罗非鱼AMH基因的原核表达及多克隆抗体制备     

丁炜东  曹哲民  曹丽萍 《水产学报》2010,34(5):656-663

抗苗勒氏管激素(anti-mullerian hormone, AMH),也称苗勒氏管抑制物质(mullerian inhibiting substance, MIS),为肽类生长因子,属于TGF-β生长和分化因子家族。为研究AMH对奥利亚罗非鱼性腺发育的作用,应用DNAstar软件分析罗非鱼AMH基因的抗原性,选择抗原性较强的22～243氨基酸作为目的片段构建了AMH的原核表达载体并进行融合表达。首先利用RT-PCR方法从性腺中扩增出长约663 bp的目的序列AMH基因,克隆至T载体中,经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后将此片段克隆到表达载体pGEX-5x-1中构建重组表达质粒pGEX-AMH,并在大肠杆菌BL21中获得了高表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的38.7％。菌体经溶菌酶裂解,制备无细胞抽提液,GSTrap FF column柱层析后得到分子量为49 ku单一条带的目的蛋白。目的蛋白经FactorXa酶切裂解,GSTrap FF column过柱纯化后得到纯化的AMH蛋白,分子量为26 ku,浓度为2.6 mg/mL。以每只20 μg的剂量4次免疫ICR小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对AMH蛋白的血清抗体应答,免疫组抗体水平显著高于空白组(P<0.05),且加强免疫第5周后抗体效价为0.672±0.411,达到高峰值,血清效价为1∶2 000。试验结果表明表达产物具有免疫原性,可以刺激机体产生免疫应答。  相似文献   

建鲤体内外急性肝损伤模型的建立     

曹丽萍  贾睿  丁炜东  杜金梁  殷国俊 《安徽农业大学学报》2012,39(6):885-889

以四氯化碳(CCl4)为肝毒剂,建立建鲤体内外急性肝损伤模型.体内,采用腹腔注射法造模,按0.1 mL/10g一次性分别注射0、6.25％、12.5％和15％ CCl4-橄榄油溶液(v/v),于造模后24 ～ 144 h取血,测定建鲤血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)水平;体外,0、2、4、8、16、32 mmol·L-1 CCl4分别作用于原代培养的建鲤肝细胞4h后,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存状况,同时收集细胞培养上清,测定其GPT、GOT、LDH、MDA、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)活力.结果显示,12.5％、15％ CCl4-橄榄油溶液腹腔注射建鲤24 h后即能引起血清中GOT、GPT和MDA显著升高,15％ CCl4溶液造模组48 h能显著提高血清中LDH水平,4个指标均在CC14作用96 h后恢复到接近正常水平;8～ 32 mmol·L1 CCl4作用体外培养肝细胞4h时,细胞上清中GPT、GOT、LDH和MDA含量显著升高、SOD和GSH活力显著下降,肝细胞存活率显著下降,分别为空白对照组的66.29％、54％和37％且有剂量依赖性.结果表明,分别采用15％ CCl4-橄榄油腹腔注射建鲤72 h和8 mmol·L-1 CCl4作用体外培养肝细胞4h可以构建体内外急性肝损伤模型.  相似文献   

新形势下齐齐哈尔市生态建设思路     

曹丽萍 《防护林科技》2016,(3):101-102

齐齐哈尔地处黑龙江省西部,是中国重要的老工业基地、商品粮基地、畜牧业基地和绿色食品基地。文章阐述了在生态文明建设的新形势下,齐齐哈尔市生态建设的布局和目标,该目标的实现将有效遏制西部风沙的危害,保障齐齐哈尔绿色食品基地的安全。  相似文献   

奥利亚罗非鱼(♀)×鳜(♂)杂交后代及其双亲的染色体核型分析   总被引：9，自引：0，他引：9  

曹丽萍  丁炜东  贾永义  夏德全  吴婷婷 《农业生物技术学报》2006,14(2):187-190

采用人工授精法以奥利亚罗非鱼(Oreochromis aurea)为母本，鳜(Siniperca ahuasti)为父本，获得了能正常发育的后代。利用微量全血培养法对奥利亚罗非鱼、鳜及它们杂交后代的染色体数目和核型进行了分析，结果表明, 奥利亚罗非鱼染色体数目为2n =44，核型公式为 6sm+24st+14t，染色体臂数(NF)=50；鳜鱼为2n =48，核型公式为 8sm+4st+36t，NF=56；杂交后代为2n =44，核型公式为 6sm+26st+12t，NF=50。经对比分析，杂交后代与奥利亚罗非鱼的核型相似。  相似文献   

