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腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK),在真核细胞生物中广泛存在,是调控机体能量代谢的关键酶.本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)AMPKα基因的有效siRNA干扰载体,并探讨AMPKα基因对脂肪分解关键酶基因表达的影响.根据猪AMPKα基因(GenBank登录号:NM-001167633)全长cDNA序列,设计合成其特异性发夹siR-NA干扰片段,将其克隆插入pSilencer 4.1-CMV neo Vector干扰载体中,构建猪AMPKα基因的siRNA真核表达载体RA1和RA2,并通过PCR、双酶切和测序对其进行鉴定.构建成功后转染猪肌内脂肪前体细胞并检测其干扰效果及对脂肪分解关键酶一一激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)、脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)和肉毒碱棕榈酰转移酶(carnitine palmitoyl transferase,CPTl)基因表达的影响.结果表明,所构建的猪AMPKα基因的特异性siRNA表达载体RA1和RA2均可降低猪AMPKα mRNA表达(P<0.05),而且RA2干扰效果优于RA1.用RA2干扰AMPKα后,猪肌内脂肪前体细胞中AMPKα及脂肪分解关键酶HSL、ATGL和CPT1基因表达量显著下降(P<0.05).提示,抑制AMPKα基因表达后,猪肌内脂肪前体细胞中脂肪分解和脂肪酸氧化速率降低.本研究结果为深入探讨AMPKα对猪脂肪代谢的影响机制及通过营养调控基因表达进而调控猪体脂沉积提供基础资料. 相似文献
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从杜长大断奶仔猪背最长肌中克隆肌红蛋白(Mb)基因的部分序列并探讨甘氨酸铁对其表达的影响.从仔猪背最长肌提取总RNA,用RT-PCR扩增Mb基因,获得1条约335 bp的片段,以pGEM-T Easy为载体,将该基因片段克隆到大肠杆菌 (Escherichia coli) DH5α中.从筛选的阳性克隆中分离出Mb基因,测定其序列.分析表明,该片段为Mb cDNA的部分序列,编码111个氨基酸组成的多肽.研究得到的基因片段与报道的猪背最长肌Mb cDNA部分序列相似性达到99%.以Mb基因片段克隆为基础,构建优化的半定量RT-PCR法,以18S rRNA为内标,研究不同甘氨酸铁添加量对Mb基因表达的差异.结果表明,与对照组相比,饲养35 d后,60、90和120 mg·kg-1甘氨酸铁组(以铁计)仔猪背最长肌Mb的相对表达量增加了97.35%、108.87%和86.17%(P<0.05).据此认为,甘氨酸铁在一定程度上可以调控肌红蛋白基因表达,改善肉色. 相似文献
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抗菌肽与抗生素对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的体外协同抗菌效果研究 总被引:2,自引:1,他引:1
本试验旨在研究抗菌肽与抗生素联合使用对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌的作用效果.通过最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)测定,联合药敏试验,研究牛乳铁蛋白肽(Lactoferricin B,LFcin B)、天蚕素A(Cecropin A)及金霉素、新霉素对大肠杆菌(Escherichia coli ATCC25922)、金黄色葡萄球菌(Staphylo-coccus aureus ATCC25923)、猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis CMCC50013)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa CMCC10014)的体外协同抗菌效应.结果表明:Cecropin A与LFcin B联合使用对所试革兰氏阴性菌均表现为协同作用,两者联用时的MIC分别是单用时的1/4和1/8~1/4;金霉素与LFcin B联合使用对革兰氏阴性菌和阳性菌表现为协同作用,两者联用时的MIC是单用时的1/8~1/4;另外,Cecropin A与金霉素联合使用对革兰氏阴性菌也表现为协同作用.4种药物的两两合用对受试菌株均不表现拮抗作用.结果提示,LFcin B、Cecropin A及金霉素联合使用对革兰氏阴性菌及阳性菌具有协同作用. 相似文献
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动物营养和饲料科学研究方法发展趋势 总被引:6,自引:0,他引:6
