 《淡水渔业》2009,39(2)

将大口黑鲈(Micropterus salmoides)抗菌肽hepcidin cDNA定向插入真核表达载体pPICZαA,通过SacI酶切线性化重组表达质粒pPICZαA-hepcidin,电转化毕赤酵母P.pastoris GS115,PCR扩增筛选,甲醇诱导表达等进行了hepcidin真核表达工程菌株的构建及诱导表达。结果显示:hepcidin cDNA成功插入表达载体pPICZαA,并整合到酵母基因组中;经甲醇诱导,RT-PCR检测显示hepcidin cDNA在酵母细胞中成功转录。  相似文献   

大口黑鲈内含子1上SNP G208A的CRS-PCR检测方法     

李小慧  白俊杰  胡隐昌  叶星 《水生态学杂志》2009,30(5):144-148

创造限制酶切位点PCR法是应用引物错配技术结合单核苷酸多态性（SNP）而配合成一个酶切位点,使SNP可用于PCR—RFLP分析的一种方法。应用CRS—PCR技术检测了大口黑鲈（Micropterus salmoides）IGF—I基因内含子1上SNPG208A的多态性,并详述了CRS—PCR错配引物的设计方法,CRS—PCR引物设计和应用的注意事项,以促进CRS—PCR单核苷酸多态检测方法在水产动物研究领域的应用。  相似文献   

盐度对尖吻鲈卵子孵化及幼苗存活的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

叶星  曾素梅 《淡水渔业》1992,(4):39-41,30

<正> 一、材料与方法 (一) 不同盐度的孵化试验共设15个不同盐度组,分别为0、2、3、4、5、10、15、20、25、30、33、35、37、38、40‰。取天然海水用细密筛绢(150目)过滤,充分曝气,加井水配成不同盐度的试验用水。高盐度组的用水则用天然海水蒸发浓缩而  相似文献