菇（艹娘）高产栽培技术     

曹丽萍 《北方园艺》2004,(1):57-57

伴随着种植业结构调整步伐的加快 ,黑龙江省绥化市绥胜镇看准时机 ,把小菇 艹娘 产业作为突破口。使全镇种植面积达 333hm2 (公顷 )以上 ,6 6 7m2 (平方米 )产 10 0 0kg(公斤 ) ,按 2 0 0 3年市场平均价格 1.5元 /kg(公斤 )计算 ,6 6 7m2 (平方米 )收入 30 0 0元 ,去掉成本 6 6  相似文献   

玉米芯栽培平菇技术     

曹丽萍 《北方园艺》2002,(5):72-72

平菇栽培在北林区有悠久的历史,用玉米芯做培养料种平菇,是近几年发展起来的具有成本低、原料易找、效益高、致富快的一项新技术,特别适合黑龙江省冬季种植,农民可以改变"猫冬"习惯,把冬闲变成冬忙.采用日光节能温室,在自家庭院就可以搞.200m2(平方米)温室,10月份～次年4月份,每公斤1.60元计算,纯收入可达15000元左右.现将玉米芯种平菇技术简介如下.  相似文献   

捷克林林的盈利经营与分类经营     

梁亚森  曹丽萍 《林业月报》2001,(12):42-42

  相似文献   

澳大利亚保护自然成效显著     

曹丽萍 《林业月报》2003,(6):44-44

  相似文献   

一代区亚洲玉米螟全程绿色防控技术的防治效果研究     

罗宝君  赵秀梅  王连霞  曹丽萍 《黑龙江农业科学》2016,(7):41-45

为有效控制亚洲玉米螟的危害,减少农药的残留和污染,采用投射式杀虫灯加挂性诱剂、田间释放赤眼蜂和喷施Bt可湿性粉剂4项技术,分别在亚洲玉米螟一代区的越冬成虫羽化期、产卵期和初孵幼虫期设置三道防线,全程绿色防控亚洲玉米螟。结果表明:全程防控技术平均防效达91%以上,玉米挽回产量损失达20%以上,玉米增产达17%以上,投入产出比大于1∶20,应用亚洲玉米螟全程绿色防控技术能高效控制亚洲玉米螟的危害,大幅度提高玉米产量和质量,满足玉米生产的高标准需求。  相似文献   

CCl₄对建鲤肝细胞DNA的毒性作用及对CYP3A基因表达的影响     

曹丽萍  贾睿  杜金梁  丁炜东  殷国俊 《水产学报》2013,37(10):1452-1459

四氯化碳(CCl₄)作为一种经典的肝脏毒物,被广泛应用于哺乳动物的肝损伤模型构建及保肝药物筛选。低、中、高浓度的CCl₄橄榄油溶液(6.25%、12.50%和15.00%,0.01 mL/g)腹腔注射建鲤72 h后,采用单细胞凝胶电泳和肝组织病理切片技术,测定血清中肝损伤生化酶来考察CCl₄对肝细胞DNA的毒性作用;同时采用实时荧光定量PCR法测定肝组织中CYP3A表达量的变化。结果显示,6.25%CCl₄作用建鲤72 h后肝组织切片检查没有发生明显的改变,对血清中酶学指标无显著影响,CYP3A的mRNA表达量与空白对照组相比也没有显著变化,而彗星实验结果显示该浓度的CCl₄作用肝细胞后,尾长、TDNA、尾矩及Olive 尾矩等DNA损伤指标与对照组相比,显著增大;随着CCl₄作用浓度的增加,肝细胞肿胀、广泛空泡变性,出现核固缩和核溶解等组织学的变化,12.50%和15.00% CCl₄均能显著引起血清中谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)水平升高,15.00% CCl₄能显著促进乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)大量生成;彗星实验中各项损伤指标也随着染毒剂量增加而极显著增大;同时,12.50%和15.00% CCl₄组的CYP3A mRNA表达量显著降低。结果表明,CCl₄对建鲤肝细胞DNA具有毒性作用,在实验的浓度范围内,CCl₄ 能抑制CYP3A mRNA表达;随着CCl₄作用浓度的增大,血清酶、病理切片和彗星实验结果表现出剂量效应,并有一定的一致性,彗星实验表现出更高的灵敏性。  相似文献