自法国科学家拉瓦锡于 1 783年第一次进行动物测热试验算起 ,动物营养和饲料科学已走过了 2 2 0年的发展历程。在 2 2 0年的发展历史中 ,动物营养和饲料科学的研究方法从最初的经验阶段即描述阶段正在逐渐向控制阶段发展。也就是说目前营养学的研究已不仅仅是停留在对营养规律的探讨上 ,而是正在向预测营养过程和控制营养过程的方向发展。1 由孤立静态的方法转向系统科学的方法动物营养和饲料科学从一开始就和物理、化学特别是生物化学紧密结合在一起。由于研究工作的早期受到当时占统治地位的机械唯物观点的影响 ,直到 2 0世纪 40年代动物… 相似文献
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我国畜禽生产的废弃物(以粪便为主)产生量很大,并且快速增长。据统计,1999年全国畜禽粪便产生总量约为19亿t,而我国当年工业固体废物为7.8亿t,畜禽粪便产生量是工业固体废弃物的2.4倍;到2000年,全国畜禽粪便达27亿t,是工业废弃物的2.7倍;估计到2010年,排放量将达45亿t。根据研究估计,我国畜禽粪便主要污染物COD、BOD、NH3-N、TP、TN的流失量分别为797.31万t、580.87万t、155.88万t、46.76万t和407.14万t, 相似文献
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动物源抗菌肽的研究现状和展望 总被引:3,自引:0,他引:3
动物源抗菌肽是机体先天免疫系统的重要效应分子,因其具有广谱高效抗菌活性、细胞选择性及不易产生耐药性等特点,一直被人们认为是抗生素的理想替代品.此外,由于动物体自身分泌的抗菌肽远未达到抑制细菌所需浓度,因此其生物学功能不仅局限于抗菌活性.大量研究表明,抗菌肽不仅具有抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗肿瘤等效果,在体内还表现出抗炎症反应、招募免疫细胞、促进上皮损伤修复、促进细胞吞噬细菌等重要作用.然而抗菌肽在一些方面的研究尚不透彻或存在争议,如抗菌肽是否存在耐药性以及通过重组表达技术生产的抗菌肽是否能安全有效地应用.关于抗菌肽的一些生物学功能与分子机制还有待系统深入的研究,如抗菌肽的构效关系、抗菌肽对益生菌的影响、抗菌肽与抗生素的互作效应、抗菌肽的稳定性及其吸收与代谢情况、营养物质调控内源抗菌肽的表达等.因此本文旨在从动物源抗菌肽的生物学功能、作用机制、稳定性与吸收、表达规律与营养调控、分子改良以及重组表达6个方面进行综述,为研发新型、高效、环保型抗生素替代品提供重要信息和策略. 相似文献
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本试验旨在建立高效、准确、快速测定富硒蛋白多糖中纳米单质硒含量的方法。将25 mg阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)Z0206产富硒蛋白多糖样品悬浮在3 mL蒸馏水中,在3 mgⅩⅣ型蛋白酶作用下超声处理30 min(37℃),将酶解液离心得到的沉淀物(纳米单质硒)在常温下经双氧水-盐酸(H_2O_2-HCl)体系消解,所得溶液直接经高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)分析[以PRP X100阴离子色谱柱对样品中的亚硒根离子(SeO_2-3)进行分离,流动相组成为5 mmol/L柠檬酸水溶液(pH 4.5)],测得样品中纳米单质硒含量为2 439μg/g。以国家标准(GB/T 13883—2008)方法[样品以硝酸-高氯酸(HNO_3-HClO_4)体系消解处理,经氢化物发生-原子荧光(HG-AFS)分析]为对照,测得样品中纳米单质硒含量为2 450μg/g。2种方法的测定结果高度一致。与GB/T 13883—2008中描述的方法相比,采用本试验建立的氧化体系条件更温和、快速并且易于控制,适用于纳米单质硒的快速检测。 相似文献
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从体质量1、20、40、60、90kg左右的杜长大猪的肝脏组织中提取基因组RNA,RT—PCR扩增CuZnSOD基因,获得了1务255bp的片段,以pGEM—TEasyVector为载体,将该片段克隆到大肠杆菌(E.coli)中,筛选阳性克隆测定其序列,分析表明该片段与报道的猪CuZnSODcDNA部分序列同源性达到100%,编码85个氨基酸组成的多肽,是成熟肽的一部分。以CuZnSOD基因片段的克隆为基础,构建了优化的半定量RT—PCR法,以18SrRNA为内标,研究不同生长阶段猪肝脏组织中CuZnSOD基因mRNA表达的差异。结果显示,1kg左右猪肝脏组织中CuZn—SODmRNA表达水平较高,体质量1~20kg猪的肝脏组织中CuZnSOD基因表达量呈下降趋势,体质量40kg的猪又显著上升,到生长后期即体质量90kg左右,CuZnSOD基因表达量又急剧下降。 相似文献
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